蔡 媛 喬紅梅 鄭 甦 馮建麗 車瀟良 馬 蓉

原癌基因Her - 2 /neu(C - erbB2)是人類表皮生長因子受體家族的第2個成員，該家族中的受體均位于細胞膜上，在許多組織中都能發(fā)現(xiàn)。研究表明C-erbB-2過表達可導致乳腺上皮細胞的惡性轉(zhuǎn)化，增加腫瘤細胞的侵襲性，并對某些化療藥物耐藥[1]。本研究通過檢測化療前后乳腺癌組織中C-erbB-2的表達，以了解化療是否會影響C-erbB-2的表達；同時對新輔助化療的療效與C-erbB-2的表達的相關性進行評測，以證實C-erbB-2在乳腺癌新輔助化療療效預測中的價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2008年1月～2009年9月間滿足以下條件的53例乳腺癌患者：①化療前通過細針穿刺活檢首次確診為乳腺癌，并行C-erbB-2檢測；②臨床Ⅱ、Ⅲ期患者；③腫瘤病灶大小可以檢測；④無治療史；⑤心、肝、腎功能正常。初期檢查包括：體檢、乳腺鉬靶及B超，部分行乳腺MRI檢查，常規(guī)行肝腎功能、心電圖、血常規(guī)、胸片或胸部CT、肝臟超聲檢查及全身骨掃描，部分患者加作胸部CT。原始腫瘤的大小通過乳腺B超或鉬靶測量，淋巴結轉(zhuǎn)移的情況通過體檢及乳腺鉬靶、超聲或CT 的檢查獲得，每個化療周期結束后均重復進行以上檢查項目來評估化療反應。

所有患者均為女性，年齡38～65歲,中位年齡49歲。組織學類型：浸潤性導管癌46例,小管癌1例，浸潤性小葉癌2例,黏液癌3例，微乳頭狀癌1例。臨床分期均為Ⅱa以上?；熃y(tǒng)一為2個周期，化療根據(jù)不同患者的身體狀況及經(jīng)濟情況給予不同化療方案，有以下幾種：主要選擇以含恩環(huán)類的聯(lián)合化療方案，部分與紫杉類聯(lián)合，僅1例給予CMF(環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶)方案。第1個周期結束后經(jīng)評價化療無效的患者更改化療方案重新進入評價程序或改變總體治療計劃，改用手術、放療等。

1.2 方法

1.2.1 試劑 鼠抗人C-erbB-2單抗及其免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自福建MAXin- Bio公司。

1.2.2 免疫組織化學方法 應用Elivision免疫組化法分別測定化療前、后乳腺癌組織中C-erbB-2的表達。全部病例術前作細針穿刺活檢或腫物切取活檢，獲取的標本經(jīng)10％中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm 厚切片，用于常規(guī)及C-erbB-2的檢測。組織經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精至水化，pH 6.0檸檬酸緩沖液進行高溫高壓抗原修復，滴加相應一抗，室溫下孵育1 h，PBS沖洗，加生物素標記的二抗，37℃30 min，PBS沖洗，DAB染色，蘇木精復染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，用試劑盒已知陽性片或組織內(nèi)殘存的正常乳腺組織作陽性對照。

1.2.3 結果判定 根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)乳腺癌TNM分期第6版對腫瘤進行臨床分期。根據(jù)Miller and payer分級對化療后的反應情況進行分類：完全無反應、病理緩解(包括部分緩解及完全緩解)、病理完全緩解。病理完全緩解(pathologic complete response,PCR)指乳腺及腋窩組織中均無浸潤性癌，殘留的導管原位癌包括在PCR范疇中。

所有的免疫組化染色切片均采用光學顯微鏡進行觀察，并由兩位高年資病理主治醫(yī)師雙盲法讀片。C-erbB-2陽性物質(zhì)定位于細胞膜。按陽性細胞數(shù)的所占比例以及染色程度分為4級：(-)為<10％腫瘤細胞染色或無染色；(+)為≥10％的腫瘤細胞胞膜不連續(xù)、較弱的淡黃色；(++)為≥10％的腫瘤細胞胞膜連續(xù)的染色，呈黃或深黃色；(+++)為≥50％的腫瘤細胞胞膜連續(xù)染色，呈棕黃色。陽性判斷標準：其中將(-)、(+)定為C-erbB-2(-)，(++)、(+++)定為C-erbB-2( + )。

1.3 統(tǒng)計學處理

組間差異性比較采用卡方檢驗或精確概率法。所有數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包進行分析處理。

