周順珍 周國蘭 何 萍 鄭文麗

(貴州省茶葉研究所，貴州湄潭 564100)

茶葉是中華民族傳統(tǒng)的保健飲品，目前中國茶園面積列居世界首位，產(chǎn)量居世界第二位。茶已成為越來越多中外人士飲品的選擇，不僅因為茶本身的芳香誘人，而且飲茶作為一種保健方式正逐漸被人們所接受。茶多酚是茶葉中酚類及其衍生物的總稱，常稱為多酚類，它是茶葉中最重要的保健成分之一，它的藥理作用已得到人們的廣泛認識。

目前測定綠茶中茶多酚含量的方法有GB/T 8313-2008《福林酚試劑比色法》(以下簡稱GB 2008)已于2008年10月1日實施，該新標準是對GB/T 8313-2002《酒石酸亞鐵比色法》(以下簡稱GB 2002)的修訂。新標準實施后，舊標準已作廢，而原有的茶葉產(chǎn)品標準中對茶多酚的指標限量還未作相應(yīng)的修改，多數(shù)企業(yè)還不能接受，仍要求采用舊標準檢測。筆者在實驗中發(fā)現(xiàn)，新標準與舊標準的檢測結(jié)果有較大差異，為此對福林酚比色法測定綠茶中茶多酚含量進行了探討。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

分析天平:CP114型，感量0.000 1g，奧豪斯儀器(上海)有限公司；

離心機：800型，上海浦東物理光學(xué)儀器廠；

過濾器：GG-17型，蘇州津騰實驗設(shè)備有限公司；

紫外可見分光光度計：TU-1810型，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；

酒石酸鉀鈉、硫酸亞鐵、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、福林酚試劑、沒食子酸、碳酸鈉、甲醇：分析純；

實驗用水為蒸餾水；

茶葉樣品：于2010年4月由貴州省茶葉研究所提供的試驗茶。

1.2 實驗方法

(1)GB 2008標準

稱取0.2 g均勻的茶葉磨碎試樣于10 mL離心管中(重復(fù)3次)，加入5 mL在70℃水浴中預(yù)熱過的70%甲醇溶液，輕輕搖動(應(yīng)盡量避免樣品粘于試管壁上)，使其均勻濕潤，然后立即移入70℃水浴中，浸提10 min(隔5 min搖動一次)，浸提后冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入離心機，以3 500 r/min離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶。殘渣用5 mL 70%甲醇溶液提取一次。重復(fù)以上操作，然后合并提取液定容至10 mL，用過濾器減壓過0.45 μm膜。移取該溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，待測。

用移液管分別吸取不同體積的高濃度(10、20、30、40、50 μg/mL)沒食子酸標準工作液A、B、C、D、E、水(作空白對照用)及測定液1.0 mL于25 mL容量瓶中，在每個容量瓶中分別加10%的福林酚試劑5.0 mL，搖勻。反應(yīng)8 min，反應(yīng)溫度15～25℃，然后加4.0 mL 7.5%Na2CO3溶液，加水定容至刻度，搖勻，室溫下放置60 min。用10 mm比色皿于765 nm波長處用分光光度計測定吸光度。用不同體積的高濃度沒食子酸標準工作液A、B、C、D、E的光密度值作參考。

(2)GB 2002標準

稱取3 g均勻的茶葉磨碎試樣于500 mL錐形瓶中(重復(fù)2次)，加沸蒸餾水450 mL，立即移入沸水浴中，浸提45 min(隔10 min搖瓶一次)，浸提完畢后立即趁熱減壓過濾。殘渣用少量熱蒸餾水洗滌2～3次。并將濾液轉(zhuǎn)入500 mL容量瓶中，冷卻后用蒸餾水定容至刻度，搖勻，待測。

用移液管吸取上述溶液1.0 mL于25 mL容量瓶中，加4 mL水、5 mL酒石酸亞鐵溶液，充分混合，再加pH 7.5的磷酸鹽緩沖液至刻度，用10 mm比色杯，在波長540 nm處，以試劑空白溶液作參比，測定吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 測試液的選擇(GB 2008)

