紀(jì)曉紅 邢 伶 常麗霞

（山東省生物化學(xué)工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250014）

高效液相色譜法測(cè)定二羥甲基丙酸反應(yīng)液

紀(jì)曉紅 邢 伶 常麗霞

（山東省生物化學(xué)工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250014）

建立了用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定二羥甲基丙酸（DMPA）反應(yīng)液的方法。采用ODS-SP反相色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-磷酸鹽（磷酸二氫鉀30 mmol／L，pH 3.0）（5∶95）緩沖溶液，流速為0.8 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。在此條件下，二羥甲基丙酸與反應(yīng)液中其它雜質(zhì)分離較好。二羥基甲基酸濃度在10～30 mg／mL范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，r2=0.999 9。對(duì)供試品測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.36%，樣品回收率為97.59%，檢出限為2.0 mg／L。該方法適用于二羥甲基丙酸的定性定量分析。

高效液相色譜法（HPLC） 二羥甲基丙酸 中控分析

二羥甲基丙酸因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)是目前一種比較理想的親水單體，以它為原料制備的水性聚氨酯比國(guó)內(nèi)用酒石酸法合成的產(chǎn)品在儲(chǔ)存穩(wěn)定性方面有較大提高。山東省生物化學(xué)工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研發(fā)了采用甲醛、丙醛和雙氧水為原料經(jīng)縮合、氧化反應(yīng)制備二羥甲基丙酸的新工藝，通過(guò)改進(jìn)反應(yīng)條件提高了反應(yīng)收率，降低了生產(chǎn)成本。在反應(yīng)過(guò)程中，為保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，控制好收率，工藝人員需要知道二羥甲基丙醛縮合氧化后反應(yīng)液中二羥甲基丙酸的含量，即需要中控分析。反應(yīng)液成分復(fù)雜，文獻(xiàn)資料未見(jiàn)此方面報(bào)道，為此筆者建立了快速、簡(jiǎn)便、高靈敏度的高效液相色譜法，對(duì)反應(yīng)液中的二羥甲基丙酸進(jìn)行了測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜儀：LC-10ATvp型，配SPA-10ATvp可變紫外檢測(cè)器、N2000雙通道色譜工作站，日本島津公司；

甲醇：色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司；

乙腈：色譜純，美國(guó)J.T.Baker公司；

磷酸二氫鉀：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑公司；

二羥甲基丙酸標(biāo)準(zhǔn)品：分析純，含量不小于99%。

1.2 色譜條件

色譜柱：ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-磷酸鹽（磷酸二氫鉀30 mmol／L，pH 3.0）緩沖液（5∶95）；流速：0.8 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm ；進(jìn)樣量：5 μL。

1.3 二羥甲基丙酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0 g（精確至0.000 2 g）二羥甲基丙酸標(biāo)準(zhǔn)品置于50 mL容量瓶中并用流動(dòng)相溶解、稀釋至刻度，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，混勻，備用。

1.4 外標(biāo)樣配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取約0.2 g（精確至0.000 2 g）二羥甲基丙酸標(biāo)準(zhǔn)品，用流動(dòng)相稀釋至10 mL，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，備用。

1.5 樣品配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取約1.0 g（精確至0.000 2 g）待測(cè)反應(yīng)液，用流動(dòng)相稀釋至10 mL，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，備用。

1.6 二羥甲基丙酸含量測(cè)定

按1.2色譜條件，待儀器工作狀態(tài)穩(wěn)定后，取樣品溶液和外標(biāo)樣溶液各5 μL進(jìn)樣，按外標(biāo)法計(jì)算，即得反應(yīng)液中二羥甲基丙酸的含量。色譜圖見(jiàn)圖1。

2 結(jié)果與討論

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的確定

有機(jī)酸因羧基中氧原子軌道較碳原子低，其構(gòu)成的共軛π體系的成鍵與反鍵分子軌道的能量差別相對(duì)加大，因而含有兩個(gè)氧原子的羧基的紫外吸收藍(lán)移，在200～210 nm之間有較強(qiáng)吸收［1］；而二羥甲基丙酸的α碳上連有兩個(gè)羥甲基，該助色團(tuán)中氧原子的孤對(duì)電子與分子中碳氧雙鍵上的氧原子相互作用，使吸收波長(zhǎng)紅移，最后實(shí)驗(yàn)確定的最佳吸收波長(zhǎng)為210 nm。

