楊紹群, 許靜靜, 馬雪, 張善玉＊

(1.長(zhǎng)白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(延邊大學(xué)),吉林延吉133002;2.延邊大學(xué)藥學(xué)院藥學(xué)系,吉林延吉133002)

關(guān)蒼術(shù)的TLC-GC-MS和GP-MSE-GC-MS鑒別

楊紹群1, 許靜靜2, 馬雪2, 張善玉1＊

(1.長(zhǎng)白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(延邊大學(xué)),吉林延吉133002;2.延邊大學(xué)藥學(xué)院藥學(xué)系,吉林延吉133002)

利用薄層色譜-氣質(zhì)聯(lián)用(TLC-GC-MS)和氣流吹掃微注射器萃取與氣質(zhì)聯(lián)用(GP-MSE-GC-MS)技術(shù)對(duì)關(guān)蒼術(shù)藥材進(jìn)行鑒別.結(jié)果顯示:關(guān)蒼術(shù)藥材在薄層色譜(TLC)比移值約為0.65處有1個(gè)特殊的黃色斑點(diǎn),經(jīng) GC-MS分析,初步鑒定其主要成分為3,8-Dimethyl-4-(1-methylethylidene)-2,4,6,7,8,8a-hexahydro-5(1H)-azulenone(化合物a);關(guān)蒼術(shù)藥材與易混藥材茅蒼術(shù)和白術(shù)的 GP-MSE-GC-MS色譜圖比較,關(guān)蒼術(shù)成分中含有峰面積較大并有利于藥材鑒別的4個(gè)特殊峰,其中2個(gè)初步鑒定為化合物a和2-(3,7-Dimethyl-octa-2,6-dienyl)-4-methoxy-phenol(化合物b).實(shí)驗(yàn)表明,GP-MSE-GC-MS方法比 TLC-GC-MS方法能夠提供更多的成分信息,且具有樣品用量少、操作簡(jiǎn)便、精確度高等優(yōu)勢(shì),是一種新的中藥材鑒別及其主要成分測(cè)定的技術(shù).

關(guān)蒼術(shù);薄層色譜鑒別;微液萃取;GC-MS

0 引言

關(guān)蒼術(shù)為多年生草本菊科植物關(guān)蒼術(shù) (Atractylodesjaponicakoidz.exkitam)的干燥根,具有健脾燥濕、發(fā)汗解表、明目、祛風(fēng)、辟穢的功效[1].在中國(guó),以其揮發(fā)性含量低而視作白術(shù)偽品,而日本藥典(第15版)和韓國(guó)藥典(第9版)中將關(guān)蒼術(shù)作為白術(shù)使用.在朝鮮族民間也經(jīng)常把關(guān)蒼術(shù)作為治療胃潰瘍、慢性胃炎及消化系統(tǒng)疾病的藥物[1].為了保護(hù)和開(kāi)發(fā)利用民族藥材資源,不少科研工作者對(duì)其化學(xué)成分[2-5]和藥理學(xué)[6-9]等進(jìn)行了研究,但對(duì)其鑒別方法的研究卻鮮有報(bào)道[10].薄層鑒別法具有操作簡(jiǎn)便、成本低、快速等優(yōu)點(diǎn),在1塊薄層板上可同時(shí)觀測(cè)到斑點(diǎn)的數(shù)量、色澤、位置、面積等多種信息,在中藥質(zhì)量控制中得到廣泛應(yīng)用;但 TLC的定性分析時(shí),影響因素較多,專(zhuān)屬性較差.楊翠等最新開(kāi)發(fā)的氣流吹掃微注射器萃取(GP-MSE-GC-MS)技術(shù)[11-12],可用于揮發(fā)性和半揮發(fā)性物質(zhì)的分析鑒定.本實(shí)驗(yàn)采用TLC-GC-MS和 GP-MSE-GC-MS法研究了關(guān)蒼術(shù)的鑒別方法,為提高關(guān)蒼術(shù)的質(zhì)量控制和 GPMSE-GC-MS技術(shù)的推廣應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

GC-MS 2010(日本島津公司),250 uL微型注射器(美國(guó) HAMIL TON公司);超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠(chǎng));高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司);ME-101多功能微萃取儀(長(zhǎng)白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(延邊大學(xué))自制)[8].

