趙質(zhì)創(chuàng) 鄭曉冰 朱 虹

(汕頭市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測所，汕頭 515041)

丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、特丁基對苯二酚(TBHQ)作為油脂類抗氧化劑而廣泛應(yīng)用于食用油脂、膨化食品中。我國《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[1]中明確規(guī)定了上述3種抗氧化劑在食品中的限量標(biāo)準(zhǔn)，有些國家則不允許在食品中使用TBHQ。因此建立快速、同時檢測抗氧化劑的方法具有是重大意義。

目前，關(guān)于測定食品中抗氧化劑的方法研究很多，除了繁瑣的紫外分光光度法和薄層層析法外，多采用氣相、液相色譜法[2-7]，而3種抗氧化劑同時測定的方法不多，且大多數(shù)前處理要經(jīng)過萃取、濃縮等步驟，操作繁瑣，導(dǎo)致被測組分在前處理過程損失較大，回收率低。筆者采用HPLC-DAD對食品中BHA、BHT和TBHQ進(jìn)行同時測定，建立了食用油脂和膨化食品中對這3種抗氧化劑的快速準(zhǔn)確檢測方法，滿足實(shí)際應(yīng)用要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1200型，配二極管陣列檢測器(DAD)，美國安捷倫公司；

漩渦振蕩器：美國基因有限公司；

高速離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；

超聲波水浴器：上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；

有機(jī)相過濾頭：13 mm×0.45 μm，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；

甲醇：色譜純；

BHA、BHT、TBHQ標(biāo)準(zhǔn)品：純度分別為99.8%、99.5%、99.7%，德國Dr Ehrenstorfer 公司；

中性氧化鋁：美國安捷倫公司；

混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別稱取BHA、BHT、TBHQ標(biāo)準(zhǔn)樣品各100 mg于100 mL的容量瓶中，用甲醇溶解后并定容至刻度，配制成濃度均為1 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，貯存于0～4℃冰箱中。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

(1)色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×46 mm，5 μm)；流動相流速：1.0 mL/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量：10 μL。

設(shè)置兩種配比的流動相進(jìn)行試驗(yàn)：(1)甲醇- 0.1%甲酸(體積比為12∶88)；(2)甲醇- 0.1%甲酸梯度淋洗，洗脫條件見表1。

表1 HPLC梯度洗脫條件

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mL于5支50 mL比色管中，用甲醇定容至刻度，搖勻，配制成0、5、10、20、40、80 μg/mL系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于液相色譜儀進(jìn)樣分析，以各標(biāo)準(zhǔn)色譜峰保留時間定性，峰面積外標(biāo)法定量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(3)樣品前處理

膨化食品：稱取薯片2.00～5.00 g，粉碎后于25 mL帶刻度具塞比色管中，加入甲醇定容至25mL，加塞混合后置于超聲波水浴中處理15 min，取適量樣液以6 000 r/min離心5 min，取上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后，進(jìn)樣測定。

食用油脂：稱取食用油樣品5.00 g，于10 mL具塞比色管中，加入約6 mL甲醇，渦旋震蕩1 min，靜置待分層后吸取上層甲醇溶液于25 mL帶刻度具塞比色管中，上述操作重復(fù)3次，將收集的上層甲醇溶液定容至25 mL，加入約2 g的中性氧化鋁，振搖，靜置后，取上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后，進(jìn)樣測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測器的選擇

由于試樣中雜峰較多，容易產(chǎn)生假陽性，試驗(yàn)采用DAD檢測器對待測組分進(jìn)行紫外190～400 nm全波長掃描，確定280 nm為測定波長，360 nm為參比波長。為了篩除干擾物質(zhì)，初步定性待測組分后進(jìn)一步定量，提高了檢測的靈敏度。

2.2 流動相的選擇

設(shè)置兩種配比的流動相進(jìn)行試驗(yàn)，來考察3種抗氧化劑的分離效果：(1)甲醇-0.1%甲酸(體積比12∶88)；(2)甲醇-0.1%甲酸梯度淋洗方法。圖1為采用甲醇-0.1%甲酸(體積比12∶88)為流動相時的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖，圖2為采用梯度淋洗時標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖。

