李 劍,蔡建輝,張學(xué)軍,孫啟玉,金小平,申興斌,邢恩鴻

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院普外科,河北 067000;2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院胃腸外科,石家莊 050000;3.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中心實驗室,河北 067000;4承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科,河北 067000)

彈性蛋白與原纖維蛋白-1在腹股溝直疝及斜疝患者腹橫筋膜的表達(dá)

李 劍1,蔡建輝2,張學(xué)軍1,孫啟玉3,金小平4,申興斌4,邢恩鴻3

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院普外科,河北 067000;2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院胃腸外科,石家莊 050000;3.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中心實驗室,河北 067000;4承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科,河北 067000)

目的比較彈性蛋白和原纖維蛋白-1在腹股溝直疝及斜疝患者腹橫筋膜的表達(dá)與分布,探討腹股溝疝的發(fā)病機制。方法用免疫組織化學(xué)方法檢測行疝修補術(shù)的30例患者(直疝13例,斜疝17例)腹橫筋膜中彈性蛋白及原纖維蛋白-1的表達(dá)與分布。結(jié)果直疝患者腹橫筋膜彈性蛋白及原纖維蛋白-1含量較斜疝患者明顯下降(P＜0.05)。結(jié)論腹股溝直疝患者腹橫筋膜彈性蛋白與原纖維蛋白-1的表達(dá)異常。

彈性蛋白;纖維蛋白;疝,腹股溝;筋膜

腹股溝疝是外科最常見疾病之一,然而關(guān)于其發(fā)生的確切原因尚未完全闡明。近年來研究表明結(jié)締組織代謝異常參與了腹股溝疝尤其是直疝的發(fā)生[1-4]。腹股溝直疝患者腹橫筋膜的膠原含量明顯下降,同時彈性纖維的分布也失去原有規(guī)則性[4]。彈性蛋白和原纖維蛋白-1是彈性纖維的重要組成部分,本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)法對腹股溝直疝及斜疝患者腹橫筋膜中彈性蛋白和原纖維蛋白-1的表達(dá)與分布進(jìn)行研究,以期獲得對腹股溝疝病理生理的進(jìn)一步認(rèn)識。

1 資料與方法

1.1 一般資料 30例腹橫筋膜組織取自2008年12月至2009年10月在承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院行補片填充式無張力疝修補術(shù)患者。其中直疝13例(男 11例,女 2例),斜疝 17例(男13例,女4例),年齡28～67歲。入選病例排除吸煙患者,以及糖尿病、感染性疾病、惡性腫瘤患者等。

1.2 實驗方法

1.2.1 試劑 鼠抗人彈性蛋白單克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司,兔抗人原纖維蛋白-1多克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司,Max VisionTM即用型免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB顯色試劑盒均購于福建邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)檢測 腹橫筋膜取材在遠(yuǎn)離疝囊的相對正常的內(nèi)側(cè)腹橫筋膜處切取標(biāo)本0.7～1 cm2,10%多聚甲醛固定、石蠟包埋、切片、脫水后,3%H2O2室溫孵育 10 min,用PBS液沖洗,抗原修復(fù)。加入一抗(1∶100稀釋)50 μ L,室溫下孵育 60 min,PBS漂洗,每張切片加 50 μ L即用型 Max VisionTM試劑,室溫下孵育10～15 min,PBS液沖洗后,DAB顯色。蘇木素復(fù)染,脫水,透明,封片,光鏡下觀察攝片,陽性部位呈棕黃色,用Image Pro Plus 6.0軟件進(jìn)行分析,每張切片隨機取10個視野,測定每個視野累計光密度(IOD)值,以10個視野的平均值表示。以PBS溶液代替一抗作為空白對照。1.2.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,兩組間比較采用 t檢驗,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

直疝患者腹橫筋膜彈性蛋白排列紊亂,部分區(qū)域聚集、斜疝患者腹橫筋膜彈性蛋白和直疝相比排列較整齊,呈連續(xù)分布,見圖1。原纖維蛋白-1在直疝和斜疝患者腹橫筋膜的分布情況和彈性蛋白相似,見圖2。直疝患者腹橫筋膜彈性蛋白和原纖維蛋白-1含量明顯低于斜疝患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05,見表 1。