2.2 流動(dòng)相中有機(jī)組分及其含量的確定

以水為主要組分的流動(dòng)相中加入有機(jī)溶劑，有利于化學(xué)鍵合固定相的水解穩(wěn)定性。文獻(xiàn)［2］報(bào)道在流動(dòng)相中加入少量的甲醇或乙腈，能減少酸的離解常數(shù)，改善峰形，縮短酸性組分的保留值。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，雖然加入乙腈，保留時(shí)間縮短了，但分離度很差；加入少量甲醇，保留時(shí)間在6～7 min，分離效果明顯改善。甲醇含量過(guò)高時(shí)，不利于分離度加大，實(shí)驗(yàn)確定最佳甲醇加入量為5%。

2.3 緩沖溶液的確定

以水為流動(dòng)相組分時(shí)，由于有機(jī)酸的電離常導(dǎo)致色譜峰出現(xiàn)拖尾和前伸舌的現(xiàn)象，加入合適pH值的緩沖液是普遍采用的改善這一現(xiàn)象的方法。KH2PO4在紫外區(qū)幾乎無(wú)吸收［1］，可作為本實(shí)驗(yàn)的理想緩沖液。調(diào)節(jié)緩沖液pH值分別在3.0、3.5、4.0時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)pH 3.0時(shí)，各峰分離效果最好，pH值過(guò)高不利于二羥甲基丙酸與其它產(chǎn)物及雜質(zhì)的分離，故確定緩沖液最佳pH值為3.0。

2.4 線性方程

分別吸取 1.3 中標(biāo)準(zhǔn)貯備液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL置于10 mL容量瓶中，并用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻。各進(jìn)樣5 μL，記錄峰面積。以峰面積A對(duì)二羥甲基丙酸濃度c（mg／mL）進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程為A=128 138c+3 237，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 9。

2.5 精密度與檢出限

精密量取供試品溶液，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，試驗(yàn)結(jié)果列于表1。由表1可見(jiàn)，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.36%。在信噪比為3∶1時(shí)，二羥甲基丙酸的檢出限為2.0 mg／L。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 回收試驗(yàn)

采用加標(biāo)回收方法測(cè)定二羥甲基丙酸的回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

建立了用高效液相色譜儀測(cè)定二羥甲基丙酸反應(yīng)液中二羥甲基丙酸含量的方法。該法簡(jiǎn)單、靈敏、快速，定性、定量準(zhǔn)確，并且具有良好的精密度和準(zhǔn)確度，能夠滿(mǎn)足生產(chǎn)的中控分析要求。此色譜條件還可應(yīng)用于產(chǎn)品分析。

［1］森德?tīng)?·L ·R，柯克蘭 ·J·J，格萊吉克 ·J·L.實(shí)用高效液相色譜法的建立［M］.張玉奎，王杰，張維兵譯.北京：華文出版社，2001.

［2］趙景禪，郭治安，常建華，等.有機(jī)酸類(lèi)化合物的反相高效液相色譜法的分離條件研究［J］.色譜，2000，19(3)： 260-263.

ANALYSIS OF 2,2-DIMETHYLOL PROPIONIC ACID IN REACTION LIQUID BY HPLC

Ji Xiaohong， Xing Ling， Chang Lixia
（Shandong Provincial Key Laboratory of Biochemical Engineering， Jinan 250014， China）

A method for detecting 2，2-dimethylol propionic acid（DMPA）in reaction liquid by HPLC and using ODSSP column（250 mm×4.6 mm， 5 μm） was established. The mobile phase was methanol-phosphate buffered solution（KH2PO330 mmol／L，pH 3.0）， and the volume ratio was 5∶95 at a flow rate of 0.8 mL／min， with 210 nm as the detection wavelength. On these conditions， the DMPA and impurities could be separated and the result was well. The method had good linearity at the range of 10-30 mg／mL,r2=0.999 9. The RSD of determination results was 0.36%, the recovery was 97.59%, and the detection limit was 2.0 mg/L. The method is suitable for qualitative and quantitative analysis 2，2-dimethylol propionic acid.

HPLC， 2，2-dimethylol propionic acid， process control analysis

2011-09-17