趙時(shí)梅 卓建紅 張安文 韋 毓 羅 宇 史 琳 任傳偉

近年來發(fā)現(xiàn)高分子量糖蛋白MUC1是1種人類腫瘤相關(guān)黏蛋白，定位于1q21[1]，已發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平的上調(diào)同一些腫瘤如乳腺癌[2]、卵巢癌[3]的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并有研究表明MUC1可使E-cadherin蛋白表達(dá)下調(diào)，從而使腫瘤細(xì)胞侵襲性增強(qiáng)[4]。目前，MUC1蛋白異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌的關(guān)系及MUC1與E-cadherin在內(nèi)膜癌中表達(dá)的相互關(guān)系的研究報(bào)道尚不多，我們采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)MUC1、E-cadherin在不同病變子宮內(nèi)膜中的表達(dá)，初步探討其在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為內(nèi)膜癌的臨床診斷和治療提供相應(yīng)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源及處理

選取柳州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院病理科2005年至2010年臨床資料完整并經(jīng)10%福爾馬林固定、石蠟包埋的子宮內(nèi)膜病變標(biāo)本141例，其中子宮內(nèi)膜單純性增生36例、不典型增生50例、癌55例，另取30例增生期子宮內(nèi)膜作對(duì)照。所有病例均由2位病理醫(yī)師重新讀片確認(rèn)，并選取有代表性蠟塊。55例內(nèi)膜癌患者均為初治病例，年齡29～67歲，中位年齡51歲；手術(shù)病理分期采用國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年的標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期53例，Ⅱ期1例，Ⅲ期1例；病理類型全部為子宮內(nèi)膜樣腺癌；病理分級(jí)G1級(jí)43例，G2級(jí)9例，G3級(jí)3例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：陽(yáng)性2例，陰性53例；肌層浸潤(rùn)：≤1/2者51 例，>1/2者4例。

1.2 主要試劑及方法

采用EnVision二步法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，高壓修復(fù)抗原，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)對(duì)比染色?？贵wMUC1 (Ma695,1∶200 )為英國(guó)Novocastra公司產(chǎn)品；E-Cadherin (NCH-38,1∶100)、二抗及DAB試劑盒為美國(guó)Dako公司產(chǎn)品。以PBS代替一抗作空白對(duì)照，已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。具體步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

MUC1陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)為細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒。經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，30例增生期內(nèi)膜中22例腺上皮及內(nèi)膜表面上皮細(xì)胞MUC1呈極性表達(dá)，陽(yáng)性信號(hào)位于上皮細(xì)胞表面及腺體腔源面表達(dá)，故把極性表達(dá)者記為正常表達(dá)，失去極性或陰性表達(dá)者記為異質(zhì)表達(dá)。按照Hugh等[5]介紹的方法：E-cadherin以細(xì)胞膜連續(xù)出現(xiàn)線性棕黃色染色為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%，胞質(zhì)染色為主，記為0分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%～90%，胞膜、胞質(zhì)混合染色，記為1分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%～90%，連續(xù)胞膜染色，記為2分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>90%，連續(xù)胞膜染色，記為3分；0～2分為異質(zhì)表達(dá)，3分為正常表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和四格表相關(guān)分析檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 MUC1和E-cadherin在子宮內(nèi)膜良惡性病變組織中的表達(dá)

MUC1蛋白表達(dá)在增生性子宮內(nèi)膜和單純性增生內(nèi)膜組織中主要定位于上皮細(xì)胞膜頂點(diǎn)和腺體腔源面，在不典型增生內(nèi)膜和內(nèi)膜樣腺癌中則主要定位于細(xì)胞整個(gè)細(xì)胞膜表面或細(xì)胞質(zhì)，失去極性。E-cadherin蛋白表達(dá)在增生性子宮內(nèi)膜和單純性增生內(nèi)膜中主要呈現(xiàn)連續(xù)均勻一致的細(xì)胞膜線性著色，在不典型增生子宮內(nèi)膜和內(nèi)膜樣腺癌中則出現(xiàn)細(xì)胞膜染色深淺不一或胞質(zhì)著色。從增生期子宮內(nèi)膜～單純性增生宮內(nèi)膜～不典型增生宮內(nèi)膜～子宮內(nèi)膜樣腺癌，子宮MUC1和E-cadherin的正常表達(dá)率逐漸降低，異質(zhì)表達(dá)率逐漸升高(P=0.000)。 MUC1蛋白異質(zhì)表達(dá)率，不典型子宮內(nèi)膜組顯著高于正常子宮內(nèi)膜組、單純性增生子宮內(nèi)膜組；子宮內(nèi)膜樣腺癌組明顯高于正常及單純性增生子宮內(nèi)膜組，與不典型組相比無顯著差異。E-cadherin蛋白異質(zhì)表達(dá)率，不典型內(nèi)膜組顯著高于正常子宮內(nèi)膜組；子宮內(nèi)膜樣腺癌組明顯高于正常、單純性增生組及不典型組(表1)。

