袁春筱，陳志新

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶 400010; 2.中國人民解放軍第6905工廠職工醫(yī)院，重慶 400712)

高效液相色譜法測定骨刺消片中薯蕷皂苷含量

袁春筱1，陳志新2

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶 400010; 2.中國人民解放軍第6905工廠職工醫(yī)院，重慶 400712)

目的測定骨刺消片中薯蕷皂苷的的含量。方法采用高效液相色譜(HPLC)法。色譜柱為Symmetry C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈－水(26∶74)為流動相，檢測波長為203 nm。結(jié)果薯蕷皂苷進(jìn)樣量在0.56～5.60 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9);平均回收率為98.24%，RSD為0.88%(n=6)。結(jié)論HPLC法快速、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

薯蕷皂苷;骨刺消片;高效液相色譜法

骨刺消片由穿山龍、淫羊藿、川牛膝、熟地黃、枸杞子組方，具補(bǔ)腎、健骨、活血、止痛功效，用于治療骨質(zhì)增生、骨刺疼痛等癥。穿山龍為方中君藥，主要成分為薯蕷皂苷，有祛風(fēng)除濕、舒筋通絡(luò)、活血止痛作用。采用高效液相色譜(HPLC)法測定穿山龍中薯蕷皂苷含量，目前尚未見文獻(xiàn)報道。筆者對此進(jìn)行了研究，旨在為本制劑的質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters 2695/2996型高效液相色譜儀。薯蕷皂苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111701－200501);水為去離子水，乙腈為色譜純;其余試劑均為分析純;骨刺消片(市售，批號分別為100504，100510，100601)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Symmetry C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －水(26 ∶74);流速:1.0 mL/min;檢測波長:203 nm;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按薯蕷皂苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

精密稱取薯蕷皂苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.28 mg的溶液，作為對照品溶液。取本品10片，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，加入甲醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL 使溶解，過 D101型大孔樹脂柱(3 g，Φ0.9 cm)，用水 60 mL 洗脫，棄去水洗液，再用80%乙醇35 mL洗脫，收集乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，移至10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例及制備工藝制備不含穿山龍的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備缺穿山龍陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察: 精密吸取對照品溶液 2，4，8，16，20 μL，注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=261 285X－106 127，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，薯蕷皂苷進(jìn)樣量在0.56～5.60 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

方法專屬性試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上有相同色譜峰，陰性對照品溶液在此保留時間處無相應(yīng)吸收峰，表明陰性樣品無干擾，選擇性好(見圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定薯蕷皂苷峰面積值。結(jié)果的RSD為0.75%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密稱取樣品1份，照擬訂的供試品溶液制備方法和測定條件，分別于0，2，4，8，14 h時進(jìn)樣。結(jié)果薯蕷皂苷峰面積的RSD為0.92%(n=5)，表明供試品溶液在14 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:精密稱取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定薯蕷皂苷含量。結(jié)果平均含量為 0.21 mg/片，RSD為1.01%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的同批樣品6份，分別精密加入薯蕷皂苷對照品，照供試品溶液制備方法，按確定的色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 薯蕷皂苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別精密稱取樣品1份，依法制備供試品溶液，并測定含量。結(jié)果批號為100504，100510，100601的樣品中薯蕷皂苷含量分別為 2.12，2.23，2.29 mg/片。

3 討論

擬訂的含量測定方法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，為該制劑的質(zhì)量控制和檢測方法提供了理論依據(jù)。

曾對樣品提取、純化方法進(jìn)行了比較[1－2]，由于供試品中穿山龍藥材部分為原生藥粉末，故采用甲醇超聲提取;并對樣品采用D101型樹脂、AB－8型樹脂、D201型樹脂進(jìn)行純化對比試驗，結(jié)果D101型樹脂的純化效果明顯，吸附率和解吸率優(yōu)于其他類型樹脂，能夠純化供試品溶液。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:250.

[2]熊 山，陳玉武，葉祖光.楮實子中總皂苷含量測定[J].中國現(xiàn)代中藥，2009(7):26.

Determination of Dioscin in Gucixiao Tablets by HPLC

Yuan Chunxiao1，Chen Zhixin2(1.Second Affiliated Hospital，Chongqing Medical University，Chongqing，China400010;2.Staff Hospital，6905 Factory of PLA，Chongqing，China400712)

ObjectiveTo determine the contents of dioscin in Gucixiao Tablets.Methods The HPLC method was adopted and the C18column(200 mm ×4.6 mm，5 μm)was used.The mobile phase was acetonitrile － water(26 ∶74).The detection wavelength was at 203 nm.Results The calibration curve of dioscin was linear in the range of 0.56 － 5.60 μg(r=0.999 9).The average recovery rate was 98.24% ，RSDwas 0.88% (n=6).Conclusion HPLC is quick and accurate，which can be used for the quality control of Gucixiao Tablets.

dioscin;Gucixiao Tablets;HPLC

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)02－0034－02

2010－10－20)