表1 彈性蛋白和原纖維蛋白-1在直疝及斜疝患者腹橫筋膜的表達(dá)( ±s)

表1 彈性蛋白和原纖維蛋白-1在直疝及斜疝患者腹橫筋膜的表達(dá)( ±s)

*:P＜0.05,與斜疝組比較。

檢測指標(biāo) 直疝組(n=13) 斜疝組(n=17)彈性蛋白(IOD) 2 526.762±701.736* 3 035.104±648.019原纖維蛋白-1(IOD) 2 265.223±574.555* 2 735.104±639.731

圖1 彈性蛋白在直疝及斜疝患者腹橫筋膜中的表達(dá)(×400)

圖2 原纖維蛋白-1在直疝及斜疝患者腹橫筋膜中的表達(dá)(×400)

3 討 論

人們對腹股溝疝的診治已有近500年歷史,然而其發(fā)生和修補后復(fù)發(fā)的確切原因仍未完全明了。目前認(rèn)為腹股溝斜疝發(fā)生的主要原因為先天性腹膜鞘狀突未閉及腹股溝內(nèi)環(huán)處的嵌閉機制削弱或喪失[5]。關(guān)于腹股溝直疝近年來國內(nèi)外學(xué)者從間質(zhì)結(jié)締組織方面對其進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)腹股溝直疝患者腹橫筋膜膠原含量明顯低于健康者和斜疝患者,認(rèn)為腹壁組織彈性及張力下降為直疝發(fā)病主要原因[3-4]。彈性纖維是腹橫筋膜中一個主要的不溶性細(xì)胞外基質(zhì)組分,它允許大范圍的可變形性和被動反沖力,賦予結(jié)締組織彈性,與膠原的韌性互補。最近,Pascual等[2]報道與彈性纖維形成密切相關(guān)的類賴氨酰氧化酶-1含量在直疝患者腹橫筋膜中明顯下降,低于斜疝患者和健康者,而斜疝與健康者組相比無明顯區(qū)別,表明除膠原代謝異常外,彈性纖維的破壞也參與了直疝的發(fā)生。彈性纖維的中心由無定型的彈性蛋白構(gòu)成,在彈性蛋白外圍包繞一層微纖維殼套?，F(xiàn)已證明彈性蛋白的變化與多種疾病有關(guān),如動脈瘤、盆底器官脫垂和應(yīng)力性尿失禁等。關(guān)于彈性蛋白在腹股溝疝的研究較少。原纖維蛋白-1是微纖維主要成分之一,參與組成彈性纖維。原纖維蛋白-1在人體組織內(nèi)廣泛存在,其基因的缺陷和敲除可以降低組織穩(wěn)定性,導(dǎo)致馬凡綜合征[6-7]。最近研究表明原纖維蛋白-1在轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)的釋放和激活方面起到重要作用[8-9],而TGF-β1具有多種生物學(xué)功能,能夠上調(diào)或抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MM P)類家族成員的表達(dá),并與其他因子相互作用,調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重構(gòu)。在切口疝患者的皮膚和肌肉筋膜及肥厚性瘢痕病患者的皮膚中均存在原纖維蛋白-1的異常分布[10-11],而其在腹股溝疝患者腹橫筋膜的分布情況尚未見報道。

本研究結(jié)果顯示,腹股溝直疝患者腹橫筋膜彈性蛋白和原纖維蛋白-1的含量明顯低于斜疝患者,且分布異常。腹橫筋膜彈性蛋白和原纖維蛋白-1的改變導(dǎo)致腹橫筋膜彈性下降,從而影響其抗擊腹內(nèi)生理和病理壓力的能力。腹橫筋膜彈性蛋白與原纖維蛋白-1的異常變化參與了直疝的發(fā)生。由于組織來源有限本文未與健康者腹橫筋膜比較,有待于進(jìn)一步研究。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2011.04.026

B

1671-8348(2011)04-0370-02

2010-10-12

2010-12-05)

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