張 艷

(江蘇省連云港藥品檢驗所，江蘇 連云港 222006)

金橘膽胃丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張 艷

(江蘇省連云港藥品檢驗所，江蘇 連云港 222006)

目的探討金橘膽胃丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法鑒別金橘膽胃丸中柴胡、木香、香附，用高效液相色譜法對制劑中橙皮苷進(jìn)行定量分析。結(jié)果薄層色譜圖中，供試品溶液色譜在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上出現(xiàn)相同顏色的斑點。在選定的色譜條件下，橙皮苷進(jìn)樣質(zhì)量濃度在19.84～158.72 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 7，平均回收率為99.45%，RSD為0.64%(n=6)。結(jié)論所用方法可靠、準(zhǔn)確，專屬性強，可有效控制金橘膽胃丸的質(zhì)量。

金橘膽胃丸;薄層色譜法;高效液相色譜法;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

金橘膽胃丸為連云港中醫(yī)院制劑，由生雞內(nèi)金、橘皮、柴胡、木香、香附等13味中藥組方，具有利膽和胃、消食化石的作用，臨床上主要用于治療膽囊炎、慢性胃炎、膽囊結(jié)石、肝內(nèi)外膽管結(jié)石等，效果顯著。本研究提高并完善了該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]，增加了柴胡、木香、香附的薄層色譜鑒別和橘皮中橙皮苷的含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀。橙皮苷對照品(批號為110721－200613)、柴胡對照藥材(批號為 120992－200504)、木香對照藥材(批號為120921－200506)均來自中國藥品生物制品檢定所;金橘膽胃丸(批號為20091113，由連云港市中醫(yī)院制劑室提供);薄層層析用硅膠G板;乙腈(色譜純)，水(重蒸水)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別(薄層色譜法)

柴胡[2]:取本品3 g，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，加2%NaOH溶液10 mL，置水浴上加熱30 min，放冷，加正丁醇10 mL，振搖提取，分取正丁醇溶液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。按處方配制除去柴胡制成陰性對照品，按照供試品溶液的制備方法制備，作為陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水(30∶10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%對二甲氨基苯甲醛10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱約5 min。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，而陰性對照品溶液色譜則無此斑點，見圖1 A。

木香:取本品3 g，研細(xì)，加乙醚30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取木香對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。按處方配制除去木香制成陰性對照品，按照供試品溶液的制備方法制備，作為陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各3 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－丙酮(10∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，而陰性對照品溶液色譜則無此斑點，見圖1 B。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定(高效液相色譜法)

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse XDB C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流速:1.0 mL/min;柱溫:25 ℃;流動相:乙腈 －0.3%磷酸溶液(17∶83);檢測波長:284 nm;進(jìn)樣量:10 μL。在此條件下，色譜圖見圖2。

2.2.2 溶液制備[3]

精密稱取橙皮苷對照品9.92 mg，置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解(必要時超聲處理)并定容至刻度，制成質(zhì)量濃度為 198.4 μg/mL的貯備液;分別精密量取 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，各置 10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別制 成 質(zhì) 量 濃 度 為 19.84，39.68，79.36，119.04，158.72 μg/mL 的溶液，即得對照品溶液。取本品適量，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，置水浴上加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方比例配制缺橘皮的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別精密量取2.2.2項下的對照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀測定峰面積。以對照品質(zhì)量濃度(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=27.777+14.803X，r=0.999 7(n=5)。結(jié) 果 表 明 橙 皮 苷 質(zhì) 量 濃 度 在19.84 ～158.72 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果的RSD=0.72%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:吸取同一供試品溶液，每隔2 h測定1次，12 h內(nèi)連續(xù)測定6次。結(jié)果橙皮苷含量的RSD=0.51%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖2 高效液相色譜圖

重現(xiàn)性試驗:取同一批(批號為20091113)樣品，按樣品含量測定項下方法平行操作6份，依法測定。結(jié)果橙皮苷平均含量為4.52 mg/g，RSD=1.1% ，表明方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品6份，每份1 g，分別加入橙皮苷對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

取3批不同批號的金橘膽胃丸，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品試液10 μL，按擬訂的色譜條件測定并計算含量。結(jié)果見表2。

3 討論

2005年版《中國藥典(一部)》中，柴胡薄層色譜鑒別中采用的展開劑為乙酸乙酯－乙醇－水(8∶2∶1)，木香采用的展開劑為三氯甲烷－環(huán)己烷(5∶1)，對于該制劑，展開速度均較慢，且分離度較小;而柴胡改用三氯甲烷－甲醇－水(30∶10∶1)、木香改用環(huán)己烷－丙酮(10∶3)后展開速度快，分離度好。供試品溶液在與對照藥材溶液色譜對應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點;該制劑在與柴胡對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上至少顯5個相同顏色的斑點，與木香對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上至少顯2個相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾，表明方法可行。

為取得更好的分離效果，對色譜柱和流動相進(jìn)行了選擇，分別比較了 Agilent Eclipse XDB －C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，Lichrospher C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm)，Water C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，發(fā)現(xiàn)前一種流動相效果較好。分別比較了流動相乙腈 －0.3%磷酸溶液(21 ∶79)[4]、乙腈 －0.3%磷酸溶液(19 ∶81)、乙腈－0.3%磷酸溶液(17∶83)、結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈－0.3%磷酸溶液(21∶79)未使橙皮苷達(dá)到完全分離，乙腈－0.3%磷酸溶液(19∶81)雖使橙皮苷完全分離但效果不是很好，而乙腈－0.3%磷酸溶液(17∶83)能使橙皮苷達(dá)到充分完全的基線分離，與其他成分之間也能達(dá)到完全的基線分離，且色譜峰形較對稱。故選擇乙腈－0.3%磷酸溶液(17∶83)為流動相。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=6)

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:525.

[2]吳成立，王小龍，張培奇.雙清口服液中桔梗、柴胡的薄層鑒別方法[J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2000(3):16.

[3]梁開玉，羅啟波，喻 梅.從陳皮中提取橙皮苷工藝研究[J].重慶工商大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2004，121(1):19 －22.

[4]鄭國平，陳 翔.HPLC法測定金果飲中橙皮苷的含量[J].中國中醫(yī)藥科技，2009，16(5):384 －385.

R284.1;R286

A

1006－4931(2011)02－0038－02

張艷(1975－)，女，主管中藥師，主要從事藥物分析工作，(電話)0518－82093762。

2010－04－08)