由于實驗過程中發(fā)現(xiàn)0.45 μm膜折疊時易碎，過濾得不到理想的濾液，且過濾極慢，因此采用過濾器減壓過0.45 μm膜。在設(shè)置2次重復(fù)測定時誤差較大，可能是過濾時洗瓶造成，為此設(shè)置重復(fù)5次，分別得到濾液1～濾液5，并對其進行測定，結(jié)果列于表1。從表1可以看出，在制備樣品溶液過濾時洗瓶造成濾液1與濾液2～濾液5測定結(jié)果偏差較大，濾液2～濾液5測定結(jié)果的偏差在誤差范圍內(nèi)，因此實驗應(yīng)設(shè)重復(fù)3次，濾液1用于洗過濾器，濾液2、濾液3作為測試液。

表1 過濾時對樣品溶液濃度的影響

2.2 標準工作曲線繪制

以空白水為參比，在765 nm處用紫外分光光度計分別測定兩組0、10、20、30、40、50 μg/mL和0、20、40、60、80、100 μg/mL 5個不同濃度的沒食子酸標準品溶液的吸光度。以吸光度A為縱坐標，沒食子酸濃度c(μg/mL)為橫坐標進行線性回歸，得線性方程為A= 0.004 2c+0.001 4，r2=0.996；A=0.004 1c+0.006 6，r2=0.998 2，滿足分光光度法的實驗要求。

2.3 試驗結(jié)果比對

采用兩種方法對1#～6#茶葉樣品進行測試，測試結(jié)果列于表2。

表2 兩種方法測定結(jié)果比對 %

由表2中可以看出，茶多酚含量較高的1#～4#樣品，新標準比舊標準測定結(jié)果下降了29.7%～30.3%；茶多酚含量較低的5#、6#樣品，新標準比舊標準降低了32.6%～34.2%。由此可得出茶葉中茶多酚含量越低，兩種測定方法測得值差異越大。筆者在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，GB 2002作為茶葉中茶多酚含量測定的前處理方法,具有簡便、快速、經(jīng)濟，儀器設(shè)備簡單的特點；而GB 2008作為前處理方法操作難度較大，較適合于重點實驗室和質(zhì)監(jiān)部門。

3 討論

通過試驗，筆者認為造成兩種方法測定結(jié)果較大差異的原因可能是：

(1)原理不同。GB 2002茶葉中多酚類物質(zhì)能與亞鐵離子形成紫藍色絡(luò)合物，最大吸收波長為540 nm，GB 2008福林酚試劑氧化茶多酚中—OH基團，并顯藍色，最大吸收波長為765 nm。

(2)樣品提取方法不同。GB 2002提取樣品時采用沸水，而GB2008提取樣品時采用70℃的70%甲醇。

(3)參考標準物質(zhì)不同。GB 2002采用經(jīng)驗系數(shù)來計算樣品中茶多酚的含量，而GB 2008則采用沒食子酸作為標準物質(zhì)，建立標準曲線，通過標準曲線來換算樣品中茶多酚含量，計算更為準確。這就提出了新的問題：新標準實施后，舊標準已作廢，原有的茶葉產(chǎn)品標準中對茶多酚的指標限量已不適用，要作相應(yīng)的修改。在企業(yè)送樣檢測茶多酚項目時，要向企業(yè)說明情況，以免企業(yè)對檢測出的數(shù)據(jù)有疑問，引起誤解。

實驗發(fā)現(xiàn)GB 2008標準編寫不詳細，如標準中寫到用移液管分別吸取沒食子酸工作液及測試液各1.0 mL于刻度試管內(nèi)，應(yīng)注明該刻度試管的容量；制備樣品溶液時不宜攪拌，只能輕輕搖動試管；測試液過0.45 μm膜時需用過濾器。

[1] 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所.農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測手冊 茶葉卷 [M].北京：中國標準出版社，2008：1.

[2] GB/T 8313-2002 茶 茶多酚的測定[S].

[3] GB/T 8313-2008 茶葉中茶多酚和兒茶素類的檢測[S].

[4] 黃皓，毛志方,涂云飛,等.兩種方法測定茶葉中茶多酚含量的比較[J].中國加工，2009(2)：43-44.