李 儼，李敬華

(1.吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132011; 2.北華大學附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132011)

人參消渴膠囊中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的含量測定

李 儼1，李敬華2

(1.吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132011; 2.北華大學附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132011)

目的建立人參消渴膠囊中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量測定的高效液相色譜法。方法色譜柱為Hytersil BDS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈 －0.05%磷酸(20 ∶80)，流速 0.9 mL/min，柱溫 40 ℃，檢測波長 203 nm，進樣量 10 μL。結果人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Re的進樣量線性范圍分別為 0.25 ～ 2.75 μg 和 0.50 ～5.51 μg，平均回收率分別為 96.75% 和 98.66%，RSD分別為 2.1%和 1.4% 。結論建立的方法準確、簡便、快速，可用于該產品的質量控制。

人參消渴膠囊;高效液相色譜法;人參

人參消渴膠囊(原名降糖膠囊)由人參、人參莖葉皂苷等加工提取制成，具有清熱生津、滋陰潤燥之功，用于消渴癥，癥見多飲、多尿、多食、消瘦、體倦無力及全身綜合征[1]。人參、人參莖葉總皂苷為細貴藥，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re為其主要成分。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法對制劑中的Rg1和人參皂苷Re進行了含量測定，作為其內在質量控制的方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

2010C型高效液相色譜儀(日本島津);Class－VP數(shù)據(jù)處理機(日本島津);UV－2401型紫外－可見分光光度計(日本島津);Mettler AE24型電子天平(瑞士)。人參皂苷 Rg1對照品(批號為110703－200322，供含量測定用)、人參皂苷 Re對照品(批號為754－200115，供含量測定用)均由中國藥品生物制品檢定所提供;人參消渴膠囊(通化鴻淘茂藥業(yè)有限公司，批號為060101，060102，060103，060104，060105;通化林海藥業(yè)有限公司，批號為20060104);甲醇為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗[2]

色譜柱:Hytersil BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:40 ℃;流動相:乙腈 －0.05% 磷酸(20 ∶80);流速:0.9 mL/min;檢測波長:203 nm;進樣量:10 μL。在此條件下，理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計算為11 647，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的分離度為1.8，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.25 mg、人參皂苷Re0.5 mg的混合溶液，作為對照品溶液。取本品裝量差異項下的內容物，研細，取1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷，加熱回流1 h，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，加甲醇50 mL，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加熱回流3 h;過濾，提取液揮干，加水20 mL使溶解，加石油醚(30～60℃)提取2次，每次10 mL，棄去醚液，水液通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑1.5 cm，長15 cm)，以水80 mL洗脫，棄去水液，再用20%乙醇80 mL洗脫，棄去20%乙醇洗脫液，繼續(xù)用80%乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液90 mL，蒸干;殘渣加甲醇溶解并定量轉移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取不含人參及人參莖葉皂苷的處方，按制備工藝方法制成陰性對照品，取1 g，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗:吸取2.2項下陰性對照品溶液10 μL，注入色譜儀，依法測定。結果陰性對照品溶液色譜圖在人參皂苷Rg1和人參皂苷Re相應的保留時間附近無干擾峰，表明方法可行。

線性關系考察:分別精密吸取人參皂苷Rg1和人參皂苷Re對照品混合溶液 1，3，5，7，9，11 μL，注入高效液相色譜儀中，以進樣量(μg)為橫坐標、峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re回歸方程分別為Y=4697.3905+348734.6285X(r=0.999 9)和Y=19 583.785 58+325 320.703 6X(r=0.999 9)，進樣量線性范圍分別為 0.25 ～2.75 μg和 0.50 ～5.51 μg。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液(避光保存)，每隔一定時間進樣1次，依法測定。結果人參皂苷Rg1和人參皂苷Re峰面積的RSD分別為0.3%和1.2%，表明供試品溶液在避光條件下10 h內基本穩(wěn)定。

精密度試驗:取同一對照品溶液，進樣6次，依法測定。結果人參皂苷Rg1和人參皂苷Re峰面積的RSD分別為2.7%和1.9%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗:取同一批樣品，依法獨立測定6次。結果含量人參皂苷Rg1和人參皂苷Re含量的RSD分別為2.6%和1.5%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗:稱取樣品 0.250 0，0.500 0，0.625 0 g，分別精密加入對照品的混合溶液(精密稱取人參皂苷Rg116 mg和人參皂苷Re11.2 mg，分別置200 mL量瓶中，加甲醇至刻度，精密量取上述溶液各 1 mL，置 200 mL 量瓶中，加甲醇至刻度)1.0，2.0，2.5 mL，按供試品溶液制備方法制備待測溶液并依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=3)

2.4 樣品含量測定

藥材含量測定:取人參和人參莖葉皂苷(通化鴻淘茂藥業(yè)有限公司)各1批，按2005年版《中國藥典(一部)》人參項下方法測定，結果人參藥材中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的總含量為0.9%，符合總含量不得少于0.30%的規(guī)定;按《化學藥品地升國標(第七冊)》方法測定了人參莖葉皂苷中人參皂苷Rg1、人參皂苷 Re的總含量為54.10%，符合總含量不得少于30.0%的規(guī)定。結果見表2。

樣品含量測定及含量限度:依法測定6批樣品，結果見表3?？梢?，6批樣品的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的平均總量為3.13 mg/粒?？紤]到按處方投料的理論值(人參皂苷總量為1.96 mg/粒)、原料本身含量的變化及生產中的波動，暫訂每粒樣品含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總量不得少于1.5 mg/粒。

表2 藥材含量測定結果

表3 樣品含量測定結果(mg/粒)

3 討論

取對照品溶液，在190～400 nm波長范圍內進行紫外光譜掃描，結果在203 nm波長處有最大吸收，因此以203 nm為檢測波長。參照2005年版《中國藥典(一部)》人參葉含量測定項下方法，以乙腈－0.05%磷酸(20∶80)為流動相;供試品提取溶劑為三氯甲烷、甲醇，以索氏加熱回流提取。

根據(jù)試驗結果，兩公司提供的樣品在擬訂的色譜條件下(流動相比例有所改變)，被測的兩組分分離效果不好，因此樣品生產工藝等條件有必要統(tǒng)一。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1977:9.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005:7.

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)02－0042－02

2009－12－02;

2010－06－02)