楚廣民,龐 霞,高冬玲

(1.河南省腫瘤醫(yī)院病理科,鄭州 450008;2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科/河南省腫瘤病理重點實驗室 450052)

Caveolin-1蛋白及mRNA在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

楚廣民1,龐 霞2,高冬玲2

(1.河南省腫瘤醫(yī)院病理科,鄭州 450008;2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科/河南省腫瘤病理重點實驗室 450052)

目的探討窖蛋白1(Caveolin-1)蛋白及mRNA在食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)組織中的表達(dá)及其意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)及原位雜交方法檢測57例ESCC組織、34例癌旁不典型增生組織及57例正常食管黏膜組織中Caveolin-1蛋白及mRNA的表達(dá)。結(jié)果ESCC組織、癌旁不典型增生組織及正常黏膜組織中Caveolin-1蛋白的陽性表達(dá)率依次降低,分別為54.4%(31/57)、38.2%(13/34)和19.3%(11/57),組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);ESCC組織、癌旁不典型增生組織及正常黏膜組織中Caveolin-1 mRNA的陽性表達(dá)率依次降低,分別為64.9%(37/57)、47.1%(16/34)和 22.8%(13/57),組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);Caveolin-1蛋白及mRNA的表達(dá)均與ESCC的分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論Caveolin-1蛋白及mRNA表達(dá)與ESCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),可作為ESCC的一種標(biāo)記物,聯(lián)合檢測Caveolin-1蛋白及mRNA在評估ESCC預(yù)后方面具有一定的臨床價值。

窖蛋白1;腫瘤,鱗狀細(xì)胞;免疫組織化學(xué);原位雜交

窖蛋白1(Caveolin-1)是細(xì)胞膜上的一種支架蛋白,參與腫瘤形成和侵襲轉(zhuǎn)移等多種生物功能[1-3]。目前,對Caveolin-1在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用存在爭議,為了探討Caveolin-1在食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)組織中的作用,作者采用免疫組織化學(xué)及原位雜交方法,聯(lián)合檢測了Caveolin-1蛋白及mRNA在ESCC組織中的表達(dá),為ESCC診斷和治療提供新的線索。

1 資料與方法

1.1 一般資料 57例ESCC患者來自河南省腫瘤醫(yī)院,其中男32例,女 25例,年齡31～72歲,所有病例術(shù)前均無化療、放療及免疫治療史。所有標(biāo)本分別在無壞死癌灶、癌旁3 cm以內(nèi)及遠(yuǎn)端正常黏膜組織處取材,經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,連續(xù)切片,切片厚度 4～ 6 μ m,分別用于 HE、免疫組織化學(xué)及原位雜交染色。經(jīng)HE染色病理組織學(xué)證實,癌灶組織均為ESCC。按 WHO分類標(biāo)準(zhǔn)(1996)進(jìn)行組織學(xué)分級:高分化11例,中分化27例,低分化19例。浸潤至肌層20例,浸潤到外膜及鄰近組織37例;伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者39例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例。癌旁組織中34例為不典型增生。遠(yuǎn)端正常黏膜組織均為正常食管黏膜。

1.2 主要試劑 Caveolin-1兔抗人多克隆抗體為Santa Cruz產(chǎn)品,稀釋度為1∶400。SP免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。Caveolin-1 mRNA原位雜交試劑盒購自Clontech公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 采用SP法檢測,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,詳細(xì)步驟嚴(yán)格按SP試劑盒說明書操作,每批實驗同時設(shè)立陽性和陰性對照,用已知陽性切片作為Caveolin-1蛋白的陽性對照,以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.4 原位雜交染色 標(biāo)本經(jīng)新鮮配制二甲苯脫蠟,梯度酒精脫水后,用新鮮配制的0.5%H2O2室溫處理30 min,以滅活內(nèi)源性過氧化物酶;3%檸檬酸新鮮配制蛋白酶(0.01 g/L),37℃處理10 min,消化標(biāo)本DNA結(jié)合蛋白;每張玻片滴加20μ L不含探針的預(yù)雜交液(42℃),預(yù)雜交 4 h;加含探針(1 ng/L)的雜交液,42℃濕盒內(nèi)雜交12 h;用標(biāo)準(zhǔn)檸檬酸鹽(SSC)42℃清洗后,加SA-Bio-AP 37℃處理10 min;漂洗后加 BCIP/NBT,避光顯色2～4 h。以不含探針的標(biāo)本作陰性對照。

