劉 翼

在細(xì)胞表面和細(xì)胞外基質(zhì)中，存在著一些對(duì)葡氨聚糖肝素和硫酸肝素具有高度親和力的多肽，總稱為肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子。如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。中期因子(medikine，MK)是1988年發(fā)現(xiàn)的1種新的肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子，因起初在孕中期小鼠胚胎腎臟發(fā)現(xiàn)其大量表達(dá)而得名。MK特異表達(dá)于多種腫瘤組織，并參與腫瘤的生長(zhǎng)、血管生成等過(guò)程，我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)，檢測(cè)卵巢上皮性腫瘤組織中MK的表達(dá)情況，并進(jìn)一步探討與其臨床病理因素的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

2008年～2010年，我院收治的、經(jīng)病理檢查確診的80例卵巢腫瘤患者，病例資料完整，術(shù)前未行放、化療及激素治療，平均年齡50.3歲，≤50歲28例，>50歲32例。良性卵巢腫瘤15例，其中漿液性囊腺瘤12例，黏液性囊腺瘤3例；卵巢交界性腫瘤10例；上皮性卵巢癌55例，其中漿液性囊腺癌40例，黏液性囊腺癌8例，子宮內(nèi)膜樣癌7例。卵巢癌臨床病理分期:Ⅰ期27例，Ⅱ期15例，Ⅲ期11例，Ⅳ期2例(按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟卵巢癌的臨床分期FIGO 2008標(biāo)準(zhǔn))。盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例，無(wú)轉(zhuǎn)移42例。以正常卵巢上皮組織10例作為對(duì)照。

1.2 方法

標(biāo)本經(jīng)福爾馬林液固定后，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度為4 μm，分別行HE染色，MK免疫組織化學(xué)SP法染色。室溫干燥，經(jīng)染色、顯色、封片后鏡檢。所有切片均在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一技術(shù)人員，使用同一批號(hào)試劑完成免疫組織化學(xué)染色。以試劑公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)

腫瘤細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)清晰棕黃色染色的細(xì)胞即為陽(yáng)性細(xì)胞，光鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<20%為陰性，否則為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

組間差異檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，P<0.05為有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 MK在不同卵巢上皮性組織中的表達(dá)情況

正常卵巢上皮組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織、交界性卵巢上皮性腫瘤組織及卵巢癌組織中，MK陽(yáng)性表達(dá)率依次增高，分別為0(0/10)、13.3%(2/15)、50.0%(5/10)和89.1%(49/55)。上皮性卵巢癌組織中MK表達(dá)率與其他3組比較，明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。結(jié)果表明，MK可能與上皮性卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。

表1 各組織中MK表達(dá)情況(例)

注：卵巢癌組織與非卵巢癌各組織比較，P均<0.05

2.2 MK因子表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系

MK因子與卵巢癌病理類型無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，Ⅱ～Ⅳ期患者M(jìn)K陽(yáng)性表達(dá)率，明顯高于Ⅰ期患者(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)K陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)(表2)。

3 討論

中期因子又稱神經(jīng)軸突生長(zhǎng)促進(jìn)因子-2(neurite growth-promoting factor 2)，是1988年發(fā)現(xiàn)的肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子。與另外1種肝素結(jié)合性生長(zhǎng)因子，稱為多效營(yíng)養(yǎng)因子(pleio- trophin，PTN) 一起構(gòu)成了Midkine家族。MK在脊椎動(dòng)物中廣泛表達(dá)。人類MK在妊娠中期胎兒上皮2間葉組織和神經(jīng)組織中高表達(dá),維持細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)細(xì)胞遷移,對(duì)胎兒上皮和神經(jīng)組織等的發(fā)育有重要作用。成人MK mRNA表達(dá)很低,通常檢測(cè)不到。近年有報(bào)道MK在肺癌、乳腺癌、胰腺癌、食管癌、膀胱癌等多種腫瘤組織中有較高水平表達(dá),可能參與腫瘤的發(fā)生、演進(jìn)、生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移過(guò)程[1～4]。1997 年Choudhuri 等[5]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了MK在腫瘤發(fā)生中的作用,在體內(nèi)MK促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),這種生長(zhǎng)與腫瘤血管密度的增加有關(guān)。同時(shí)證實(shí)MK有促進(jìn)腫瘤血管生成的作用。MK在腫瘤組織中的過(guò)度表達(dá)促進(jìn)了腫瘤血管的形成,促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)[6]。因此,研究卵巢癌組織中MK因子與卵巢癌組織學(xué)特征的關(guān)系,可以了解其生物學(xué)行為,并指導(dǎo)治療方向和預(yù)后判斷。

表2 MK因子表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系 (例)

本研究采用免疫組織化學(xué)染色，對(duì)比檢測(cè)了MK蛋白在80例卵巢上皮性腫瘤和10例正常卵巢上皮組織中的表達(dá)情況。結(jié)果表明，在正常卵巢上皮組織及良性卵巢上皮性腫瘤中，MK無(wú)表達(dá)或僅微弱表達(dá)；交界性卵巢上皮性腫瘤MK陽(yáng)性表達(dá)率為50%，而在卵巢上皮性癌組織中MK蛋白表達(dá)率高達(dá)89.1%，由于MK在上述幾種組織中的表達(dá)有顯著性差異，這也提示MK有作為卵巢上皮性癌標(biāo)志物的可能性。MK陽(yáng)性率與腫瘤病理類型無(wú)相關(guān)性，漿液性囊腺癌90%，黏液性囊腺癌87.5%，子宮內(nèi)膜樣癌85.7%，差異無(wú)顯著性。 研究還顯示，臨床分期Ⅱ～Ⅳ期陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于臨床Ⅰ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)K陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。MK因子在調(diào)控腫瘤血管生成過(guò)程中起重要作用,與血管生成密切相關(guān)[7]，因此臨床分期越晚的患者其MK陽(yáng)性表達(dá)率越高。

近年來(lái)，MK家族血清學(xué)檢測(cè)已逐漸成為研究熱點(diǎn)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)表明，正常人體內(nèi)MK血清含量通常為(0.5～0.6) ng/mL，在某些惡性腫瘤患者血清中MK水平超過(guò)臨界值[8]。Shimada 等[9]比較了135 例表淺食管癌患者血清中CEA、鱗癌抗原、角蛋白(CY2FR2121) 、MK水平,并應(yīng)用COX’s 危險(xiǎn)模型進(jìn)行生存分析,結(jié)果表明血清MK的敏感性高于血清中其他標(biāo)志物,且術(shù)前血清MK高水平的患者預(yù)后差。由此可見,MK家族的血清學(xué)檢測(cè)可為臨床惡性腫瘤的診斷和預(yù)后估計(jì)提供有力幫助。但卵巢癌中MK的血清學(xué)水平是否具有相同的規(guī)律,成為有待進(jìn)一步研究證實(shí)的問(wèn)題。MK除在惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)外,在交界性腫瘤中也有表達(dá),其在腫瘤演進(jìn)中的變化顯示其癌變?cè)缙谟锌赡馨l(fā)揮生物學(xué)功能,故有可能用于腫瘤早期的診斷。

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