吳麗萌，賴東梅，陳 娟，周長華，馬仁強，陳健文

(1.廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院，廣東 深圳 518101; 2.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510080)

金不換總生物堿治療大鼠慢性萎縮性胃炎的實驗研究

吳麗萌1，賴東梅1，陳 娟1，周長華2，馬仁強2，陳健文2

(1.廣東省深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院，廣東 深圳 518101; 2.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510080)

目的研究金不換總生物堿對慢性胃炎的作用。方法飲用及灌胃給予20 mmol/L去氧膽酸鈉、30%及60%乙醇13周建立慢性萎縮性胃炎模型后，將大鼠隨機分為正常對照組，模型對照組，金不換總生物堿高、中、低劑量組和三九胃泰組，觀察其對胃酸酸度、胃蛋白酶活性、胃黏膜血流量和胃黏膜組織病理的影響。結(jié)果與模型對照組比較，金不換總生物堿可改善慢性萎縮性胃炎大鼠體重，明顯增加胃液游離酸濃度、胃蛋白酶活性和胃黏膜血流量(P＜0.05或P＜0.01)，并能明顯減輕胃黏膜的病理學(xué)損害。結(jié)論金不換生物堿對慢性萎縮性胃炎模型大鼠胃黏膜有良好的治療作用，為其臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)依據(jù)。

金不換;總生物堿;慢性萎縮性胃炎;胃黏膜保護

筆者以乙醇、去氧膽酸鈉造模的慢性萎縮性胃炎大鼠進行實驗研究，旨在探討金不換總生物堿的藥理作用機制，為臨床治療慢性萎縮性胃炎和開發(fā)新的中藥胃黏膜保護劑提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

主要試藥:金不換總生物堿(廣州博濟醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司，批號為090501)，試驗前以蒸餾水將藥液配制成所需質(zhì)量濃度，4℃貯存?zhèn)溆?三九胃泰膠囊(三九醫(yī)藥股份有限公司，批號為200940731);乙醇(分析純，廣州化學(xué)試劑廠，批號為20092486);去氧膽酸鈉(分析純，上?；瘜W(xué)試劑公司，批號為09020821)，臨用時配置成濃度為20 mmol/L的溶液。胃蛋白酶活性檢測試劑盒(南京建成生物工程公司，批號為20100309)。

主要儀器:Delta 320型pH計及pl303型電子天平(Mettler Toledo公司);LDZ5－2型離心機(北京醫(yī)用離心機廠);Peri Flux System 5000型激光多普勒血流儀(美國 PERIMED公司);WFZ800－D3B型分光光度計(北京瑞利分析儀器公司);DMLB2型顯微攝影系統(tǒng)(德國LELCA公司);325型切片機(英國珊頓公司)。

動物:清潔級SD大鼠，體重(200±30)g，合格證號為2009A063，由中山大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK(粵)2009－0011。

1.2 給藥方法

參照文獻[1]方法并略加改進。隨機將大鼠分為兩組，正常對照組(10只，自由飲水)和胃炎模型組。胃炎模型組于第1～4周每天飲用20 mmo1/L去氧膽酸鈉溶液(現(xiàn)配)，同時前4周每隔10 d，按10 mL/kg劑量灌胃給予60%的乙醇溶液1次;第7～13周每隔7 d輪換1次，分別飲用30%乙醇和20 mmol/L去氧膽酸鈉溶液，共13周。隨機抽取少數(shù)動物，做胃黏膜病理組織學(xué)檢查。確認模型制作成功后，將胃炎模型組動物隨機分為5組，即模型對照組，金不換總生物堿低(15 mg/kg)、中(30 mg/kg)、高(60 mg/kg)劑量組，三九胃泰(270 mg/kg)組。動物均按每100 g體重1.0 mL灌胃上述藥液或蒸餾水，每天1次，共6周。給藥結(jié)束后進行相關(guān)指標檢測。