圖1 甲醇-0.1%甲酸(體積比12∶88)為流動相時標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2 甲醇-0.1%甲酸梯度淋洗時標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

由圖1、圖2可見，采用梯度淋洗分離效果較好，3種組分在13 min內(nèi)能很好地分離，分離度不低于1.5，峰純度好且峰形對稱。因此流動相采用甲醇-0.1%甲酸梯度淋洗方法。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制含BHA、BHT和TBHQ 3種抗氧化劑的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，各組分濃度均為0、5、10、20、40、80 μg/mL，在1.2(1)設(shè)定的色譜條件下進(jìn)樣測定。對系列標(biāo)準(zhǔn)溶液所得的色譜峰面積(x)和對應(yīng)的濃度(y)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。各組分的線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)見表2。由此可見各組分線性關(guān)系良好，符合定量要求。

表2 3種抗氧化劑線性方程

2.4 精密度、加標(biāo)回收率和檢出限

在1.2(1)色譜條件下對空白薯片和食用油兩種樣品進(jìn)行3水平添加回收試驗(yàn)，每個添加水平取6個平行樣，以3倍信噪比計(jì)算各組分的檢出限?；厥赵囼?yàn)結(jié)果及檢出限見表3、表4。

表3 薯片加標(biāo)回收率、精密度及檢出限(n=6)

表4 食用油加標(biāo)回收率、精密度及檢出限(n=6)

由表3、表4可知，加標(biāo)回收率為85%～106%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%～4.1%，BHA、BHT、TBHQ各組分檢出限分別為0.5、0.5、1.0 mg/kg。該方法回收率較高，精密度較好，滿足實(shí)際樣品檢測要求。

3 結(jié)論

(1)由于測定組分中，TBHQ與BHA極性相近，需選擇優(yōu)化流動相配比且使用梯度洗脫才能使各組分既快又好地分離。采用以甲醇- 0.1%甲酸的梯度洗脫方式，BHA、BHT和TBHQ具有良好的分離度，而且峰形基本一致，所有峰的保留時間重現(xiàn)性好。

(2)采用甲醇作為提取溶劑，與文獻(xiàn)[2]和文獻(xiàn)[6]采用的石油醚、乙腈等提取溶劑的前處理方法相對簡單，回收率高。BHA、BHT和TBHQ最新測定標(biāo)準(zhǔn)NY/T 1602-2008采用甲醇-1%乙酸作為流動相[3]，其中1%乙酸的pH值小于2，超過一般色譜柱的酸性承受范圍。色譜柱長時間在強(qiáng)酸流動相中易導(dǎo)致色譜柱上鍵合的基團(tuán)水解，使填充基質(zhì)硅膠卷曲，影響色譜柱的柱效。本研究采用甲醇-0.1%甲酸溶液作為流動相，相比標(biāo)準(zhǔn)更有利于色譜柱的穩(wěn)定，延長色譜柱的使用壽命。

(3)精密度、回收率和檢出限試驗(yàn)表明，該檢測方法靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度均較高，符合檢測要求。該方法同時測定食品中常見3種抗氧化劑，提取步驟簡便，易操作，適用于日常食品中BHA、BHT和TBHQ的同時測定。

[1] GB 2760-2007 食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2] GB/T 23373-2009 食品中抗氧化劑丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、特丁基對苯二酚(TBHQ)的測定[S].

[3] NY/T 1602-2008 植物油中叔丁基羥基茴香醚(BHA)、2，6-二叔丁基對甲酚(BHT)和特丁基對苯二酚(TBHQ)的測定 高效液相色譜法[S].

[4] 桂學(xué)琴.液相色譜法測定食品中抗氧化劑特丁基對苯二酚[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(6):1 577-1 584.

[5] 仲岳桐.高效液相色譜法測定植物油中特丁基對苯二酚[J].中國食品衛(wèi)生雜志,1997,9(2):11-13.

[6] 陳毓芳,奚星林,李憲華.高效液相色譜法同時測定食用油脂中叔丁基對苯二酚和叔丁基對羥基茴香醚[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2007,17(7):1 163-1 164.

[7] 余濤,葉堅(jiān).高效液相色譜同時測定食品中BHA、BHT、TBHQ方法的研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2007,17(12):2 136-2 137,2 155.