張海紅,劉紅彬

(河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系,河北張家口075000)

山楂葉系薔薇科植物山里紅 (Crataegus pinnatifida Bge.var.majoy N.E.Br.)或山楂 (Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥葉子[1],主要含有黃酮類化合物.研究表明,山楂葉中黃酮類化合物具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗腫瘤作用,還具有抗糖尿病及其并發(fā)癥等多種藥理及保健作用[2-6].山楂葉中黃酮類成分的提取,目前廣泛使用的是甲醇索氏回流提取[1].但此方法存在提取溫度較高、耗時(shí)、溶劑消耗大等缺點(diǎn).本研究采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)影響超聲提取的因素如甲醇濃度、甲醇用量、提取次數(shù)和提取時(shí)間進(jìn)行考察,優(yōu)化山楂葉黃酮類成分的提取工藝.

1 儀器和試劑

1.1 儀器

KQ-250E型超聲波清洗器 (昆山市超生儀器有限公司);RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 (上海亞榮生化儀器廠);Lab Tech UV紫外/可見分光光度計(jì) (北京萊伯泰科儀器有限公司).

1.2 材料

山楂葉 (采自河北省張家口市);蘆丁 (中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)100080-200707);甲醇、無水三氯化鋁、亞硝酸鈉、硝酸鋁、均為分析純.

2 方法和結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取干燥至恒重的蘆丁20 mg,置100 mL容量瓶中,甲醇定容.精密量取1、2、3、4、5 mL置25 mL容量瓶中,各加水至6 mL,加5%亞硝酸鈉溶液1 mL,搖勻,放置6 min,加10%硝酸鋁溶液1 mL,搖勻,放置6 min,加氫氧化鈉溶液10 mL,再加甲醇至刻度,搖勻,靜置15 min,在508 nm處測(cè)定吸光度.以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),得出回歸方程為y=11.775x-0.0358,R2=0.9999,蘆丁在8～40μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 (見圖1).

圖1 蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 最佳提取工藝的優(yōu)化

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上對(duì)山楂葉中黃酮類成分的最佳提取工藝進(jìn)行考察,精密稱取山楂葉細(xì)粉3 g,共9份,按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(34)(見表1)要求加入一定量的甲醇,超聲波提取一定時(shí)間和次數(shù),減壓抽濾,提取液經(jīng)濃縮轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中,加甲醇定容,濾過,續(xù)濾液按“2.1”方法測(cè)定吸光度值.計(jì)算得每克原藥材中含有總黃酮 (mg)的百分?jǐn)?shù).(見表2)

表1 考察因素及水平

表2 正交實(shí)驗(yàn)L_9(34)極差分析

從表2可以看出,對(duì)山楂葉中總黃酮提取的影響程度依次為B(甲醇倍數(shù)) ＞A(甲醇濃度) ＞D(提取次數(shù))＞C(提取時(shí)間),即影響最顯著的因素是甲醇倍數(shù),其次為甲醇濃度,而提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)提取影響不顯著.最佳提取工藝為A2B3C1D2,即20倍量80%的甲醇提取兩次,每次10 min為黃酮類成分的最佳提取工藝.

3 提取工藝的驗(yàn)證

取同一批山楂葉按優(yōu)化的工藝提取,每批100g提取3批,與最佳工藝相比得平均相對(duì)提取率為98.40%,RSD為2.6%.說明該工藝穩(wěn)定可行,重現(xiàn)性好,適宜大量提取.

4 結(jié) 論

超聲波法的提取最佳條件為：加20倍量的80%的甲醇,連續(xù)提取兩次,每次10 min,總黃酮的提取率高達(dá)89.92%,本實(shí)驗(yàn)方法相比傳統(tǒng)的回流法具有耗時(shí)短,溶劑用量少,工藝簡(jiǎn)單的特點(diǎn),利用該法得到的總黃酮含量較高,是一種較理想的提取山楂葉中黃酮類物質(zhì)的方法.

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典二部 [S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：221

[2] 林秋實(shí).山楂及山楂黃酮預(yù)防大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的分子機(jī)制研究 [J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2000,22(02)131-135

[3] 楊宇杰,王春民,黨曉偉,等.山楂葉總黃酮對(duì)高脂血癥大鼠血管功能損傷的保護(hù)作用 [J].中草藥,2007(11)：1687-1690

[4] 李莉,呂紅,龐紅.山楂葉總黃酮抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究 [J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007,18(09)：2143-2144

[5] 高瑩,肖瑩.山楂及山楂黃酮提取物調(diào)節(jié)大鼠血脂的效果研究 [J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2002,14(03)：14-16

[6] 陳四平,臧亞茹.山楂葉的研究進(jìn)展 [J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2003,20(02)：164-165