2.2 MUC1和E-cadherin的表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

MUC1蛋白表達(dá)與年齡有一定關(guān)系(P=0.044)、與組織學(xué)分級(jí)無關(guān)(P=0.678)。E-cadherin 蛋白表達(dá)與年齡變化及組織學(xué)分級(jí)無關(guān)(P=0.610，P=0.125)。兩者隨著浸潤(rùn)深度的增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)、臨床分期的提高有降低趨勢(shì)，但因?yàn)楸緲颖痉植疾痪?，未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，詳細(xì)分布情況見表2。

表1 MUC1、E-cadherin在各型子宮內(nèi)膜病變中的表達(dá)(例)

注：4組樣本比較，MUC1表達(dá)，χ2=29.387，P=0.000;E-cadherin表達(dá)，χ2=22.943，P=0.000；其中a表示增生期內(nèi)膜與不典型增生內(nèi)膜比較，b表示單純性增生內(nèi)膜與不典型增生子宮內(nèi)膜比較，c表示不典型增生內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜樣腺癌比較，d表示子宮內(nèi)膜樣腺癌與單純性增生子宮內(nèi)膜比較。

表2 MUC1、 E-cadherin表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

注：★表示G1與G2、G3級(jí)比較

2.3 子宮內(nèi)膜樣腺癌中MUC1和E-cadherin表達(dá)的相關(guān)性

經(jīng)四格表資料相關(guān)分析顯示MUC1和E-cadherin蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.2897，P=0.0317)(表3)。

表3 MUC1和E-cadherin在子宮內(nèi)膜樣腺癌中表達(dá)的關(guān)系(例)

3 討論

黏液素1( mucin 1，MUC1)是一類具有復(fù)雜糖基結(jié)構(gòu)的大分子糖蛋白，屬于I型跨膜蛋白，由核心肽和糖鏈組成。核心肽由胞內(nèi)段、跨膜段和胞外段組成，胞內(nèi)段和跨膜段在不同種屬間的結(jié)構(gòu)是高度保守的，提示其重要的生物學(xué)功能；胞外段含有以20個(gè)氨基酸為單位的串聯(lián)重復(fù)序列，決定著MUC1的空間結(jié)構(gòu)特異性和免疫原性。MUC1在人體主要存在于上皮組織，除了在細(xì)胞表面產(chǎn)生潤(rùn)滑作用、保護(hù)上皮細(xì)胞免受外界侵襲外，還具有調(diào)節(jié)細(xì)胞間相互作用、介導(dǎo)細(xì)胞間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)等功能[6～8]。在正常情況下，MUC1在多種組織、器官上皮細(xì)胞近管腔或腺腔面，呈頂端表達(dá)，極性分布，而在多種腫瘤中，MUC1異常表達(dá)，主要表現(xiàn)為：①表達(dá)量增高，可達(dá)到正常時(shí)的100倍以上；②喪失極性分布，在整個(gè)細(xì)胞表面表達(dá)；③結(jié)構(gòu)改變，主要由于糖基化不全，出現(xiàn)新的糖鏈及肽表位[9，10]。MUC1的以上改變與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，包括：①可誘導(dǎo)活化T細(xì)胞的凋亡，削弱宿主對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫抑制[11]；②在腫瘤中，胞質(zhì)尾恒定序列發(fā)生磷酸化改變，可通過影響信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展[12]；③充當(dāng)1種抗黏附分子，促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移[13]；④與腫瘤易感性有關(guān)[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)：MUC1在增生期子宮內(nèi)膜中主要表達(dá)在腺上皮的腔源面或表面，而在不典型增生內(nèi)膜和內(nèi)膜癌中MUC1陽(yáng)性信號(hào)則主要出現(xiàn)在整個(gè)瘤細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜上，失去極性特點(diǎn)。從增生期子宮內(nèi)膜～單純性增生宮內(nèi)膜～不典型增生宮內(nèi)膜～子宮內(nèi)膜樣腺癌，MUC1的正常表達(dá)率逐漸降低，異常表達(dá)率逐漸升高(P=0.000)。 MUC1蛋白異常表達(dá)率，不典型內(nèi)膜組顯著高于正常子宮內(nèi)膜組、單純性增生組；子宮內(nèi)膜樣腺癌組明顯高于正常及單純性增生組，與不典型組相比無顯著差異。表明子宮內(nèi)膜癌病變?cè)缙诳赡芫痛嬖贛UC1蛋白的異常，提示MUC1在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起了一定的作用，MUC1蛋白的變化可能是內(nèi)膜癌變進(jìn)程中的早期事件。

