邢懷廣 李捷 韓善樂

親和吸附離心管法檢測甲胎蛋白異質體用于診斷肝癌的研究

邢懷廣 李捷 韓善樂

目的采用親和吸附離心管法檢測甲胎蛋白異質體(AFP-L3)，分析甲胎蛋白異質體AFPL3在診斷肝癌的臨床應用價值。方法選擇121例甲胎蛋白AFP陽性患者血清(≥10ng/ml)。使用親和吸附離心管方法檢測血清甲胎蛋白異質體AFP-L3，并且對研究對象進行跟蹤，分析甲胎蛋白異質體用于臨床在鑒別肝癌的作用。結果以甲胎蛋白異質體AFP-L3≥10%作為診斷指標，肝癌患者血清中甲胎蛋白異質體AFP-L3異常升高者明顯高于其他肝病患者(P＜0.01);對58例臨床確診為肝癌的患者甲胎蛋白異質體AFP-L3的診斷靈敏度是79.31%;在63例臨床診斷為其他肝臟疾病的患者甲胎蛋白異質體AFP-L3的診斷特異性達到92.06%，甲胎蛋白異質體AFP-L3的符合率85.95%。結論應用親和吸附離心管法檢測甲胎蛋白異質體AFP-L3在肝癌與良性肝臟病變鑒別診斷中具有重要臨床價值。

甲胎蛋白異質體;肝癌;離心法

肝癌是世界上最常見的10種惡性腫瘤之一，全世界每年約有25萬人肝癌［1］;肝癌發(fā)病之初較為隱匿，臨床難以檢出，臨床診斷是一般多為晚期，治療效果差，因此早期發(fā)現肝癌并且及時治療可以提高患者的5年存活率。近年隨著影像學的發(fā)展，一部分體積小的肝癌患者得以及時發(fā)現，患者5年存活率有了一定的提高。但是影像學技術檢測用于診斷肝癌仍然受到很多的限制，使很多患者未能及時得到準確診斷，失去了最佳的治療時機。甲胎蛋白(AFP)定量檢測是目前早期發(fā)現肝癌的主要血清學標志物，但是其他一些疾病也可能引起甲胎蛋白的升高，特別是屬于肝癌高危監(jiān)測人群的慢性肝炎、肝硬化患者［1，2］。因此尋找肝癌早期診斷高靈敏度、高特異性的鑒別指標具有重要的臨床意義。

近年研究發(fā)現，良性肝病時肝細胞壞死后再生性AFP與惡性肝癌細胞產生的AFP在糖鏈結構上有差異［3］，而且不同糖鏈的AFP與凝集素的親和性不同，因此根據與凝集素親和性不同，可對AFP的來源進行判斷。其中AFP-L3即甲胎蛋白異質體為肝癌細胞所特有。國內外研究表明，AFP-L3是肝癌高度特異性指標，比單純檢查總甲胎蛋白能顯著提高準確率，可以不受甲胎蛋白≥400ng標準的限制。但是長期以來AFP-L3指標無法在臨床做為常規(guī)指標使用，原因是AFP-L3與甲胎蛋白的差異只存在于糖鏈上，之前報道的檢測方法為凝集素親和電泳方法，方法復雜，不宜做為肝癌鑒別的常規(guī)檢測方法。因此很有必要研究新的方法檢測AFP-L3［4，5］。

本研究采用親和吸附離心管方法檢測患者血清中的甲胎蛋白異質體，并且對患者進行跟蹤，探討甲胎蛋白異質體檢測用于鑒別肝癌的臨床意義，

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院2009年9月至2010年8月的均為甲胎蛋白陽性(AFP≥10ng/ml)的住院患者121例，男89例，女32例，年齡25～67歲，平均51.7歲。其中，肝癌患者58例，肝硬化患者32例，慢性活動性肝炎患者31例。診斷標準為2000年中華醫(yī)學會轉染病與寄生蟲學分會、肝病學分會聯合修訂的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎診斷標準［6］及衛(wèi)生部醫(yī)政司組織并由全國腫瘤防治辦公室與中國抗癌協會合編的《新編常見惡性腫瘤診治規(guī)范》中有關原發(fā)性肝癌的診斷標準。所有標本溫育分離血清后立即檢測。

1.2 試劑和方法甲胎蛋白異質體檢測采用親和吸附離心管法，試劑由北京熱景生物技術有限公司提供，甲胎蛋白檢測采用化學發(fā)光法，儀器為美國貝克曼化學發(fā)光免疫分析儀DXI 800型。