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

關(guān)蒼術(shù)藥材(2009年末采集于吉林省延吉市,經(jīng)延邊大學(xué)藥學(xué)院藥學(xué)系呂惠子副教授鑒定為Atractylodesjaponicakoidz.exkitam的根莖);茅蒼術(shù)(中國(guó)藥品生物制品鑒定所,批號(hào):120932-200405);白術(shù)(中國(guó)藥品生物制品鑒定所,批號(hào):120925-200708);高效硅膠 G板、高效硅膠 GF254薄層板(青島海洋化工廠(chǎng));顯色劑(5%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液);其他試劑均為分析純.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 TLC-GC-MS鑒別

2.1.1 TLC鑒別 精密稱(chēng)取關(guān)蒼術(shù)藥材、茅蒼術(shù)和白術(shù)對(duì)照藥材粉末0.5 g,置于50m L具塞錐形瓶中,加正己烷5 m L,超聲提取30 min,靜置,濾過(guò),即得供試液.

分別取各供試品溶液10 uL,分別點(diǎn)于同一高效硅膠 G薄層板上,以石油醚乙酸乙酯(體積比為10∶1)為展開(kāi)劑展開(kāi);取出晾干,噴以5%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液,在105℃下烘烤至顯色清晰,日光下檢視.

2.1.2 GC-MS分析 精密吸取供試品溶液30 μL,條狀點(diǎn)樣于硅膠 G板上,在旁邊同時(shí)點(diǎn)關(guān)蒼術(shù)、蒼術(shù)和白術(shù),展開(kāi)條件同上;將關(guān)蒼術(shù)條狀點(diǎn)樣部分用干凈玻璃板蓋住后,顯色,檢視,標(biāo)出特殊斑點(diǎn)位置;仔細(xì)刮取與特殊斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)處關(guān)蒼術(shù)特殊成分譜帶和沒(méi)有點(diǎn)樣的空白處硅膠 G,分別用正己烷溶解,過(guò)濾,按2.3分析條件下進(jìn)行 GCMS分析.

2.2 GP-MSE-GC-MS鑒別

分別精密稱(chēng)取關(guān)蒼術(shù)藥材、茅蒼術(shù)和白術(shù)對(duì)照藥材粉末5 mg,用ME-101多功能微萃取儀進(jìn)行萃取.萃取劑為正己烷,萃取溫度為250℃,萃取時(shí)間為2min,氮?dú)饬魉贋?m L/m in,冷凝溫度為-4℃.萃取液用正己烷定容至100μL,取2μL按2.3分析條件下進(jìn)行 GC-MS測(cè)定.

2.3 GC-MS分析條件

DB-5 MS毛細(xì)石英柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),載氣為氦氣,進(jìn)樣口溫度為280℃,進(jìn)樣量為 2μL,不分流進(jìn)樣,柱流速為 0.98 m L/min.升溫程序:45℃保持1 m in,4℃/min升至250℃,6℃/min升至280℃,保持5min.離子源為 EI,離子源溫度為200℃.

3 結(jié)果與討論

3.1 薄層色譜對(duì)關(guān)蒼術(shù)藥材的鑒別

精密稱(chēng)取關(guān)蒼術(shù)藥材和茅蒼術(shù)、白術(shù)對(duì)照藥材粉末,按2.1.1方法試驗(yàn),結(jié)果關(guān)蒼術(shù)樣品在Rf值約為0.65處檢出特殊黃色斑點(diǎn),斑點(diǎn)清晰、分離度好,而茅蒼術(shù)和白術(shù)對(duì)照藥材在對(duì)應(yīng)處沒(méi)有明顯斑點(diǎn).經(jīng) GC-MS分析,初步鑒定該黃色斑點(diǎn)的主要成分為3,8-Dimethyl-4-(1-methylethylidene)-2,4,6,7,8,8a-hexahydro-5(1H)-azulenone,見(jiàn)圖 1.