1.3 觀察指標及檢測方法

一般形態(tài)學(xué)和體重:觀察大鼠精神狀態(tài)、活動情況、毛發(fā)光澤、食欲及大小便，每2周稱體重1次，比較各組動物體重變化。

胃黏膜血流量:將光纖探頭插到大鼠幽門部，選擇5個點，用激光多普勒血流儀測量局部胃黏膜相對血流量值。

胃液分析:末次給藥后禁食24 h(自由飲水)，乙醚淺麻醉下開腹，將幽門結(jié)扎后復(fù)位，縫合腹壁。6 h后脫頸處死，摘取全胃，沿胃大彎剖開胃腔，蒸餾水沖洗胃腔;用pH計測定pH，滴定法測定胃液標本的游離酸，以胃蛋白酶活性檢測試劑盒測定胃蛋白酶活性。

病理組織學(xué)觀察:沿胃小彎自前胃至幽門取全層胃壁1塊(3 mm×20 mm)，10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包理，切片，HE染色，顯微鏡下觀察。胃黏膜組織形態(tài)學(xué)變化分為炎癥、腺體萎縮兩部分，根據(jù)病變的程度分為0～3分，共4級。炎癥評分[2]，0分為無炎癥;1分為在胃黏膜上皮內(nèi)(胃小凹區(qū))或固有腺底部可見多個慢性炎細胞;2分為在胃黏膜小凹區(qū)至黏膜肌層均有較多炎癥細胞浸潤;3分為胃黏膜內(nèi)可見成堆炎細胞聚集灶。腺體萎縮評分[3]，0分為無黏膜肌層增厚隆起;1分為黏膜肌層增厚隆起，突入固有層1/3;2分為平滑肌細胞及纖維細胞突入固有層1/2;3分為平滑肌細胞及纖維細胞突入固有層全層，同時固有層腺體數(shù)目減少或腺體變小及黏膜肌層增厚。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析，結(jié)果均以均數(shù)±標準差()表示。不同劑量組間與對照組的比較采用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對大鼠一般形態(tài)和體重的影響

試驗中，大鼠的精神、活動、食欲、毛發(fā)光澤度以正常對照組為最佳，金不換總生物堿各劑量組以及三九胃泰組次之，模型對照組較差，表現(xiàn)為活動減少、食欲不振、毛發(fā)凌亂無光澤、抓取反抗力差。各組大鼠體重變化見表1。

表1 對胃炎模型大鼠體重的影響(g，±s)

表1 對胃炎模型大鼠體重的影響(g，±s)

注:與正常對照組比較，＊P ＜0.01;與模型對照組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01(下表同)。

劑量(mg/kg)組別正常對照組(n=11)模型對照組(n=9)三九胃泰組(n=12)總生物堿高劑量組(n=11)總生物堿中劑量組(n=10)總生物堿低劑量組(n=12)－ －270 60 30 15治療前362.9 ±53.3 340.8 ±57.8＊349.1 ±70.2 338.5 ±97.3 340.0 ±80.34 340.7 ±64.9治療2周399.4 ±61.1 350.9 ±65.9＊356.0 ±77.3 367.3 ±98.8 351.4 ±75.5 353.4 ±70.2治療4周427.4 ±61.4 347.1 ±63.8＊369.6 ±77.4 387.9 ±97.9 361.0 ±74.1 366.2 ±78.9治療6周457.1 ±64.1 366.1 ±68.6＊402.2 ±70.4 403.4 ±98.9 374.5 ±72.8 384.9 ±81.4

2.2 對胃液游離酸、胃蛋白酶活性和胃黏膜血流量的影響

結(jié)果見表2。可見，與正常對照組比較，試驗結(jié)束后模型對照組大鼠的胃液游離酸濃度、胃蛋白酶活性和胃黏膜血流量均明顯降低(P＜0.01);與模型對照組相比，金不換總生物堿中、高劑量組和三九胃泰組的胃液游離酸濃度增大(P＜0.05或P＜0.01)，金不換總生物堿低、中、高劑量組和三九胃泰組胃蛋白酶活性明顯增加(P＜0.01)，金不換總生物堿中劑量組胃黏膜血流量明顯改善(P＜0.05)，三九胃泰組胃黏膜血流量有一定的改善，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 對胃炎模型大鼠胃游離酸、胃蛋白酶活性和胃黏膜血流量的影響(±s)

表2 對胃炎模型大鼠胃游離酸、胃蛋白酶活性和胃黏膜血流量的影響(±s)