1.3 統(tǒng)計學方法應用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，不同組別間AFP-L3的比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 甲胎蛋白(AFP)在肝癌與非肝癌患者中的分布121份血清標本中，58份來自臨床診斷為肝癌的患者，另外63份來自非肝癌患者，臨床診斷為肝硬化或慢性肝炎患者。根據甲胎蛋白AFP的含量將研究對象分為3組:≥400 ng/ml組、200～400 ng/ml組以及≤200 ng/ml。在58份肝癌標本中有32份AFP≥400ng/ml，占55.17%;＜400 ng/ml的有27份，占44.83%。此外，在63份非肝癌標本中，有9份標本AFP≥400 ng/ml，占14.29%，AFP＜400 ng/ml的有54份，占85.71%，詳見表1。

表1 肝癌、肝硬化及慢性肝炎標本AFP水平(ng/ml)

2.2 AFP-L3在良惡性肝臟疾病中的分布以AFP-L3(%)≥10%作為臨界指標，肝癌及慢性肝炎、肝硬化標本AFP-L3 %測定結果見表2。58份肝癌標本中有56份測定結果為陽性，達79.31%。63份非肝癌中5份陽性。而肝癌標本的AFP-L3(%)分布明顯不同于慢性肝炎、肝硬化標本，前者集中于AFP-L3(%)≥10，后者集中于10以下，兩者相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)，見圖1。

表1 肝癌、肝硬化及慢性肝炎患者AFP-L3%水平

圖1 AFP-L3%在肝癌與非肝癌中的分布

2.3 AFP與AFP-L3在肝癌診斷中的作用比較當AFP設定為≥400 ng/ml時，32例肝癌在此范圍，其敏感性僅為55.17%(32/58)，其特異性為85.71%(54/63)，符合率71.66%［(32+54)/121］;對于甲胎蛋白異質體AFP-L3%≥10%，其敏感性為79.31%(46/58)，特異性為92.06%(58/ 63)符合率85.95%［(46+58)/121］。

以上數據顯示，檢測甲胎蛋白異質體(AFP-L3)的肝癌診斷符合率比單獨檢測甲胎蛋白明顯提高，結果見表3。

表3 AFP與AFP-L3%在肝癌診斷中的作用比較(例，%)

3 討論

甲胎蛋白AFP是肝癌重要的血清學指標。由于AFP也在肝細胞癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、膽道腫瘤和睪丸腫瘤等的血清中出現，而15%～58%的慢性乙肝患者和11-47%的肝硬化患者血清中的AFP會有所升高。因此在高危人群中，AFP作為肝癌診斷指標尚缺乏特異性［6］。

肝癌的早期診斷是基于對長期患有慢性肝臟疾病的高危人群的跟蹤篩查，目前臨床常通過腹部超聲和血清AFP的檢測來對肝癌進行早期篩查。有研究顯示，血清AFP對肝癌的陽性預測值是32%，腹部超聲的陽性預測值是54%。可以看出目前臨床所用方法對肝癌的預測率不足。

而甲胎蛋白異質體(AFP-L3)對于肝癌的預測已經是公認非常有效的一個指標，研究報道敏感性可以達到94%。AFP-L3的檢測能夠在慢性乙肝患者和肝硬化等高危人群中發(fā)現直徑＜2 cm的肝癌。一項跟蹤研究顯示，AFP-L3比影像學可以提前9～12個月發(fā)現肝癌的存在。

在本項研究中，收集的標本都為臨床檢測為AFP陽性患者，由于臨床慢性肝炎的AFP分布多為低濃度值，所以我們選擇了AFP含量在1000ng/ml以下標本，其中肝癌患者58例，肝炎、肝硬化患者63例。當以AFP-L3%≥10為陽性判斷指標，肝癌患者的診斷靈敏度為率達79.31%，對包括肝炎及肝硬化等在內的非肝癌標本的特異性達到92.06%，符合率85.95%，檢測甲胎蛋白異質體AFP-L3的符合率比單獨檢測甲胎蛋白AFP明顯提高。AFP-L3在肝癌與非肝癌組之間分布有顯著性差異。說明以AFP-L3≥10%為鑒別診斷指標時，肝癌和良性肝病可以得到明顯區(qū)分。我們的研究結果與國內的某研究結果一致［7］。

