王凌云

(佛山市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測(cè)中心，佛山 528000)

磺胺類藥物(SAs)和氯霉素(CAP)的殘留對(duì)人類具有嚴(yán)重的毒副作用，可引起癌癥、畸形、抗藥性及某些中毒現(xiàn)象。美國(guó)、歐盟等已明文規(guī)定禁止在食品工業(yè)中使用該類藥物[1]。中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部2002年235號(hào)公告規(guī)定動(dòng)物性食品中SAs總量不得超過(guò)0.1 mg/kg ；氯霉素及其鹽、酯在所有可食組織中不得檢出。目前國(guó)內(nèi)檢測(cè)磺胺類藥物和氯霉素的方法主要有酶聯(lián)免疫法、高效液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法[2-5]。上述方法存在溶劑用量大、操作繁瑣及分析對(duì)象單一等缺點(diǎn)。筆者采用基質(zhì)固相分散技術(shù)實(shí)現(xiàn)了磺胺和氯霉素的同時(shí)提取凈化，有效地縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，具有操作簡(jiǎn)單快捷、溶劑用量少等特點(diǎn)，可進(jìn)行大批量分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：Quattro Premier XE型，美國(guó)Waters公司；

磺胺嘧啶(SD)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲惡唑(SMZ)、磺胺間甲氧嘧啶(SMM)、磺胺甲氧嗪(SMP)、磺胺喹惡啉(SQ)、磺胺地索辛(SMZ) 、氯霉素(CAP)：純度均大于97.5%，德國(guó)Dr．Ehrenstorfer公司；

乙腈、甲酸、乙酸乙酯、乙酸銨：色譜純；

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

取適量的標(biāo)準(zhǔn)品分別用乙腈配制成質(zhì)量濃度為100 μg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備溶液，再將其配制成10 μg/mL (SAs)和0.5 μg/mL(CAP)的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4℃下避光保存。

1.3 樣品提取

取100 g雞肉樣品于組織搗碎機(jī)中打碎，準(zhǔn)確稱取0.5 g(精確到0.01 g)置于玻璃研缽中，加入2.0 g C18顆粒研磨均勻至5 mL注射器中(底部裝有脫脂棉)，壓實(shí)，加蓋一層脫脂棉。用10 mL乙腈少量多次洗滌研缽和研錘，洗液轉(zhuǎn)移上柱，控制流速約為1 mL/min，收集流出液。將洗脫液在50℃下減壓蒸發(fā)至干，殘?jiān)? mL流動(dòng)相溶解，過(guò)0.2 μm微孔濾膜，濾液供UPLC-MS-MS分析。

1.4 基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

稱取5份0.5 g陰性試樣(精確到0.01 g)，分別加入標(biāo)準(zhǔn)工作液2、10、20、40、100 μL，余下步驟同1.3樣品提取。

1.5 色譜條件

色譜柱： BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；柱溫:40℃；進(jìn)樣量:10 μL。

正離子模式下的流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸乙腈溶液，B相為0.5 mmol/L乙酸銨-0.1%甲酸水溶液。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 正離子模式下梯度洗脫程序

負(fù)離子模式下的流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸乙腈溶液，B相為水溶液；梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

表2 負(fù)離子模式下梯度洗脫程序

1.6 質(zhì)譜條件

電噴霧電離源(ESI)：磺胺采用正離子模式，氯霉素采用負(fù)離子模式。正離子模式下，毛細(xì)管電壓：3.2 kV；離子源溫度：105℃；脫溶劑溫度：400℃；脫溶劑氣流量：980 L/h；錐孔反吹氣流量：100 L/h。

負(fù)離子模式下，毛細(xì)管電壓：1.5 kV；離子源溫度：100℃；脫溶劑溫度：350℃；脫溶劑氣流量：500 L/h；錐孔反吹氣流量：50 L/h。

正負(fù)離子分開(kāi)采集，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下，選擇離子、錐孔電壓及碰撞誘導(dǎo)解離能量參數(shù)見(jiàn)表3。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸附劑的用量

表3 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)分析的質(zhì)譜參數(shù)

