齊淑軼 鄧蒞霏 蔡 勇 高 文 付愛榮

Maspin基因是絲氨酸蛋白酶抑制劑(serpin)超家族的成員之一，在大多數(shù)人類正常組織中呈高水平表達(dá)，而在惡性腫瘤進(jìn)展過程中多表現(xiàn)為表達(dá)下調(diào)或不表達(dá)，提示maspin可以作為腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的1個(gè)重要指標(biāo)。而p53則是腫瘤發(fā)生過程中重要的監(jiān)控基因，通過各種調(diào)控因子及信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)揮作用。maspin在肺癌中的表達(dá)及意義目前國內(nèi)尚鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。我們采用免疫組化方法檢測(cè)99非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)組織中maspin、p53基因的表達(dá)情況，并結(jié)合各項(xiàng)臨床病理資料，探討分析兩者之間的相關(guān)性及其臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2007年8月～2008年4月間在我院行手術(shù)切除的NSCLC標(biāo)本蠟塊99例。所有病例均為初治患者，術(shù)前未進(jìn)行放化療，臨床病理資料完整，由隨訪組進(jìn)行病例隨訪。99例中男性78例，女性21例。年齡39～77歲，中位年齡61歲。腫瘤的TNM分級(jí)、臨床分期等均根據(jù)2002年版UICC標(biāo)準(zhǔn)而定：臨床Ⅰ期38例，Ⅱ期37例、Ⅲ期24例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例，無轉(zhuǎn)移42例。病理類型：鱗癌54例，腺癌45例。腫瘤分化程度：高分化6例，中分化57例，低分化36例。

1.2 免疫組化染色

Maspin蛋白檢測(cè)采用Maxvision 免疫組化法，p53蛋白檢測(cè)采用S-P法。濃縮型小鼠抗人Maspin單克隆抗體(EWA 24)、鼠抗人p53單克隆抗體及Maxvision試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。方法按試劑盒說明要求進(jìn)行，石蠟切片用高溫高壓法修復(fù)抗原，染色過程中均用試劑公司提供的陽性切片作陽性對(duì)照，用PBS 替代一抗作陰性對(duì)照，DAB 顯色,蘇木精復(fù)染。

1.3 結(jié)果判定

1.3.1 Maspin 染色結(jié)果判定 Maspin蛋白以腫瘤細(xì)胞質(zhì)和(或) 核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)< 25%判為陰性(-)，≥25% 判為陽性(+)。

1.3.2 p53染色結(jié)果判定 p53蛋白以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)< 5%判為陰性(-)，5%～30%判為陽性 (+)，>30% 判為強(qiáng)陽性(++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，maspin和p53的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Maspin、p53蛋白在肺癌中的表達(dá)

maspin蛋白在肺癌組織中的陽性表達(dá)率僅為57.6%(57/99)，而p53蛋白在肺癌組織中的陽性表達(dá)率為63.6%(63/99)。肺癌組織中maspin表達(dá)與病理類型及組織學(xué)分化程度、淋巴結(jié)狀態(tài)及臨床分期有關(guān)，p53蛋白的表達(dá)則與臨床分期、淋巴結(jié)狀態(tài)相關(guān)(P<0.05)，見表1。

表1 NSCLC中maspin、p53表達(dá)與各臨床病理因素的關(guān)系(例)

2.2 Maspin 與p53蛋白的相關(guān)性

maspin 和p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析顯示，Spearman 相關(guān)系數(shù)為-0.180，顯示呈負(fù)相關(guān)性，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.075)，見表2。

表2 NSCLC中maspin表達(dá)與p53表達(dá)的相關(guān)性(例)

3 討論

Maspin(mammary serine protease inhibitor)基因是Zou等[1]于1994年利用消減雜交法對(duì)正常乳腺組織和乳腺癌組織進(jìn)行比較時(shí)發(fā)現(xiàn)的1種腫瘤抑制基因，其基因編碼產(chǎn)物屬絲氨酸蛋白酶抑制劑(serpin)超家族，可通過多種途徑發(fā)揮抑制腫瘤的作用。其主要作用機(jī)制包括誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、降低腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、侵襲能力、增加細(xì)胞間黏附性以及抑制新生血管的形成等[2～4]。

多數(shù)研究表明，maspin在口腔癌[5]、前列腺癌[6]、乳腺癌[7]等多種惡性腫瘤中表達(dá)降低或不表達(dá)，并提示預(yù)后不良。但亦有學(xué)者報(bào)道胰腺癌組織中maspin高表達(dá)而正常胰腺組織則低表達(dá)[8]。而Sood等[9]也發(fā)現(xiàn)maspin在卵巢惡性腫瘤中呈過度表達(dá)，在正常組織中則表達(dá)微弱，且maspin的過度表達(dá)與腫瘤晚分期、低分級(jí)，腹水出現(xiàn)及生存時(shí)間縮短相關(guān)。提示maspin在不同腫瘤中的表達(dá)情況可能存在差異。

