黃 芳 吳曉霞 劉燕曉 鄭甜甜

(南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，南京 211171)

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

離子色譜儀：PIC-8型，青島普仁儀器有限公司；

C18-SPE柱：北京博納艾結(jié)爾科技有限公司；

超聲波清洗器：KQ2200型，江蘇昆山超聲儀器廠；

數(shù)顯恒溫水浴鍋：HH-2型，金壇市榮華儀器制造有限公司；

電子天平：AUY120型，日本島津公司；

氟化鈉、氯化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鈉、硫酸鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鉀：分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；

茶葉樣品購于當(dāng)?shù)爻校?/p>

所有溶液均用二次去離子水配制。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.3 色譜條件

NJ-SA-4A型陰離子色譜柱(250 mm×4.6 mm)；淋洗液：1.92 mmol/L Na2CO3+1.80 mmol/L NaHCO3，流量為1.5 mL/min；柱溫：20℃；進(jìn)樣量：200 μL。以保留時(shí)間定性，峰面積定量。

1.4 樣品前處理

將茶葉置于烘箱中，于80℃干燥2 h后在研缽中粉碎，過250 μm(60目)篩備用。準(zhǔn)確稱取0.50 g茶葉樣品置于小燒杯中，加入水50 mL，于95℃超聲20 min，定容至100 mL容量瓶中。以1 mL/min的速度經(jīng)過已用1 mL甲醇和3 mL水活化后的C18-SPE柱，棄去前2 mL的流出液，收集中間的流出液。將流出液經(jīng)0.22 μm一次性微孔濾膜過濾，即得到樣品溶液。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和計(jì)算

2 結(jié)果與討論

2.1 浸提方式的選擇

將茶葉分別用沸水浸提、60℃超聲浸提、95℃超聲浸提3種方法進(jìn)行提取，統(tǒng)一超聲時(shí)間為20 min，提取液為50 mL。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：95℃超聲浸提的浸出率相對(duì)較高，60℃超聲浸提率略低于95℃超聲浸提率，沸水浸提的浸出率最低。故以下實(shí)驗(yàn)均采用95℃超聲浸提的方式。

2.2 浸提時(shí)間對(duì)茶葉中各陰離子浸出的影響

為了討論不同超聲時(shí)間對(duì)各陰離子浸出率的影響，將95℃水浴超聲浸提的時(shí)間分別設(shè)置為10、20、30、40 min，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：超聲20 min后，Cl-的提取率有較大波動(dòng)，其余離子在超聲20 min后，提取率達(dá)到較高水平并相對(duì)穩(wěn)定。故實(shí)驗(yàn)中選擇提取時(shí)間為20 min。

2.3 料液比對(duì)茶葉中各陰離子浸出的影響

實(shí)驗(yàn)考察了不同提取液體積對(duì)提取率的影響。精密稱取0.5 g茶葉樣品，分別加入30、50、70、90 mL的提取液，經(jīng)超聲20 min后分別進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同提取液體積對(duì)Cl-的提取率有影響，當(dāng)樣品量一定時(shí)，加入的提取液的量不足時(shí)，各離子提取不完全；提取液的量過多，各離子濃度降低，色譜峰面積反而減小。當(dāng)加入提取液體積為50 mL時(shí)各離子的相對(duì)提取率較高。故選擇提取液體積為50 mL。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和精密度

配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在色譜條件下，按濃度由低到高分別進(jìn)樣，測(cè)定不同濃度下的色譜峰面積和保留時(shí)間，以峰面積(Y)對(duì)濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得到陰離子混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中6種陰離子的線性范圍、線性方程和檢出限，見表1。

表1 6種陰離子線性方程和檢出限

為了考察方法的精密度，在選定的色譜條件下測(cè)定陰離子混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，平行進(jìn)樣9次，經(jīng)計(jì)算6種離子的保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.0%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5.0%，表明方法的精密度較好。

2.5 回收試驗(yàn)

為了驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，測(cè)定茶葉原樣及加標(biāo)樣的6種陰離子含量，原樣及加標(biāo)樣按1.4處理后對(duì)6種陰離子含量進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算測(cè)定結(jié)果的平均值和平均回收率，結(jié)果列于表2。由表2可見，樣品6種離子的加標(biāo)回收率為94.40 %～111.8 %，表明方法的準(zhǔn)確度較高。

表2 茶葉中6種陰離子的加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.6 樣品分析

按選定的實(shí)驗(yàn)條件，對(duì)不同產(chǎn)地的4種茶葉樣品進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果列于表3。

表3 茶葉樣品中陰離子濃度的測(cè)定結(jié)果

注：只檢測(cè)到上述4種離子，NO2-，H2PO4-在本方法下均未檢測(cè)到。

通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同種類、不同產(chǎn)地的茶葉中各陰離子含量有一定差異。云南普洱茶樣品的離子色譜圖見圖1。

圖1 云南普洱茶樣品離子色譜圖

3 結(jié)語

[1] 文君, 高舸.茶葉中微量元素分析進(jìn)展[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2002, 12(3): 381-384.

[2] 李川,王飲.常見茶葉氟含量的聚類分析級(jí)氟安全性探討[J].環(huán)境科技, 2008, 21(6):24-26.

[3] 劉耀華, 倪劉建. 離子色譜法測(cè)定綠茶與烏龍茶中的F-, Cl-, NO3-, SO42-[J]. 環(huán)境科技, 2009, 22(1): 32-33.

[4] 莊會(huì)榮. 離子色譜法測(cè)定茶葉中的無機(jī)陰離子[J]. 理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè), 2009, 45(5): 543-545.

[5] 江錦花,蔡郁蓓. 離子色譜法測(cè)定茶葉中陰離子含量研究[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室, 2005, 22(2):404-405.