劑量(mg/kg)組別正常對照組(n=11)模型對照組(n=9)三九胃泰組(n=12)總生物堿高劑量組(n=11)總生物堿中劑量組(n=10)總生物堿低劑量組(n=12)－ －270 60 30 15游離酸濃度(mol/L)21.00 ±4.94 11.89 ±5.01＊24.10 ±8.62△37.22 ±6.94▲25.00 ±10.30△22.90 ±8.02胃蛋白酶活性(U)49.17 ±13.79 30.98 ±8.34＊46.04 ±9.66▲54.41 ±13.02▲45.98 ±8.38▲37.36 ±7.37▲胃黏膜血流量(相對值)572.9 ±68.0 450.9 ±40.4＊512.7 ±64.9 498.8 ±73.0 516.2 ±46.7△465.9 ±76.7

2.3 病理組織學(xué)檢查情況

胃病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，正常對照組大鼠的胃底膜壁細胞、主細胞、頸黏液細胞及未分化細胞均清晰可見，胃黏膜結(jié)構(gòu)清晰，排列整齊，固有層內(nèi)少見散在淋巴細胞浸潤;胃壁可見4層結(jié)構(gòu)，其中黏膜層最厚，上皮完好，黏膜肌層分布均勻，無腺體萎縮。模型對照組大鼠的胃底膜壁細胞、主細胞、頸黏液細胞及未分化細胞完全消失，胃壁變薄，僅見2層結(jié)構(gòu);胃黏膜出現(xiàn)明顯炎癥細胞浸潤，上皮細胞結(jié)構(gòu)紊亂，黏膜內(nèi)可見成堆炎癥細胞聚集灶，以淋巴細胞為主，尚有少許漿細胞;部分區(qū)域黏膜層變薄，固有腺體數(shù)目減少;胃黏膜肌層可見肌纖維斷裂、纖維組織增生，且向固有腺體內(nèi)伸入，輕度到中度萎縮性病變，形成局灶性或片狀萎縮。金不換總生物堿各劑量組大鼠的胃壁、胃黏膜的病理改變均明顯輕于模型對照組，慢性胃炎病理改變明顯減輕，多數(shù)大鼠的胃黏膜基本恢復(fù)為正常結(jié)構(gòu)。金不換總生物堿中、高劑量組優(yōu)于陽性對照組。結(jié)果見表3及圖1。

表3 胃炎模型大鼠胃黏膜病理檢查結(jié)果(±s)

表3 胃炎模型大鼠胃黏膜病理檢查結(jié)果(±s)

劑量(mg/kg)組別正常對照組(n=11)模型對照組(n=9)三九胃泰組(n=12)總生物堿高劑量組(n=11)總生物堿中劑量組(n=10)總生物堿低劑量組(n=12)－ －270 60 30 15炎癥指數(shù)0.55 ± 0.29 1.67 ± 0.63＊1.18 ± 0.31△1.21 ± 0.44▲1.33 ± 0.30△1.40 ± 0.32△腺體萎縮0 1.23 ± 0.56＊0.55 ± 0.66▲0.58 ± 0.46▲0.69 ± 0.38▲0.82 ± 0.47▲

圖1 金不換總生物堿對慢性胃炎大鼠胃黏膜組織病理學(xué)的影響

3 討論

由于各種致病因子直接作用引起的或繼發(fā)的宿主細胞炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致胃黏膜損害和腺體破壞，固有膜中炎癥細胞浸潤，黏膜肌層增厚，使黏膜不能完全修復(fù)再生，導(dǎo)致胃黏膜腺體萎縮和(或)腸上皮化生[4]。慢性萎縮性胃炎以進行性胃腺體丟失和腸化為特征，與胃癌發(fā)生密切相關(guān)[5]。藥物或膽汁逆流所致的黏膜抵抗力減低等均可導(dǎo)致慢性萎縮性胃炎的發(fā)生。