Takanami 等[10]用免疫組化法檢測(cè)了181例NSCLC中maspin的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)maspin在鱗癌中的陽性表達(dá)率顯著高于腺癌，而與腫瘤大小、淋巴結(jié)狀態(tài)等臨床病理參數(shù)無關(guān)。Maspin與肺癌的關(guān)系，國內(nèi)僅孫萍等[11]報(bào)道，maspin蛋白表達(dá)與NSCLC臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與病理類型、組織分化程度無關(guān)。而本研究中，我們則觀察到淋巴結(jié)陽性者、腫瘤分化差者及臨床分期晚者，其maspin表達(dá)陽性率均顯著降低，而且我們也同樣發(fā)現(xiàn)maspin在鱗癌中的陽性率顯著高于腺癌。表明肺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移潛能與maspin的低表達(dá)有著密切的關(guān)系。

p53基因則是腫瘤中最常見的突變基因之一，約50%的腫瘤存在p53基因的突變，野生型p53基因可抑制腫瘤發(fā)生，而突變的p53基因則成為原癌基因。在肺癌中，突變型p53的陽性表達(dá)率為46%～68%[12]，多認(rèn)為與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化、腫瘤大小及預(yù)后等臨床病理因素有關(guān)[13]。本研究中，突變型p53蛋白的陽性率為63.6%，且與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。

至于p53與maspin的相關(guān)性，目前認(rèn)為，maspin是野生型p53作用的1個(gè)靶點(diǎn)，maspin基因啟動(dòng)子區(qū)域有p53結(jié)合位點(diǎn)，其表達(dá)受p53的調(diào)控[14]。胃癌、甲狀腺癌、乳腺癌、前列腺癌等的研究均提示maspin與p53的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。我們的研究顯示，maspin蛋白的表達(dá)與突變型p53的表達(dá)有呈負(fù)相關(guān)的趨勢(shì)(γ=-0.180)，但尚未達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的水平(P=0.075)，可能是由于樣本量過小的緣故。

綜上，我們認(rèn)為maspin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)顯著下調(diào)，與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且可能與突變型p53的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

[1]Zou Z,Anisowicz A，Hendrix MJ,et al .Maspin,a serpin with tumor-suppressing activity in human mammary epithelial cells〔J〕 .Science,1994,263(5146):526.

[2]Cella N，Contreras A,Latha K，et al.Maspin is physically associated with [beta] integrin cell adhesion in mammary epithelial cells〔J〕.FASEB J，2006,20(9):1510.

[3]Zhang W，Shi H Y，Zhang M.Maspin overexpression modulates tumor cell apoposis through the regulation of Bcl-2 family proteins〔J〕.BMC Cancer,2005，5(1):50.

[4]Li Z,Shi H Y，Zhang M.Targeted expression of maspin in tumor vasculatures induces endothelial cell apoposis〔J〕.Oncogene,2005,24(12):2008.

[5]Yoshizawa K，Nozaki S，Okamune A,et al.Loss of maspinis a negative prognostic factor for invasion and metastasis in oral squamous cell carcinoma〔J〕.Acta Otolaryngol，2009，129(5):476.

[6]Machtens S，Serth J，Bokemeyer C,et al.Expression of the p53 and Maspin protein in primary prostate cancer: correlation with clinical features〔J〕.Int J Cancer，2001,95(5):337.

[7]丁耘峰，馮一中，平金良，等.Maspin在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床病理意義〔J〕.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007,27(3):396.

[8]Lim Y J，Lee J K，Jang W Y，et al.Prognostic significance of maspin in pancreatic ductal adenocarcinoma〔J〕.Korean J Intern Med,2004,19(1):15.

[9]Sood A K，F(xiàn)letcher M S，Gruman L M，et al.The Paradoxical expression of Maspin in ovarian carcinoma〔J〕.Clin Caner Res，2002,8(9):2924.

[10]Takanami I，Abiko T，Koizumi S.Expression of maspin in non-small-cell lung cancer: correlation with clinical features〔J〕.Clin Lung Cancer，2008，9(6):361.

[11]孫 萍，張良明，潘祥林，等.Maspin CD44V6在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義〔J〕.中國腫瘤臨床,2006,33(12):712.

[12]Dworakowska D，Gózdz S，Jassem E，et al.Prognostic relevance of proliferating cell nuclear antigen and p53 expression in non-small cell lung cancer〔J〕.Lung Cancer，2002,35(1):35.

[13]Tammemagi MC，McLaughlin JR，Mullen JB，et al.A stud-y of smoking，p53 tumor suppressor gene alterations and non-small cell lung cancer〔J〕.Ann Epidemiol，2000，10(3):176.

[14]Zou Z，Gao C，Nagaich AK,et al.p53 regulates the expression of the tumor suppressor gene maspin〔J〕.J Biol Chem，2000，275(9):6051.