李杜軍，劉明生，張鵬威，丁仰宏，吳麗媛，曹麗萍，李中桂，周郁斌

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院藥劑教研室，510006;2.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，?？?571101)

天杞顆粒由巴戟天和枸杞子組成。巴戟天強(qiáng)筋骨、溫腎助陽;枸杞子補(bǔ)肝腎滋陰，兼可助陽，與巴戟天相配，可彌補(bǔ)巴戟天助陽有余、滋陰不足之弊，使本方成為陰陽兼補(bǔ)之劑。多糖類成分是巴戟天和枸杞子發(fā)揮免疫增強(qiáng)作用的主要成分［1-2］，但多糖類成分易吸濕，難以制備固體制劑。因此，以往以巴戟天和枸杞子為配方的保健品往往考慮制成液體制劑，而液體制劑不方便攜帶、服用，制劑成本高。筆者對顆粒劑輔料進(jìn)行篩選，以解決此兩味藥提取物中多糖類成分易吸潮的問題。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 756MC紫外可見光分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，PL402-L電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，TDL-40B離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-5299(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，TC-15恒溫電熱套(海寧市華星儀器廠)，200 g搖擺式高速中藥粉碎機(jī)(溫州市大德中藥機(jī)械有限公司)。

1.2 試藥 中藥材購于廣州致信藥業(yè)有限公司，藥材經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)黃海波教授鑒定合格，D-無水葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110833-200503)。

2 方法與結(jié)果

2.1 天杞顆粒的水煎煮工藝條件優(yōu)選

2.1.1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，以多糖為指標(biāo)對水煎煮提取工藝的主要影響因素加水量(A)、提取次數(shù)(B)、提取時間(C)按四因素三水平表進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn)。各因數(shù)水平見表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

2.1.2 對照品溶液的制備 精密量取105℃干燥至恒重的D-無水葡萄糖10.60 mg，置于100 mL量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻作為對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 參考文獻(xiàn)［3］。稱取巴戟天、枸杞子各27份，按正交實(shí)驗(yàn)表下實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每種方法均重復(fù)3次。煎提加熱，保持微沸至規(guī)定時間后停止加熱，放冷，3 500 r·min-1離心10 min。取上清液減壓濃縮至250 mL量瓶中，搖勻，精密吸取10 mL置于分液漏斗中，加入石油醚10 mL，萃取3次，萃取液加入1/5體積的savage試劑(三氯甲烷∶正丁醇=4∶1)，振蕩后離心，精密吸取上清液1 mL，加入95%乙醇5 mL，4℃冰箱靜置24 h，3 500 r·min-1離心10 min，棄去乙醇，沉淀烘干至無醇味，加水溶解并定容于10 mL量瓶中，作為供試品溶液。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 參考文獻(xiàn)［4］。分別精密量取對照品溶液 0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL，分別置具塞試管中，分別加水至2.00 mL，各精密加入5%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速精密加入硫酸5 mL，搖勻，放置10 min，置40℃水浴中保濕15 min，取出后迅速冷卻至室溫，以相應(yīng)的試劑為空白。照紫外-可見分光光度法，在490 nm波長處測定吸光度(A值)，以A值為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:A=6.146 2C －0.000 1，r=0.999 8，結(jié)果顯示葡萄糖在0.021 2 ～0.106 0 mg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.1.5 多糖的含量測定 精密吸取供試品溶液1.00 mL，按“2.1.4”項(xiàng)下操作，測定 A 值，用回歸方程計算供試品溶液中多糖的含量。多糖含量(%)=多糖質(zhì)量/藥材質(zhì)量×100%。

2.1.6 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 按照表2安排實(shí)驗(yàn)，并對結(jié)果進(jìn)行方差分析。供試品正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果和方差分析見表2，3。

表2 正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果

表3 正交實(shí)驗(yàn)方差分析結(jié)果

由表2結(jié)果可知:巴戟天、枸杞子多糖提取的影響因素主次順序?yàn)锽＞C＞A，即浸提次數(shù)＞浸提時間＞加水倍量，綜合各因素的K值和直接比較，最佳提取工藝為:A2B3C3，即加水量15倍，提取1.5 h，提取3次。