圖1 關(guān)蒼術(shù)藥材特殊斑點(diǎn)主要組分的質(zhì)譜圖

3.2 GP-MSE-GC-MS技術(shù)對(duì)關(guān)蒼術(shù)藥材的鑒別

用 GP-MSE-GC-MS技術(shù)分析關(guān)蒼術(shù)、茅蒼術(shù)和白術(shù)對(duì)照藥材,發(fā)現(xiàn)關(guān)蒼術(shù)中有4個(gè)峰面積明顯高于茅蒼術(shù)和白術(shù)的成分.關(guān)蒼術(shù)、茅蒼術(shù)和白術(shù)中化合物a成分的峰面積積分值分別為:60 206 108、9 090 339和8 756 731;b成分為21 401 170、2 412 127和1 912 143;c成分為23 566 428、1 108 196和1 109 598;d成分為33 081 349、2 631 894和3 185 736.關(guān)蒼術(shù)的a,b,c和d的成分峰面積分別達(dá)到茅蒼術(shù)和白術(shù)的7倍、9倍、20倍和10倍以上.經(jīng)初步鑒定,化合物a為3,8-Dimethyl-4-(1-methylethylidene)-2,4,6,7,8a-hexahydro-5(1H)-azulenon,b為2-(3,7-Dimethylocta-2,6-dienyl-4-methoxy-phenol,見(jiàn)圖 2.其中,化合物a成分與薄層鑒別中的特殊成分相一致.

圖2 關(guān)蒼術(shù)、茅蒼術(shù)和白術(shù)藥材的GP-MSE-GC-MS色譜圖

4 結(jié)論

蒼術(shù)、白術(shù)和關(guān)蒼術(shù)均為蒼術(shù)屬植物的根莖,是極易混淆的品種.由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出,關(guān)蒼術(shù)在TLC板中有1個(gè)穩(wěn)定的黃色斑點(diǎn),在 GP-MSEGC-MS色譜圖譜中有4個(gè)峰面積較大的色譜峰,而在茅蒼術(shù)和白術(shù)中沒(méi)有或很少.通過(guò) TLC-GCMS和 GP-MSE-GC-MS法鑒別,其特殊成分一致,兩種方法均可用于關(guān)蒼術(shù)藥材的鑒別,其中GP-MSE-GC-MS法因提供較多的特殊成分信息,能夠更好地把握關(guān)蒼術(shù)的整體質(zhì)量,而且還具有樣品用量少、操作簡(jiǎn)便、精確度高等優(yōu)勢(shì),可推廣應(yīng)用于植物藥材的鑒別中.研究結(jié)果還表明,利用TLC有利于蒼術(shù)、白術(shù)和關(guān)蒼術(shù)的初步鑒別,而GP-MSE-GC-MS有利于精細(xì)分析.

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Identification of A tractylodes Japonica by TLC-GC-MSand GP-MSE-GC-MS

YANG Shao-qun1, XU Jing-jing2, MA Xue2, ZHANG Shan-yu1＊
(1.KeyLaboratoryofNaturalResourceoftheChangbaiMountain&FunctionalMolecules(YanbianUniversity),MinistryofEducation,Yanji133002,China;2.DepartmentofPharmacy,CollegeofPharmacy,YanbianUniversity,Yanji133002,China)

Identification ofAtractylodesjaponicaby thin layer chromatography(TLC)and Gas purgemicrosyringe extraction combined with gas chromatographic-mass spectrometric(GP-MSE-GC-MS)methods.Atractylodesjaponicahas a special yello wspot at 0.65 of the retardation factor on the thin layer chromatography,and it is further identified as(3,8-Dimethyl-4-(1-methylethylidene)-2,4,6,7,8,8 a-hexahydro-5(1H)-azulenone)(compound a)by GC-MS.Compared GP-MSE-GC-MS chromatogram sofAtractylodesjaponicawith the two adulterantsRhizomaatractylodiandAtractylodesmacrocephala,Atractylodesjaponicahas four special components,compound a and 2-(3,7-Dimethyl-octa-2,6-dienyl)-4-methoxy-phenol(compound b)are identified.The GP-MSE-GC-MSmethod not only p rovide more special ingredient information than TLC,but also has a small amount of sample,simple operation,high accuracy and other advantages.GP-MSE-GC-MS method will be a ne wtechnology fo r identification of traditional Chinese medicine and itsmain components.

Atractylodesjaponica;TLC;micro liquid extraction;GC-MS

R284.1

A

1004-4353(2011)02-0124-04

2011-04-27

＊通信作者:張善玉(1959—),女,研究員,研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.