韓 青，孫國(guó)華

(大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116011)

多發(fā)性骨髓瘤(Multipe myeloma,MM)是發(fā)生在漿細(xì)胞的克隆增殖性的惡性疾病，它的特征表現(xiàn)為骨髓中有大量的克隆性的漿細(xì)胞的增生和積聚，并且能分泌單克隆的免疫球蛋白或其片段，同時(shí)伴有廣泛的溶骨性病變和(或)骨質(zhì)疏松。中國(guó)MM年發(fā)病率約為1/100000，占所有惡性腫瘤的1%，在惡性血液系統(tǒng)疾病中占10%左右，而目前隨著人口老齡化以及檢測(cè)技術(shù)的不斷提高，MM的發(fā)病率不斷增加[1]。

增生的漿細(xì)胞可以產(chǎn)生結(jié)構(gòu)均一的單克隆的免疫球蛋白(M蛋白)。一般來(lái)說(shuō)，它可以分為7型，如IgG、IgA、IgM、IgD、IgE及游離輕鏈(Kappa或Lamda)和無(wú)分泌型[2]，通過(guò)電泳后，它可以呈現(xiàn)出一條有特征性的帶即M帶。骨髓瘤的患者多以骨病、腎病等繼發(fā)病就診，常被誤診為骨病或腎臟疾病。因此，許多患者錯(cuò)過(guò)了最佳的治療時(shí)期。本實(shí)驗(yàn)旨在說(shuō)明免疫固定電泳對(duì)多發(fā)性骨髓瘤診斷和分型的意義。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

30例多發(fā)性骨髓瘤的患者系大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2009～2010年門診或住院病人，均符合國(guó)內(nèi)診斷MM的標(biāo)準(zhǔn)[3]，男20例，女10例，年齡35～75歲。免疫球蛋白正常對(duì)照組采用的是健康體檢者，男20例，女10例，年齡35～74歲，共30例。

1.2 主要儀器

美國(guó)Helena 公司全自動(dòng)電泳儀，西門子BNⅡ免疫分析儀。

1.3 主要試劑

Helena 公司生產(chǎn)的電泳試劑盒，西門子公司生產(chǎn)的免疫球蛋白及血輕鏈檢測(cè)相關(guān)試劑盒。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

免疫固定電泳的檢測(cè)，使用美國(guó)Helena 公司全自動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳儀，第1步根據(jù)血清蛋白質(zhì)的電荷不同而分開，第2步加抗血清：不同抗原與特異性抗體形成抗原抗體復(fù)合物并沉淀下來(lái)，固定后洗脫去蛋白，以去除未結(jié)合蛋白質(zhì)，只保留抗原抗體復(fù)合物于瓊脂板上，最后染色判讀結(jié)果。免疫球蛋白及血輕鏈定量：采用西門子BNⅡ免疫分析儀。采用速率散射比濁分析對(duì)樣本進(jìn)行免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)含量測(cè)定和血輕鏈(Kappa鏈和Lamda鏈)測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)使用SPSS11.5軟件進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)方法使用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 免疫固定電泳結(jié)果判斷

單克隆蛋白帶(M帶)是呈狹窄濃染且致密界限分明的沉淀帶，與蛋白電泳的M帶出于同一個(gè)水平位置，呈“鏡像式”的呼應(yīng)。

2.2 血清免疫固定電泳分型結(jié)果

血清免疫固定電泳分型結(jié)果見表1。30例MM經(jīng)免疫固定電泳之后其中有28例為陽(yáng)性，陽(yáng)性符合率為93%，各種類型呈現(xiàn)明顯濃集的或卷發(fā)狀的濃染帶，表1結(jié)果顯示，28例MM陽(yáng)性患者中，IgG型18例為最多。IgGλ型10例，占35.71%；IgGκ型8例，占28.59%；IgAκ型4例，占14.29%；IgAλ型1例，占3.57%；游離的λ鏈4例，占14.29%；游離的κ鏈1例，占3.57%。

表1 28例MM患者血清免疫固定電泳分型結(jié)果

其中2例為免疫固定電泳陰性(免疫分型百分比按28例計(jì)算)

