李 劍

(浙江省臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院澤國院區(qū)泌尿外科，浙江 臺州 317523)

尿路感染大腸埃希菌的耐藥性及產(chǎn)超廣譜β－內(nèi)酰胺酶檢測

李 劍

(浙江省臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院澤國院區(qū)泌尿外科，浙江 臺州 317523)

目的探討尿路感染大腸埃希菌的耐藥性及產(chǎn)超廣譜β－內(nèi)酰胺酶(ESBLs)檢測。方法對從尿路感染者中段尿標(biāo)本中分離出的96株大腸埃希菌，采用紙片擴散(K－B)法檢測其對15種抗生素的耐藥率，采用改良的酶提取物三維試驗法測定ESBLs。結(jié)果從96株大腸埃希菌中檢出產(chǎn)ESBLs菌株31株，檢出率高達32.29%。大腸埃希菌對頭孢西丁、亞胺培南、氨芐西林舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率較低(＜20%)，對氨芐西林、哌拉西林、頭孢唑林、頭孢他啶、慶大霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星的耐藥率較高(＞50%)。產(chǎn)ESBLs菌株對15種抗生素的耐藥性大部分高于非產(chǎn)ESBLs菌株。結(jié)論對產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的尿路感染，經(jīng)驗用藥可選擇β－內(nèi)酰胺類/β－內(nèi)酰胺酶抑制劑和頭霉類抗生素，對重癥感染一般首選碳青霉烯類抗生素;但最好根據(jù)藥敏試驗結(jié)果選擇敏感藥物進行治療。

尿路感染;大腸埃希菌;超廣譜β－內(nèi)酰胺酶;耐藥性

大腸埃希菌是尿路感染最常見的致病菌?？股貜V泛且不合理的應(yīng)用，特別是第3代、4代頭孢菌素的大量使用，使大腸埃希菌耐藥率逐漸上升，其主要原因是產(chǎn)生了超廣譜β－內(nèi)酰胺酶(ESBLs)[1]。為提高醫(yī)療效果，筆者對從我院尿路感染患者中段尿標(biāo)本中分離出的96株大腸埃希菌進行了15種常用抗生素藥物敏感性試驗及ESBLs檢測，報道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

從2008年1月～2009年9月我院門診和住院尿路感染患者送檢中段尿標(biāo)本中分離出的96株大腸埃希菌。大腸埃希菌ATCC25922為不產(chǎn)酶株質(zhì)控菌株，肺炎克雷伯菌ATCC 700603為ESBLs質(zhì)控菌株。

1.2 細菌鑒定和藥物敏感性試驗

用法國生物梅里埃公司的Vitek－32型微生物分析儀、GNI+鑒定卡鑒定菌株;用紙片擴散(K－B)法(藥敏紙片均購自杭州天和微生物試制有限公司)做藥物敏感性試驗。

1.3 ESBLs檢測

1.3.1 酶粗提物制備

參照文獻[2]并略作改動，取普通平皿上過夜培養(yǎng)的受試菌菌落制成1.5×108CFU/mL菌液，取25 μL菌液，加入6 mL LB肉湯，置35℃恒溫搖床(200 r/min)上，孵育4～6 h。將6 mL培養(yǎng)液以4 000 r/min轉(zhuǎn)速，4℃下離心處理20 min，棄上清液，沉淀加0.75 mL 的 0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖液(pH=7.0)，混勻，－80℃下反復(fù)凍融5次，以14 000 r/min轉(zhuǎn)速、4℃下離心處理2 h，棄沉淀，取上清液，經(jīng)MH瓊脂平板上常規(guī)細菌培養(yǎng)陰性后于－20℃下保存。

1.3.2 ESBLs分析

按文獻[2]，用30 μg頭孢曲松紙片取代頭孢西丁，用36 μL酶粗提液加4 μL的2×104μmol/L鄰氯西林取代40 μL酶粗提液，其余操作同1.3.1。若觀察到狹逢與抑菌圈交接處出現(xiàn)擴大的長菌區(qū)域，視為三維試驗陽性，即ESBLs陽性。

2 結(jié)果

從96株大腸埃希菌中檢出產(chǎn)ESBLs菌株31株，檢出率高達32.29%。檢出的大腸埃希菌對頭孢西丁、亞胺培南、氨芐西林舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率較低(＜20%)，對氨芐西林、哌拉西林、頭孢唑林、頭孢他啶、慶大霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星的耐藥率較高(＞50%)。產(chǎn)ESBLs菌株對15種抗生素的耐藥性大部分高于非產(chǎn)ESBLs菌株(表1)。

