黃艷梅 孫春蕾

(安徽亳州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，亳州 236800)

燕窩因其含有人體必需的多種高級蛋白質(zhì)，一直有著“東方珍品”的美譽(yù)。就在燕窩系列產(chǎn)品消費(fèi)日漸升溫之時，燕窩的安全和質(zhì)量問題也日益突顯。基于利益驅(qū)動，許多商家通過改變燕窩的形狀、顏色，如染色、漂白、沾膠等盡可能將燕窩做得“漂亮”以吸引消費(fèi)者。亞硝酸鹽與硝酸鹽的功能是護(hù)色劑和防腐劑，它們不僅使燕窩制品呈現(xiàn)良好的色澤，還可以防止肉毒桿菌等微生物對燕窩的破壞。但是亞硝酸鈉是食品添加劑中急性毒性較強(qiáng)的物質(zhì)之一。

近兩年，筆者在測定白燕、血燕及燕窩制品中的亞硝酸鹽時發(fā)現(xiàn)大部分燕窩含有亞硝酸鹽。按照使用量說明來計(jì)算，其中部分產(chǎn)品的含量滿足亞硝酸鹽在肉類中使用限量的國家標(biāo)準(zhǔn)[1]，但也有的產(chǎn)品大大超標(biāo)，如有的血燕中以亞硝酸鹽計(jì)的含量高達(dá)3 000 mg/kg，而國家對熟肉制品中亞硝酸鹽殘留量不超過30 mg/kg。因此加強(qiáng)對燕窩中亞硝酸鹽的檢驗(yàn)監(jiān)督十分必要。

目前燕窩行業(yè)沒有相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)，燕窩中亞硝酸鹽的檢測也未見報道。GB 5009.33-2010[2]規(guī)定采用氫氧根體系梯度淋洗，30 min完成分析。

筆者采用碳酸根體系等度淋洗，利用離子色譜陰離子分析柱對燕窩中亞硝酸鹽進(jìn)行分離測定，以保留時間定性，標(biāo)準(zhǔn)曲線峰面積定量，22 min同時完成8種陰離子的測定，取得較好的效果。本法與分光光度法[2]進(jìn)行比對試驗(yàn)，結(jié)果表明兩種方法測定結(jié)果基本一致。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

離子色譜儀：ICS-900型，配電導(dǎo)檢測器(檢測池溫度為30℃)，并配AS40自動進(jìn)樣器，美國戴安公司；

可見分光光度計(jì):7230G型,上海精密科學(xué)儀器有限公司；

電子天平：XP205型,感量0.01、0.1 mg,瑞士梅特勒-托利多公司；

冷凍離心機(jī)：Vecocity 18RL型，澳大利亞Dynamica公司；

超聲波清洗器：KQ3200E型，昆山超聲儀器有限公司；

氟化鈉、溴酸鉀、氯化鈉、亞硝酸鈉，溴化鉀、硝酸鈉、磷酸氫二鈉、硫酸鈉等：基準(zhǔn)試劑，天津光復(fù)化工研究所；

碳酸鈉：基準(zhǔn)試劑，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；

碳酸氫鈉：優(yōu)級純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；

淋洗液:稱取23.85 g碳酸鈉和3.36 g碳酸氫鈉，用高純水定容至500 mL容量瓶中，混勻，配制成淋洗液濃縮液。臨用時，吸取20 mL淋洗液濃縮液用高純水定容至2 000 mL，混勻，即為4.5 mmol/L Na2CO3-0.8 mmol/L NaHCO3混合溶液；

燕窩：市售;

實(shí)驗(yàn)用水為高純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：IonPac AS23(4 mm×250 mm)；保護(hù)柱：IonPac AG23(4 mm×50 mm)；流動相：4.5 mmol/L Na2CO3-0.8 mmol/L NaHCO3,流速為1.0 mL/min。

1.3 樣品溶液的制備

稱取試樣勻漿2.000 g左右，精確至(0.001 g),以80 mL水洗入100 mL容量瓶中，超聲提取30 min,每隔5 min振搖一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置25 min，冷卻后用水定容至刻度，混勻，靜置。溶液經(jīng)濾紙過濾后，于10 000 r/min離心15 min,上清液稀釋10倍后備用。

1.4 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的配制

分別準(zhǔn)確稱取以下基準(zhǔn)試劑，用高純水溶解并定容至100 mL,配成各陰離子濃度為1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，見表1,再將標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液按表2配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

表1 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的制備

表2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別吸取上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.0于100 mL容量瓶中，用高純水定容至刻度，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，其中亞硝酸根濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L。

1.5 測定方法

首先對C18柱活化再生，先用5 mL色譜純甲醇沖洗，再用10 mL高純水沖洗，靜置30 min后使用。Ag柱和Na柱用10 mL高純水通過，靜置活化30 min。取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列和待測樣品溶液，分別依次過0.22 μm水性濾膜、C18柱、Ag柱和Na柱，棄去前面7 mL，收集洗脫液，待測。進(jìn)樣量為100 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜圖

按照1.2色譜條件獲得的標(biāo)準(zhǔn)樣品和燕窩樣品的色譜圖見圖1、圖2。

1—F-；； 3—Cl-；；5—Br-；；；

；；

2.2 線性關(guān)系考察

分別吸取100 mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mL于100 mL容量瓶中，用高純水定容至刻度，其中亞硝酸根濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L。按照上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y),濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為Y=1.349X-0.050 3，相關(guān)系數(shù)r=0.999 1。

試驗(yàn)結(jié)果表明：亞硝酸根濃度在 0～10 mg/L 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取試樣溶液，按照1.2色譜條件在0、1、2、3、6、8、12、24、48 h測定，測得亞硝酸根含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.88%，見表3。結(jié)果表明樣品溶液在配制48 h內(nèi)穩(wěn)定。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 精密度試驗(yàn)

按照樣品測定方法，分別對白燕和血燕樣品進(jìn)行6次平行試驗(yàn)，測得亞硝酸根含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.22%和3.12%，由此可見方法的精密度良好。試驗(yàn)結(jié)果見表4。

2.5 回收試驗(yàn)

稱取試樣勻漿2.000 g左右，精確至0.001 g, 分別精密加入1 000 mg/L 1.0、2.0、5.0 mL亞硝酸根標(biāo)準(zhǔn)儲備液，并以80 mL水洗入100 mL容量瓶中，超聲提取30 min,每隔5 min振搖一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置25 min，冷卻后用水定容至刻度，混勻，靜置。溶液經(jīng)濾紙過濾后，以10 000 r/min離心15 min,上清液稀釋10倍后備用。按照上述色譜條件進(jìn)行測定，外標(biāo)法計(jì)算回收率，高、中、低3種濃度的回收試驗(yàn)結(jié)果見表5。

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表5 回收試驗(yàn)結(jié)果

2.6 檢出限

以信噪比3∶1計(jì)算檢出限，亞硝酸根的最小檢出濃度為0.2 mg/kg。以信噪比10∶1計(jì)算定量限，亞硝酸根的最小定量濃度為0.6 mg/kg。

2.7 樣品測定

精密稱取混合均勻的燕窩樣品6份，按照試驗(yàn)方法測定樣品中的亞硝酸根含量，結(jié)果列于表6。

表6 燕窩樣品測定結(jié)果

2.8 比對試驗(yàn)

用離子色譜法和分光光度法對同一樣品的亞硝酸鹽含量進(jìn)行測定，分光光度法的測定方法如下：

標(biāo)準(zhǔn)溶液(400 mg/L)的配制： 準(zhǔn)確稱取0.100 0 g于110～120℃干燥恒重的亞硝酸鈉，加水溶解移入250 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)使用液(10 mg/L)的配制：臨用前吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液(400 mg/L) 5.0 mL于200 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。

樣品測定：稱取2.00 g均勻試樣置于100 mL燒杯中，加12.5 mL飽和硼砂溶液，攪拌均勻，以70℃左右約300 mL的水將試樣洗入500 mL容量瓶中，于沸水浴中加熱15 min,取出冷卻，并放置室溫。加入5 mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入5 mL乙酸鋅溶液以沉淀蛋白質(zhì)。加水至刻度，搖勻，放置30 min,上清液用濾紙過濾，棄去初濾液30 mL，濾液備用。吸取試樣濾液2.0 mL于50 mL帶塞比色管中，另吸取0.00、0.1、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、2.5 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液分別置于50 mL帶塞比色管中(濃度相當(dāng)于0、0.020、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.50 mg/L)。在標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管中分別加入2 mL 4 g/L對氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置3～5 min后各加入1 mL 2 g/L鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15 min,用2 cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長538 nm處測吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)(Y),以濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時做試劑空白。分光光度法的線性方程為Y=0.661 2X-0.024 5，相關(guān)系數(shù)r=0.995。比對實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表7。

表7 離子色譜法和分光光度法檢測結(jié)果對比

3 結(jié)語

采用離子色譜-抑制電導(dǎo)檢測模式對燕窩中亞硝酸鹽進(jìn)行了測定。實(shí)驗(yàn)表明，離子色譜法和分光光度法對同一樣品的檢測結(jié)果基本一致，兩種方法具有很好的可比性。而離子色譜法具有快速、靈敏、選擇性好和同時測定多種組分的優(yōu)點(diǎn)，更適合對燕窩及其制品的質(zhì)量檢測。應(yīng)注意的是離子色譜法每次完成樣品測定后，用10倍淋洗液分別清洗保護(hù)柱和色譜分析柱，以防止柱子污染，出現(xiàn)峰拖尾現(xiàn)象。

[1] GB 2760-2007 食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2] GB 5009.33-2010 食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的測定[S].