注：1)為定量離子。

在0.5 g樣品中分別加入1.0、1.5、2.0、2.5 g C18顆粒，考察C18顆粒吸附劑用量對(duì)提取效果的影響。結(jié)果表明，樣品質(zhì)量與吸附劑用量為1∶2、1∶3時(shí)，回收率較低且背景值高，說(shuō)明吸附劑用量不足以將樣品完全分散，不利于分析物從基質(zhì)中分離；兩者比例為1∶5時(shí)，回收率下降，顯示C18顆粒對(duì)SAs和CAP的吸附增強(qiáng)，需要更多的洗脫劑；當(dāng)樣品質(zhì)量與吸附劑用量為1∶4時(shí)，獲得良好的提取效果，回收率為82.1%～90.4%，這與張素霞等[6]以C18顆粒MSPD提取豬肌肉中磺胺類藥物時(shí)樣品質(zhì)量與分散劑用量比為1∶4，奉夏平等[7]以C18顆粒MSPD提取動(dòng)物源食品中氯霉素時(shí)樣品質(zhì)量與分散劑用量比為1∶4相一致。因此確定C18顆粒的用量為2.0 g。

2.2 洗脫劑的選擇

洗脫劑的種類和用量直接影響分析物的回收率，試驗(yàn)考察不同體積下乙腈和乙酸乙酯對(duì)SAs和CAP的洗脫效果。結(jié)果顯示，當(dāng)乙酸乙酯的體積為10.0 mL時(shí)，回收率最高，但SAs的回收率小于65%；乙腈作為洗脫劑在體積達(dá)到10.0 mL時(shí)獲得滿意的回收率；繼續(xù)增加乙腈的用量，回收率趨于平穩(wěn)，沒(méi)有明顯的提高。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯的洗脫液較易乳化，需要破乳和脫脂處理。綜合考慮，選擇乙腈作為洗脫劑。

2.3 基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線及其檢出限

在SAs為10～500 ng/mL和CAP為0.5～25 ng/mL濃度范圍內(nèi)，8種獸藥的峰面積和濃度之間呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。按添加水平SAs為40 μg/kg、CAP為2 μg/kg，定量離子的信噪比(S/N)為3時(shí)，方法的檢出限、線性方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表4。

2.4 添加回收試驗(yàn)

在0.5 g空白雞肉樣品中按SAs為40、100、200 μg/kg，CAP為2、5、10 μg/kg的水平添加標(biāo)準(zhǔn)工作液，每個(gè)添加水平對(duì)4個(gè)樣品平行測(cè)定，計(jì)算平均回收率和精密度，結(jié)果見(jiàn)表5。 由表5可知，8種獸藥的平均回收率為81.6%～106.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%～7.1%，表明該方法有良好的精密度和準(zhǔn)確度，能夠達(dá)到痕量分析要求。

表4 磺胺和氯霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程及其檢出限

表5 磺胺和氯霉素在雞肉樣品中的添加回收率(n=4)

3 結(jié)語(yǔ)

建立了基質(zhì)固相分散-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定雞肉樣品中磺胺和氯霉素殘留量分析的方法。該方法簡(jiǎn)單快捷、準(zhǔn)確可靠，溶劑用量少，適用于大批量樣品的定性定量分析，滿足痕量分析要求。

[1] 中國(guó)有機(jī)質(zhì)譜學(xué)第十二屆全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集.氯霉素和磺胺類藥物的LC-MS/MS分析[C].北京：原子能出版社，2003.

[2] GB/T 21316-2007 動(dòng)物源性食品中磺胺類藥物殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法[S].

[3] SN 0208-1993 出口肉中十種磺胺殘留量檢驗(yàn)方法[S].

[4] GB/T 20756-2006 可食性動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

[5] SN 0341-1995 出口肉及肉制品中氯霉素殘留量檢驗(yàn)方法[S].

[6] 張素霞,李俊鎖,錢(qián)傳范.豬肌肉組織中磺胺類藥物的MSPD凈化和HPLC測(cè)定[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),1999,30(6):531-535.

[7] 奉夏平,張亮,張卓恒,等. MSPD/PVT-GC/MS測(cè)定動(dòng)物源食品中氯霉素[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005,44(2):65-68.