1.5 結(jié)果判定 Caveolin-1蛋白呈棕黃色主要定位于細(xì)胞質(zhì),Caveolin-1 mRNA呈紫藍(lán)色定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。結(jié)果判斷如下:高倍鏡下隨機(jī)選取5個視野(每個視野觀察細(xì)胞數(shù)不少于200個),按陽性細(xì)胞所占百分比及著色深淺進(jìn)行結(jié)果判定[4-5]。采用9分評分制,按照陽性細(xì)胞比例:≤10%為 1分,＞10%～50%為 2分,＞50%為3分;按染色強(qiáng)弱:無黃(藍(lán))色為0分;淡黃(藍(lán))色為1分;中度黃(藍(lán))色為 2分,棕黃(紫藍(lán))色為3分。然后按照“陽性細(xì)胞比例分?jǐn)?shù)乘以染色強(qiáng)弱得分”計總分,總分小于3為陰性,≥3為陽性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,采用χ2檢驗,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Caveolin-1蛋白在ESCC組織中的表達(dá) Caveolin-1蛋白主要存在于癌組織細(xì)胞質(zhì)中,呈淺黃色至深黃色,見封2圖1。Caveolin-1蛋白在ESCC組織、癌旁不典型增生組織及正常黏膜組織中的陽性表達(dá)率依次降低,組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05,見表 1。Caveolin-1蛋白表達(dá)均與ESCC的分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05),見表2。

表1 Caveolin-1蛋白及mRNA在各種組織中的陽性表達(dá)率[n(%)]

表2 Caveolin-1蛋白及mRNA表達(dá)與ESCC臨床參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

表2(續(xù)) Caveolin-1蛋白及mRNA表達(dá)與 ESCC臨床參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

2.2 Caveolin-1 mRNA在ESCC組織中的表達(dá) Caveolin-1 mRNA主要存在于癌組織細(xì)胞質(zhì)中,呈藍(lán)紫色,見封2圖2。Caveolin-1 mRNA在ESCC組織、癌旁不典型增生組織及正常黏膜組織中的陽性表達(dá)率依次降低,組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),見表1。Caveolin-1 mRNA表達(dá)均與 ESCC的分化程度、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05),見表2。

3 討 論

Caveolas是一種非包被的細(xì)胞囊/小泡,以胞膜小窩、胞膜穴樣內(nèi)陷兩種形式單獨或成簇存在于多種細(xì)胞表面,其直徑為50～100 nm,是各種信號分子和信號通路的“整合器”,是細(xì)胞膜生物功能的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)[6-8]。Caveolin-1是Caveolas的標(biāo)記性蛋白,相對分子質(zhì)量為21～24 kD,其編碼基因定位于人染色體7q 31.1,有3個外顯子,不但參與了 Caveolas的形成,以及細(xì)胞增殖、分化、凋亡和血管生成的信號通路的調(diào)控,而且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[9-11]。Caveolin-1在腫瘤中的表達(dá)有所爭議,許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)在乳腺癌[12]、肺癌[13]、膀胱癌[14]等組織中Caveolin-1高表達(dá),并與浸潤、轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。但也有跡象表明Caveolin-1在腫瘤中有表達(dá)缺失,與腫瘤的抑制有關(guān)[15]。

本實驗結(jié)果顯示,Caveolin-1 mRNA及其蛋白在ESCC組織、正常黏膜組織和不典型增生組織中均有表達(dá),但在ESCC組織中的表達(dá)水平顯著增高。表明Caveolin-1在ESCC組織中無論轉(zhuǎn)錄水平還是蛋白水平均有表達(dá)上調(diào),提示Caveolin-1的異常表達(dá)可能與ESCC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān);Caveolin-1 mRNA及其蛋白的表達(dá)均與腫瘤的分化程度有關(guān),提示Caveolin-1的表達(dá)對ESCC惡性程度的評估有一定的價值;其mRNA及其蛋白的表達(dá)在浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中具有明顯差異,表明Caveolin-1的異常表達(dá)與食管癌的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān),這與 Kato等[16]的分析結(jié)果一致。

總之,Caveolin-1蛋白及mRNA與ESCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),二者表達(dá)可作為ESCC診斷和治療的生物學(xué)指標(biāo),但Caveolin-1在腫瘤中的作用機(jī)制目前尚不清楚,有待進(jìn)一步深入研究。

[1]M oon KC,Lee GK,Yoo SH,et al.Expression of Caveolin-1 in pleomorphic carcinoma of the lung is correlated with a poor prognosis[J].Anticancer Res,2005,25(6):4631-4637.

[2]Qian N,Ueno T.Is dysfunction of caveolin-1 a link between systemic sclerosis and breast cancer,opening a window on both etiologies[J].Arch Med Res,2010,41(4):297-301.

[3]Amorim I,Lopes CC,Faustino AM,et al.Immunohistochemical expression of caveolin-1 in normal and neoplastic canine mammary tissue[J].Comp Pathol,2010,143(1):39-44.