2 結果

2.1 新輔助化療的療效

53例乳腺癌患者新輔助化療后，病理完全無反應的12例(22.6％)，病理緩解(包括部分緩解及完全緩解)41例(77.4％)，其中病理完全緩解3例(5.7％)。

2.2 新輔助化療前后C-erbB-2表達變化情況

53例乳腺癌患者中，3例化療后病理完全緩解無癌組織進行檢測，余50例患者中C-erbB-2的變化情況：化療前后表達一致的43例，一致性為86％；表達發(fā)生完全相反改變的是7(14.0％)例，其中由化療前3例陰性轉(zhuǎn)為化療后陽性，4例由陽性轉(zhuǎn)為陰性?；熐昂驝-erbB-2的表達差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.051，P=0.822)(表1)。

2.3 C-erbB-2陽、陰性組化療有效率差異比較

C-erbB-2表達陽性的病例化療有效率為86.7％(13/15)、表達陰性的病例化療有效率為73.7％(28/38)，統(tǒng)計學分析無差異性(P= 0.472)(表2)。

表1 新輔助化療前后ER、PR、C-erbB-2表達變化的比較(例)

表2 C-erbB-2表達陽性、陰性組化療有效率差異比較

3 討論

新輔助化療是乳腺癌規(guī)范化治療的一部分，研究[2～6]顯示其療效顯著。本研究中53例乳腺癌患者新輔助化療后病理緩解率達77.4％，病理完全緩解率達5.7％?；煹目傆行逝c文獻研究結果相近，但達到PCR者稍低于國外研究結果(10％～20％)[2～4]。新輔助化療后達到PCR的比率盡管不高，但研究[2～4]顯示達到PCR的患者相對化療后腫瘤依然有殘留的患者其無病生存率及總生存率均明顯增加。

新輔助化療有其不盡人意之處。一些新輔助化療無效的病例，由于手術治療時間的推延，使某些原本可經(jīng)手術切除的腫瘤變?yōu)椴荒芮谐?；化療會導致腫瘤的真正病理分期變得模糊不清，從而影響后期的治療以及療效的評價；臨床反應有效的病例又會造成某些腫瘤預后因素信息的丟失，如淋巴結狀況與腫瘤大小，有可能導致后期治療不當。因此能在新輔助化療前即預知療效，從而選擇敏感病例，并選擇適宜藥物進行化療將能彌補其不足，提供乳腺癌個體化治療的新模式。

目前臨床上入選新輔助化療方案的乳腺癌患者，均需要在化療前行細針穿刺活檢獲取病變組織，然后對病變組織分型確診，同時檢測ER、PR、C-erbB2的表達，檢測結果將作為后期治療、評判預后及研究的指標[7]。細針穿刺活檢獲得的組織，相對于腫瘤而言組織很少，據(jù)其檢測的結果能否代表整個瘤體的特性呢？Taucher等[8]研究1994～2000年間722例乳腺疾病患者的術前穿刺標本與術后大標本的病理特征及ER、PR的檢測情況被對照研究，62.3％(450/722)的病例活檢診斷為惡性，術后證實無1例誤診，可見這樣的研究基礎是可行的。本研究通過測定乳腺癌患者新輔助化療前后C-erbB-2的表達，結果顯示化療前后C-erbB-2表達的一致性為86％；陽陰性發(fā)生改變的是14％，提示新輔助化療對乳腺癌組織中C-erbB-2的表達無明顯影響，以活檢標本C-erbB-2的檢測結果做研究是可行的，活檢標本C-erbB-2的檢測結果能代表整個瘤體的特性。已有一些C-erbB-2與新輔助化療療效相關性的研究，但結論不一。Miyoshi等[9]對78例患者給予4個周期的多西紫杉醇的新輔助化療方案后，對照研究了化療療效與腫瘤生物因子及病理參數(shù)的關系，PCR率的高低與是否絕經(jīng)、淋巴結轉(zhuǎn)移及ER、PR、c-erbB2、ki-67的表達均無關，僅與乳腺癌細胞核的級別有關，核的級別低者較級別高者PCR率更高。Tiezzi等[10]通過對68例患者行多西紫杉醇、表柔沙星聯(lián)合化療，并行多變量分析，只有c-erbB2的高表達與無病生存率、總生存率相關，而ER、PR、P51、P21等的表達及臨床病理特征均不能預示化療的病例緩解率。結論是僅僅c-erbB2的表達對化療后病例緩解是一重要的預示因子。還有研究顯示，c-erbB2在阿霉素和環(huán)磷酰胺化療方案中可提示化療的療效，c-erbB2陽性較陰性病例有較高的病例緩解率，但加入多西紫杉醇后c-erbB2陽性、陰性的化療效果一樣[11]。本研究結果顯示： C-erbB-2的表達與化療療效無相關性，提示C-erbB-2不能作為新輔助化療療效的預測因子。依靠靶向因子的表達進行新輔助化療敏感病例的選擇方面可能還需要更多病例研究證實。

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