李毓群

(浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院 ，浙江 臺(tái)州 318020)

正交試驗(yàn)優(yōu)選醋制青皮的炮制工藝

李毓群

(浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院 ，浙江 臺(tái)州 318020)

目的優(yōu)選醋制青皮的最佳炮制工藝。方法以橙皮苷的含量為考察指標(biāo)，考察加醋量、燜潤(rùn)時(shí)間、炒制溫度、炒制時(shí)間對(duì)指標(biāo)成分含量的影響。結(jié)果最佳炮制工藝為加10%醋，燜潤(rùn)時(shí)間3 h，炒制溫度200℃，炒制時(shí)間8 min。結(jié)論提取工藝設(shè)計(jì)合理、結(jié)果可靠，為優(yōu)化醋制青皮的最佳炮制工藝提供了理論依據(jù)。

醋制青皮;正交試驗(yàn);炮制工藝

青皮為蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥幼果或未成熟的果皮，具有疏肝破氣、消積化滯之功效，主治胸肋疼痛、疝氣、食積、乳腫、乳核等癥。中醫(yī)認(rèn)為，青皮有辛烈之性，故多用炮制品，青皮傳統(tǒng)炮制主要是用醋制。2010年版《中國(guó)藥典(一部)》及2005年版《浙江省中藥炮制規(guī)范》將醋制青皮作為法定炮制方法。全國(guó)有20多個(gè)省市地區(qū)都用醋制品，查閱歷代炮制文獻(xiàn)及生產(chǎn)實(shí)地調(diào)查，雖然都為醋制，但實(shí)際操作不一致，導(dǎo)致作為療效指標(biāo)的炮制品中橙皮苷含量差異很大，而長(zhǎng)期以來(lái)又沒(méi)有具體探究原因。筆者通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)醋青皮炮制工藝進(jìn)行優(yōu)選，為臨床用醋制青皮提供最合理的炮制方法，以利于青皮在成藥和制劑中的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用。

1 儀器與試藥

Agilent1200型高效液相色譜儀及其工作站;炒藥鍋等炮制設(shè)備。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純;橙皮苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110721－200618);青皮(產(chǎn)自浙江溫州，批號(hào)為20090811)，所用藥材均購(gòu)自臺(tái)州醫(yī)藥有限公司，經(jīng)臺(tái)州市食品藥品檢驗(yàn)所鑒定，均符合2005年版《中國(guó)藥典(一部)》標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法和結(jié)果

2.1 橙皮苷含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse XDB －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);檢測(cè)器:VWD;流動(dòng)相:甲醇－水(25∶75);流速為1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):284 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

2.1.2 溶液制備

精密稱取橙皮苷對(duì)照品0.005 10 g，加甲醇至50 mL，溶解，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取醋青皮細(xì)粉約0.2 g，精密稱定，取50 mL置量瓶中，加甲醇30 mL超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果表明，供試品與對(duì)照品溶液色譜均在相同保留時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)吸收峰，理論板數(shù)大于8 000。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:吸取對(duì)照品溶液 1，5，10，15，20，25 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積Y為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量 X(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=1 824 033.61X －13 938.42，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣量在0.102～2.55 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)樣5次。結(jié)果平均峰面積為1 769 434，RSD=1.0%(n=5)，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品(批號(hào)為20090811)溶液，分別于制備后 0，3，6，9，12 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果平均峰面積為 1 921 436，RSD=0.3%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取批號(hào)為20090811的樣品，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果平均含量為8.76%，RSD=1.60%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):稱取已測(cè)知含量的樣品約0.1 g精密稱定，加入橙皮苷對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.2 正交試驗(yàn)

2.2.1 因素水平確定

該藥材的主要有效成分為橙皮苷，故以橙皮苷的含量為考察指標(biāo)，對(duì)醋制青皮炮制工藝中的加醋量(因素A)、燜潤(rùn)時(shí)間(因素B)、炒制溫度(因素C)、炒制時(shí)間(因素D)進(jìn)行考察，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，按L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)。因素水平見(jiàn)表2。

表2 炮制工藝正交試驗(yàn)因素水平表

2.2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)正交設(shè)計(jì)表，共進(jìn)行9次試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表3及表4。直觀分析顯示，A1B3C3D3提取工藝最佳，但通過(guò)方差分析發(fā)現(xiàn)B因素?zé)o顯著性差異，其余3個(gè)因素均有非常顯著性差異(P＜0.01)。結(jié)合經(jīng)濟(jì)效益、生產(chǎn)條件等因素，確定最佳工藝為A1B3C3D3，即加10%醋，燜潤(rùn)時(shí)間3 h，炒制溫度200℃，炒制時(shí)間8 min。

2.2.3 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

采用A1B3C3D3提取工藝，測(cè)定同一溫州產(chǎn)3批樣品中橙皮苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表5。

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

中醫(yī)傳統(tǒng)用青皮的習(xí)慣都是用醋制品，但歷代對(duì)其炮制品質(zhì)量的認(rèn)識(shí)均僅限于文獻(xiàn)記載。本研究結(jié)果顯示，加醋量對(duì)結(jié)果影響最大。但對(duì)于加醋量的多少，筆者僅根據(jù)經(jīng)驗(yàn)選定了3個(gè)水平，尚有待進(jìn)一步細(xì)化考察。其他幾個(gè)因素亦然。

試驗(yàn)中，樣品和炒制時(shí)的溫度均勻度對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的誤差很重要。通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選出的最佳醋青皮炮制工藝，可規(guī)范臨床用醋制青皮時(shí)的炮制方法，有利于青皮在成藥和制劑中的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用。

表4 方差分析表

表5 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

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TQ461;R282.71

A

1006－4931(2011)10－0049－02

2010－12－03;

2011－03－30)