有文獻(xiàn)報(bào)道，MUC1上的Sislyl-Lewisx表位可作為選擇素的配體，與損傷或有炎癥的血管內(nèi)皮細(xì)胞上選擇素作用，使瘤細(xì)胞易與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附，穿過血管壁，從而有利于腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[15]。學(xué)者Langner發(fā)現(xiàn)MUC1的異常高表達(dá)與腎細(xì)胞癌的分級(jí)、分期相關(guān)[16]。在卵巢癌中，MUC1的表達(dá)隨組織惡性程度的升高而升高，并與臨床分期及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3]；Sivridis 等[17]用免疫組化方法研究發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜癌中MUC1胞質(zhì)表達(dá)者預(yù)后差，但也有學(xué)者[18]認(rèn)為MUC1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌的分級(jí)、分期及患者預(yù)后無關(guān)。與之相似，本組病例顯示在子宮內(nèi)膜樣腺癌中，MUC1蛋白正常表達(dá)率除了隨著年齡的增長(zhǎng)而降低外、與組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系不顯著。提示MUC1蛋白的變化可能未參與內(nèi)膜癌的演進(jìn)。

E-cadherin 是1種鈣依賴型細(xì)胞黏附分子，其主要介導(dǎo)同種親和性細(xì)胞-細(xì)胞間黏附，并維持上皮細(xì)胞的形態(tài)，其表達(dá)下降時(shí)細(xì)胞黏附作用減弱，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移[18]。這在許多惡性腫瘤的研究中得到證實(shí)[19～22]。本研究顯示E-cadherin 異常表達(dá)率在內(nèi)膜不典型增生和子宮內(nèi)膜樣腺癌中均明顯高于增生期子宮內(nèi)膜(P=0.000)。這與文獻(xiàn)報(bào)道[23，24]相似。表明E-cadherin參與了子宮內(nèi)膜樣腺癌的進(jìn)展過程。關(guān)于E-cadherin與子宮內(nèi)膜樣腺癌各個(gè)臨床病理參數(shù)的關(guān)系文獻(xiàn)報(bào)道不一 ：馬楠等[25]、王玲等[23]認(rèn)為，E-cadherin表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌的分級(jí)、分期、浸潤(rùn)程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；但黃筱竑等[26]的研究卻顯示E-cadherin表達(dá)與內(nèi)膜癌的浸潤(rùn)和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。本研究結(jié)果顯示在子宮內(nèi)膜樣腺癌中E-cadherin蛋白的正常表達(dá)隨著腫瘤級(jí)別的提高呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.125)。出現(xiàn)此差異可能是由于采用的判斷標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一所致。

MUC1黏蛋白在腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中充當(dāng)了1種抗腫瘤細(xì)胞黏附分子的作用[13]。癌細(xì)胞表面高密度表達(dá)的MUC1絲狀分子，可阻礙膜表面固定配體與其受體的相互作用，降低胞外基質(zhì)內(nèi)整合素介導(dǎo)的細(xì)胞間相互作用，使腫瘤細(xì)胞易于侵襲和轉(zhuǎn)移[27]。Yuan等[28]在對(duì)胰腺癌和乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，MUC1可促進(jìn)E-cadherin/beta-catenin 復(fù)合體形成并重建E-cadherin 膜定位，從而影響到癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本研究中，MUC1和E-cadherin在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，即MUC1蛋白正常表達(dá)率在E-cadherin蛋白表達(dá)陽(yáng)性的組織中明顯高于其在E-cadherin蛋白異質(zhì)表達(dá)的組織，提示MUC1和E-cadherin在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有協(xié)同作用。

綜上所述，我們的研究結(jié)果顯示MUC1和E-cadherin 蛋白的異常表達(dá)促進(jìn)了子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生，二者可能具有協(xié)同作用。在子宮內(nèi)膜癌組織中，MUC1和E-cadherin的表達(dá)狀況可能反映了腫瘤的某些生物學(xué)特性，有可能作為評(píng)價(jià)腫瘤患者病情發(fā)展的1個(gè)參考因素。

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