[4]楊曉文,王世清,莫平.MMP-7和TIM P-2表達(dá)在遺傳性非息肉病性大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用[J].重慶醫(yī)學(xué),2009,38(7):817-820.

[5]馬丹,劉敏,梁平,等.COX-2在人胃癌中的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系[J].重慶醫(yī)學(xué),2009,38(3):290-292.

[6]Mouraviev V,Li L,Tahir S,et a1.The role of Caveolin-1 in androgen insensitive prostate cancer[J].UroI,2002,168(4):1589-1596.

[7]張志梅,費(fèi)素娟,楊聰穎,等.Caveolin-1和 TGF-β1在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].山東醫(yī)藥,2009,49(7):4-6.

[8]Han F,Zhu HG.Caveolin-1 regulating the invasion and expression of matrix metalloproteinase(MMPs)in pancreatic carcinoma cells[J].Surg Res,2010,159(1):443-450.

[9]Glenney JR.Tyrosine phosphorylation of a 22 kD protein is correlated with transformation by Rous sarcollla virus[J].Biol Chem,1989,264(34):20163-20166.

[10]Yang G,Addai J,Wheeler TM,et al.Correlative evidence that prostate cancer cell-derived Caveolin-1 mediates angiogenesis[J].Hum Pathol,2007,38(11):1688-1695.

[11]Sun XH,Liu ZY,Chen H,et al.A conserved sequence in caveolin-1 is both necessary and sufficient for Caveolin polarity and cell directional migration[J].FEBS Lett,2009,583(22):3681-3689.

[12]Yu J,Bergaya S,M urata T,et a1.Direct evidence for the role of Caveolin-1 and caveolae in mechanotransduction and remodeling of blood vessels[J].Clin Invest,2006,116(5):1284-1291.

[13]Garcia E,Li M.Caveolin-1 immunohistochemical analysis in differentiating chromophobe renal cell carcinoma from renal oncocytoma[J].Am J Clin Patho1,2006,125(3):392-398.

[14]Sbaa E,Dewever J,Martinive P,et a1.Caveolin plays a central role in endothelial progenitor cell mobilization and homing in SDF-1-driven postischemic vasculogenesis[J].Circ Res,2006,98(9):1219-1222.

[15]Virgintino D,Robertson D,Errede M,et al.Expression of Caveolin-1 in human brain microvessels[J].Neurosci,2002,115(1):145-152.

[16]Kato K,Hida Y,Miyamoto M,et a1.Overexpression of caveolin-l in esophageal squamous cell carcinoma correlates with lymph node metastasis and pathologic stage[J].Cancer,2002,94:929-933.

Expression of Caveolin-1 protein and mRNA in esophageal squamous cell carcinoma tissue

Chu Guangmin1,Pang Xia2,Gao Dongling2
(1.Department of Pathology,Henan Province Tumor Hospital,Zhengzhou,Henan 450008,China;2.Department of Pathology,Henan Key Laboratory of Tumor Pathology/the First Af filiated Hospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou,Henan 450052,China)

ObjectiveTo investigate the expressions of Caveolin-1 protein and mRNA in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC)tissues and its significance.MethodsThe expressions of Caveolin-1 protein and mRNA was detected by immunohistochemistry and in situ hybridization methods in 57 cases of ESCC tissues,34 cases of adjacent atypical hyperplasia epithelial tissues and 57 cases of normal esophageal epithelial tissues.ResultsThe positive expression rate of Caveolin-1 protein gradually decreased from 54.4%(31/57)in ESCC,38.2%(13/34)in adjacent atypical hyperplasia epithelium to 19.3%(11/57)normal esophageal epithelium specimens,and there was a significant statistic difference among the groups(P＜0.05).Additionally,the expression rates of Caveolin-1 mRNA decreased by turns from ESCC,adjacent atypical hyperplasia epithelium to normal esophageal epithelium specimens,which were 64.9%(37/57),47.1%(16/34)and 22.8%(13/57)respectively,and there was a significant statistic difference among the groups(P＜0.05).The expressions of Caveolin-1 protein and mRNA were closely correlated with the different differentiation levels,infiltrative depth and lymph node metastasis in ESCC tissues(P＜0.05).ConclusionThe expressions of Caveolin-1 protein and mRNA may play important roles in the infiltration,metastasis and carcinogenesis of ESCC,suggesting it may be used as a tumor maker of ESCC.Combined detections of Caveolin-1 protein and mRNA have some clinical value in assessing the prognosis of ESCC.

Caveolin-1;carcinoma,squamous cell;immunohistochemistry;in situ hybridization

10.3969/j.issn.1671-8348.2011.04.006

A

1671-8348(2011)04-0328-03

2010-02-21

2010-08-17)

·醫(yī)學(xué)教育·