目前AFP-L3檢測常用的方法有植物凝集素免疫交叉電泳技術，該方法技術要求高、操作繁瑣、試劑昂貴，限制了AFP-L3檢測在臨床的應用。美國FDA于2005年批準檢測該指標應用于肝癌診斷，并把甲胎蛋白AFP-L3診斷肝癌的陽性界定值為10%。如果患者血清中總AFP只有輕微的升高而AFP-L3所占的比例超過10%，這就提示肝癌發(fā)生的可能性很大［8］。

本研究采用親和吸附甲胎蛋白異質體AFP-L3，原理為采用親和離心柱技術分離出甲胎蛋白異質體，然后再定量測定樣本中甲胎蛋白和甲胎蛋白異質體的含量，兩者相比較即可得到患者血清中甲胎蛋白異質體的比例，用于診斷肝癌，臨床應用很方便。

本研究中，尚有12例肝癌患者血清AFP-L3%＜10%，占肝癌人數的20.68%，這與日本學者報道一致，提示對肝癌的診斷尚應結合其他血清學指標或影像學資料［1］。國外研究認為甲胎蛋白AFP-L3沒有異常升高的腫瘤患者其腫瘤倍增時間短，預后較好。

總之，對肝癌的準確診斷是提高患者生存率和生活質量的重要前提。研究利用親和離心柱法檢測AFP-L3，操作簡便，節(jié)約成本，用于肝癌診斷有較好的敏感性和特異性，如與AFP聯合使用，做為肝癌篩查的聯合試驗指標，應有很高的臨床應用價值。

［1］殷正豐.甲胎蛋白異質體作為肝癌標志物的臨床應用.實用腫瘤雜志，2004，19(1):1-4．

［2］沈錚，沈霞.甲胎蛋白及其異質體檢測的臨床應用價值.上海醫(yī)學檢驗雜志，2000，15(6):361-366．

［3］Li D，Mallory T.AFP-L3:a new generation of tumor marker for hepatocellular carcinoma.Clin Chim Acta，2001，313(1):15-19．

［4］青柳璺.腫瘤標志物的臨床診斷意義及展望—甲胎蛋白(AFP)L3組分.日本醫(yī)學介紹，2005，26:49-50．

［5］Hu KQ，Kyulo NL.Clinical significance of elevated alpha-fetoprotein(AFP)in patients with chronic hepatitis C，but not hepatocellular carcinoma.Am J Gastroenterol，2004，99(5):860-865．

［6］游紹莉，辛紹杰．229例甲胎蛋白明顯升高肝病患者的臨床分析．實用預防醫(yī)學，2006，13(6):1613-1614．

［7］徐愛芳．新微量離心柱法檢測甲胎蛋白異質體對肝癌診斷的研究．中華實驗和臨床病毒學雜志，2007，21(1):67-69．

［8］Shiraki K，Takase K，Tameda Y，et al.A clinical study of lectinreactive alpha-fetoproteinas an early indicator of hepatocellular carcinoma in the.follow-up of cirrhotic patients.Hepatology，1995，22:802-807．

The studies of alpha-fetoprotein isoforms using with centrifugal column method in diagnosis of hepatocel-luar carcinoma

XING Huai-guang，LI Jie，Han shan-le．Department of Radioimmunoussay，LiaochengPeople's Hospital，Liaocheng 252000，China

ObjectiveTo explore the clinical significance of alpha-fetoprotein-L3(AFP-L3)with centrifugal column method in the diagnosis of hepatocelluar carcinoma.MethodsThe serum samples of 121 patients with elevated AFP level(≥10ng/ml)were detected by chemiluminescence immunoassay for AFP and centrifugal column method for AFP-L3，and the clinical value of AFP-L3 were studied in the differentiation diagnosis of hepatocelluar cancer.ResultsThe level of AFP-L3(%)in serum of patients with hepatocellular carcinoma was significantly higher than those in the patients with other liver diseases(P＜0.05).Taking AFP-L3 (%)≥10ng/ml as the diagnositic criteria，the sensitivity of AFP-L3 was 79.31%in 58 hepatocellular carcinoma patients and the specificity of AFP-L3 was 92.06%in 63 other liver diseases patients.The diagnostic accuracy was 85.95%.ConclusionDetection of AFP-L3 seemed be of clinical value in diagnosis and differential diagnosis of hepatocellular carcinoma．

Alpha-fetoprotein isoforms;Hepatocelluar carcinoma;Centrifugation

252004聊城市人民醫(yī)院放免室(邢懷廣)，內科(李捷);莘縣人民醫(yī)院內科(韓善樂)

邢懷廣afriend001@163.com