由表3結(jié)果可知:提取次數(shù)、提取時間對多糖的提取影響顯著，加水倍量對多糖的提取無顯著影響。因此，從生產(chǎn)成本考慮，可將加水倍量調(diào)整為10倍，最佳提取工藝為:A1B3C3，即加水量10倍，提取1.5 h，提取3次。

2.1.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取藥材3份，根據(jù)篩選得到的提取工藝A1B3C2，進(jìn)行正交驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，測得多糖的含量分別為 0.767 5%，0.743 2%，0.731 9%，平均為0.747 5%，RSD=2.43%(n=3)。

2.2 天杞顆粒的成型工藝研究

2.2.1 天杞顆粒填充劑的優(yōu)選 分別以淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素為填充劑制備顆粒，考察顆粒的吸濕情況。干膏與淀粉、乳糖、糊精、微晶纖維素的比例分別為1∶5，1∶4，1∶3，1∶2 時易成型，顆粒無明顯吸潮現(xiàn)象。

2.2.2 天杞顆粒潤濕劑的優(yōu)選 取干膏20 g、糊精40 g各3份，分別以60%，80%，95%乙醇為潤濕劑制粒，發(fā)現(xiàn)60%，80%的乙醇作黏合劑黏度大，難混勻制粒，95%乙醇易混勻制粒，對制得的顆粒進(jìn)行考察，休止角、稀釋率良好。故選擇95%乙醇做潤濕劑。

2.2.3 天杞顆粒矯味劑的優(yōu)選 分別選用甜菊苷、甜蜜素、阿斯巴甜3種甜味劑進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以藥粉50 g中加入阿斯巴甜2.5 g效果最佳。

2.2.4 天杞顆粒的制備 干膏∶糊精∶阿斯巴甜為1∶4∶0.04，95%乙醇混勻，過篩孔內(nèi)徑 1.40 mm(14目)篩制粒，60 ℃干燥，過篩孔內(nèi)徑(250.0±9.9)μm(65目)篩整粒即得。

3 討論

中藥制劑的吸潮是影響其質(zhì)量的棘手問題，目前解決中藥吸潮問題的關(guān)鍵是輔料選擇或采用顆粒包衣技術(shù)防潮。輔料的防潮效果一般是乳糖＞微晶纖維素＞糊精＞淀粉，輔料之間的比例恰當(dāng)也能夠減少吸濕性;顆粒包衣技術(shù)是采用丙烯酸樹脂或乙基纖維素的乙醇溶液做粘合劑制粒，或者普通方法制粒后將顆粒包上述輔料的膜衣。但顆粒包衣技術(shù)成本高、工序復(fù)雜，一般少用。

考慮到微晶纖維素水溶性不好、乳糖成本太高、淀粉用量太大，暫定糊精作為填充劑進(jìn)一步進(jìn)行考察。干膏分別與混合輔料糊精和淀粉、糊精和乳糖制粒，吸濕率較單一輔料糊精略低，但效果不明顯，在生產(chǎn)中無實(shí)際應(yīng)用意義，故選擇糊精作為填充劑。

實(shí)際生產(chǎn)中需要注意縮短顆粒暴露時間、控制環(huán)境濕度。另外，中藥浸膏吸濕性大往往是因?yàn)槟承┏煞志哂形鼭竦男再|(zhì)，如果吸濕成分為無效成分，可考慮對提取和純化工藝進(jìn)行調(diào)整，以達(dá)到減小劑量、增加穩(wěn)定性的目的。

［1］陳彩英，詹若挺，陳蔚文.巴戟的藥理研究進(jìn)展［J］.中藥新藥與臨床藥理，2009，20(3):291 －293.

［2］孫桂菊，左平國.枸杞多糖功效研究及應(yīng)用狀況［J］.東南大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2010，29(2):209 －215.

［3］賀培益，王米，孟新宇，等.殼聚糖絮凝法澄清復(fù)方黃芪水提液的工藝研究［J］.中國生化藥物雜志，2010，31(3):173－175.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:232.