表1 產(chǎn)ESBLs菌株與非產(chǎn)ESBLs菌株對15種抗生素的耐藥性

3 討論

隨著第3代頭孢菌素在臨床上的廣泛使用，細菌的耐藥性迅速提高，出現(xiàn)了產(chǎn)ESBLs菌株的流行。大腸埃希菌既是產(chǎn)ESBLs的主要代表菌之一，又是引起泌尿道感染的主要致病菌[1];產(chǎn)ESBLs也是大腸埃希菌對第3代頭孢菌素耐藥的主要原因。ESBLs由質(zhì)粒介導(dǎo)，底物譜廣，能水解大多數(shù)青霉素類、頭孢菌素類和單酰胺類抗生素;此外，產(chǎn)ESBLs菌的耐藥基因編碼經(jīng)常與其他抗生素的耐藥基因聯(lián)結(jié)而使耐藥機制更加復(fù)雜[3];產(chǎn)ESBLs菌還可以通過接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)等形式使耐藥基因在細菌間傳播，造成嚴(yán)重的耐藥問題。目前按編碼基因的類型可將ESBLs基因分為4類，在美國和歐洲，主要的ESBLs屬于TEM和SHV家族;在我國，ESBLs基因以CTX－M型為主，其次為SHV型[4－5]。

本研究采用改良的酶提取物三維試驗法在從我院尿路感染患者中段尿標(biāo)本中分離出的96株大腸埃希菌中檢出31株ESBLs，檢出率高達32.29%。本組產(chǎn)酶菌株的檢出率與國內(nèi)外文獻報道的基本一致[6－7]。大腸埃希菌對頭孢西丁、亞胺培南、氨芐西林舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率均低于20%，對氨芐西林、哌拉西林、頭孢唑林、頭孢他啶、慶大霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星的耐藥率均超過50%。其中，大腸埃希菌對青霉素類抗生素耐藥

率最高，這點與文獻報道一致[8]。氟喹諾酮類曾被廣泛應(yīng)用于治療尿路感染，但近年發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌對氟喹諾酮類藥物耐藥性迅速上升，且該類藥物存在明顯的交叉耐藥性，故臨床醫(yī)生在得到藥物敏感性試驗結(jié)果前，不宜首選此藥[9]。氨基苷類藥物(阿米卡星)雖然敏感性較高，但因具有腎毒性、耳毒性，使用需慎重。頭孢菌素中以頭孢吡肟的抗菌作用最強，本組耐藥率為33.33%，原因可能是第4代頭孢菌素對β－內(nèi)酰胺酶的親和力較低，應(yīng)用時間較短，且能快速地通過細菌的外膜屏障與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合而發(fā)揮較強的抗菌作用。頭霉類抗生素對大腸埃希菌的抗菌活性優(yōu)于第1代、2代頭孢菌素和多數(shù)3代頭孢菌素。亞胺培南是所有被測藥物中對大腸埃希菌抗菌作用最強的抗生素，本組非產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南的敏感率為100%，產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南的敏感率為96.77%。可見亞胺培南對大腸埃希菌具有較強的抗菌作用，可作為本地區(qū)大腸埃希菌重癥感染的首選抗菌藥物。本組β－內(nèi)酰胺類加β－內(nèi)酰胺酶抑制劑氨芐西林舒巴坦和哌拉西林他唑巴坦的耐藥率均低于20%，可能是由于加用β－內(nèi)酰胺酶抑制劑后提高了抗生素對大腸埃希菌所產(chǎn)β－內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性，增強了抗菌作用[10]。

總之，對于產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的尿路感染，經(jīng)驗用藥可選擇β－內(nèi)酰胺類加β－內(nèi)酰胺酶抑制劑和頭霉類抗生素，對重癥感染一般首選碳青霉烯類抗生素，但最好根據(jù)藥物敏感性試驗結(jié)果選擇敏感藥物治療。

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R915;R969.3;R978

A

1006－4931(2011)10－0028－02

李劍，男，主治醫(yī)師，從事泌尿外科臨床工作，(電子信箱)chenh1969@126.com。

2010－01－23)