2.3 MM血清中免疫球蛋白含量測(cè)定結(jié)果

30例MM血清中免疫球蛋白含量測(cè)定結(jié)果見表2。各類型多發(fā)性骨髓瘤患者的免疫球蛋白與正常對(duì)照組免疫球蛋白比較，IgG型中IgG含量明顯增高，P<0.05,IgA、IgM含量明顯下降P<0.05；IgA型中IgA含量明顯增高，P<0.05,IgG、IgM含量明顯下降,P<0.05；輕鏈組的IgG、IgM含量偏低，P<0.05；IgA含量與正常對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性意義，P>0.05。

表2 各型MM免疫球蛋白含量

1)與正常對(duì)照組比較，P<0.05 ；2) 與正常對(duì)照組比較，P>0.05

3 討 論

MM是惡性的漿細(xì)胞病中的最常見的一種單克隆骨髓的漿細(xì)胞惡性增殖性的疾病，其增生的漿細(xì)胞產(chǎn)生結(jié)構(gòu)均一的單克隆的免疫球蛋白即M蛋白，不同類型的MM顯示的M蛋白位置不同[4]。增生的漿細(xì)胞浸潤(rùn)及其所生成的產(chǎn)物可引起一系列的器官功能障礙，臨床多有骨痛、溶骨損害、貧血、腎功能不全、高鈣血癥等表現(xiàn)[5]。據(jù)不同醫(yī)院的統(tǒng)計(jì)資料分析，MM誤診率可達(dá)54.00%～69.11%[6]，誤診的時(shí)間長(zhǎng)則年余，短則數(shù)月，因此，許多MM患者錯(cuò)過(guò)了最佳的治療時(shí)期。

免疫固定電泳技術(shù)是目前最廣泛的應(yīng)用于鑒別M蛋白的方法之一，多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)證明了免疫固定電泳技術(shù)是一種特異性、靈敏度及準(zhǔn)確性很好的能快速分離及鑒別單克隆M蛋白的最直觀的方法。本組30例MM患者中，有2例免疫固定電泳為陰性，分析其可能原因是患者處在治療恢復(fù)期，導(dǎo)致其含量較低，以至于無(wú)法檢測(cè)到或者也可能屬于MM中的另一種類型為不分泌型多發(fā)性骨髓瘤，其余的28例免疫固定電泳均陽(yáng)性，陽(yáng)性符合率為93%。其中,IgGλ型占35.71%；IgGκ型占28.59%；IgAκ型占14.29%；IgAλ型占3.57%；游離的λ鏈占14.29%；游離的κ鏈占3.57%。在IgG型MM中，IgG含量較正常對(duì)照組高，IgA 、IgM較正常對(duì)照組低，P均<0.05；在IgA型MM中，也可以見到IgA含量比正常對(duì)照組含量高，IgG和IgM較正常對(duì)照組低，P也均<0.05。提示高濃度異常的M蛋白可能通過(guò)反饋的機(jī)制而抑制正常人免疫球蛋白的合成。這與國(guó)內(nèi)報(bào)道相一致[7]。M蛋白數(shù)量反映瘤細(xì)胞容量的大小和單克隆增生的程度，由于突變株細(xì)胞惡性增生，正常細(xì)胞受抑，M蛋白明顯增高[8]。目前，MM的發(fā)病率有上升的趨勢(shì)，所以應(yīng)該把M蛋白檢測(cè)作為臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)手段，減少漏診率。隨著中國(guó)人口老齡化的程度進(jìn)一步加深，MM的發(fā)病率也越來(lái)越高。利用免疫固定電泳對(duì)MM診斷及分型鑒定具有重要臨床意義。骨穿雖是診斷此病的金標(biāo)準(zhǔn)，但因它是局灶性病變，一次骨穿很難查出瘤細(xì)胞，況且MM患者的瘤細(xì)胞形態(tài)多種多樣，很難用常規(guī)檢查方法證實(shí)為骨髓瘤細(xì)胞，而免疫固定電泳技術(shù)是結(jié)合了蛋白質(zhì)電泳的高分辨率和抗原抗體反應(yīng)的特異性，而且容易判斷結(jié)果。因此，免疫固定電泳可以大大降低MM的誤診率，對(duì)提高臨床的診斷效率有很大的幫助。

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