本試驗采用20 mmol/L去氧膽酸鈉、30%及60%乙醇灌胃13周建立了慢性萎縮性胃炎大鼠模型。乙醇可直接損傷胃黏膜，引起胃壁血液循環(huán)障礙、組織壞死脫落，造成潰瘍形成;去氧膽酸鈉模擬膽汁反流入胃，直接破壞胃黏膜上的脂蛋白，使卵磷脂轉(zhuǎn)變?yōu)槿苎蚜字筮M一步破壞胃黏膜，引起胃壁組織破壞、炎癥反應(yīng)和血液供應(yīng)障礙，造成潰瘍、糜爛等胃黏膜損傷[2]。

模型對照組大鼠胃游離酸濃度明顯減小，胃黏膜血流量和胃蛋白酶活性明顯降低;胃黏膜的炎癥細胞浸潤明顯，表層上皮細胞有壞死脫落和缺損嚴重;部分黏膜肌層增厚并成束深入固有膜，使固有膜變薄，腺體數(shù)目減少并呈局灶性或片狀性萎縮。與模型對照組比較，金不換總生物堿可改善慢性胃炎大鼠體重，明顯增加胃液游離酸濃度、胃蛋白酶活性和胃黏膜血流量，并能明顯減輕胃黏膜炎癥浸潤和腺體萎縮，表明金不換總生物堿有治療大鼠慢性萎縮性胃炎的作用。

金不換為蓼科植物，又名土大黃，味苦、性寒，具有清熱解毒、消炎、破瘀生新、殺蟲、活絡(luò)止痛之功效[6]。金不換富含大量生物堿，且多種生物堿都有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、消炎等作用。具有生物活性的生物堿主要分為原小檗堿型、阿樸菲型、原阿樸菲型、嗎啡型、蓮花氏烷型、芐基異喹啉型和雙芐基異喹啉型等幾大類[7]。金不換總生物堿除具有鎮(zhèn)痛作用外[8]，本研究結(jié)果顯示其還具有保護胃黏膜的作用。金不換總生物堿可能是通過鎮(zhèn)痛、抗炎、抗氧化、改善胃黏膜血液循環(huán)來發(fā)揮作用。金不換除含有生物堿外，還可能含有皂苷、內(nèi)酯、油脂、強心苷等成分[9]。除生物堿之外，金不換中發(fā)揮胃黏膜保護作用的其他成分的作用機理有待進一步研究。

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Experimental Study on Total Alkaloid of Stephania delavayi Diels for Treating Rat Chronic Atrophic Gastritis

Wu Limeng1，Lai Dongmei1，Chen Juan1，Zhou Changhua2，Ma Renqiang2，Chen Jianwen2(1.Shenzhen Baoan District People's Hospital，Shenzhen，Guangdong，China518101;
2.School of Pharmaceutical Science，Sun Yet－sen University，Guangzhou，Guangdong，China510080)

ObjectiveTo study the effects of total alkaloid of stephania delavayi diels on treating chronic atrophic gastritis(CAG)in rats.Methods 20 mmol/L sodium deoxycholate combined 30% ，60% alcohols were given to rats for 13 weeks to establish CAG model.The rats were randomly divided into six groups:normal control group，model control group，high，medium and low doses groups with total alkaloid of stephania delavayi diels，and Sanjiu Weitain group.The acidity of gastric juice，pepsase activities and volume of blood flow in gastric mucosa were detected，and the pathologic changes of the gastric mucosa were observed by microscope.Results In total alkaloid of stephania delavayi diels treated groups，the body weight was increased(P＞ 0.05)and the concentration of free acid was significantly increased，while pepsase activities and volume of blood flow in gastric mucosa were obviously higher than those in the control groups(P＜ 0.05 orP＜ 0.01).Chronic infiltration of inflammatory cells and atrophy of glands on gastric mucosa were observed less in JB groups than in model group(P＜ 0.05 orP＜ 0.01).Conclusion The total alkaloid of stephania delavayi diels has the satisfactory curative efficacy for chronic atrophic gastritis in rats，which provides the pharmacological basis for its clinical application.

total alkaloid;stephania delavayi diels;chronic atrophic gastritis;protection of gastric mucosa

R285.5;R282.71

A

1006－4931(2011)02－0027－03

吳麗萌(1962－)，女，副主任藥師，從事臨床藥學(xué)與合理用藥研究;陳健文，男，從事藥物藥理學(xué)研究以及新藥研發(fā)，本文通訊作者，(電子信箱)cjw1975@263.net。

2010－11－10)