史傳奇，王 臣

(哈爾濱師范大學)

瑞香狼毒粗提取物殺蟲活性研究

史傳奇，王 臣*

(哈爾濱師范大學)

為了探討瑞香狼毒(Stellera chamaejasme)在植物源農藥方面的應用，研究采用2.50 kg的瑞香狼毒根粉，95%乙醇總提取液濃縮至500 mL，定為原液，按不同濃度稀釋后，室內葉碟法殺滅菜粉蝶(Pieris rapae)4齡菜青蟲試驗結果顯示:濃度為160 mol/L時，4齡幼蟲表現(xiàn)為高度的拒食現(xiàn)象.濃度為80 mol/L和40 mol/L，殺蟲效果相似.72 h時，濃度為80 mol/L時最高殺蟲效果達到85.36%，而濃度為2.5 mol/L時殺蟲效果不高，僅為27.09%.3個處理時間下，LC50分別為39.36 mol/L、17.02 mol/L和8.81 mol/L.因此瑞香狼毒在植物源農藥利用方面具有較好的應用前景.

瑞香狼毒;粗提取;菜青蟲;殺蟲

0 引言

瑞香狼毒(Stellera chamaejasme)又名斷腸草、饅頭花、山蘿卜、火柴頭等，是瑞香科(Thymelaeaceae)狼毒屬多年生草本植物［1］，全株有毒，為草原伴生種，分布于全國東北、西北、西南等大部分地區(qū).瑞香狼毒有較強的殺螨活性［2－4］;提 取 物 對 幾 類 蚜 蟲 有 很 好 防 除 作用［5－6］，采用葉碟法、夾毒法和點滴法，發(fā)現(xiàn)瑞香狼毒根的乙醇提取液對菜粉蝶5齡幼蟲有很強生物活性，并提取出幾種作用效果顯著的殺蟲活性成分，如傘形花內酯(7－h(huán)ydrocoumarin)、瑞香亭(daphnoritin)和狼毒色原酮(chamaechromone)等［7－9］;對菜青蟲胃毒活性試驗中，采用葉片夾毒法，72 h的 LC50為 3.82×103mg/L，濃度為5.00×104mg/L 時，校正死亡率為 91.2%;72 h校正死亡率為 96.8%［10］.

隨著人們越來越重視環(huán)境保護及自身健康，植物源農藥的開發(fā)與應用也越來越受到農業(yè)生產的關注.人們根據(jù)天然有毒植物具有抵抗農業(yè)害蟲的特點，開發(fā)了多種生物制劑的新型農藥，并以投入生產應用.瑞香狼毒同其他天然有毒植物一樣，具有來源廣泛、高效廣譜、無殘留等優(yōu)點，但瑞香狼毒作為植物源農藥在農業(yè)生產中尚未得到廣泛應用，主要原因是其殺蟲活性成分的生產流程較為復雜，生產成本相對較高，本試驗對瑞香狼毒根的總成分做提取，生產流程簡易，在實驗室內對菜青蟲毒殺作用做定量分析.

1 材料與方法

1.1 試驗時間、地點

該試驗于2010年9月在哈爾濱師范大學生命科學與技術學院植物化學成分分析室內進行.室溫(25±5)℃.

1.2 試驗材料

1.2.1 供試藥材

2010年6～8月于黑龍江省肇東市五里木草原采收瑞香狼毒(經哈爾濱師范大學王臣教授鑒定)，取根去土淋洗后充分陰干室溫保存待用.

1.2.2 供試害蟲

2010年9月20日上午在哈爾濱師范大學試驗田白菜地人工捕獲菜青蟲，蟲齡4齡［11］.

1.3 試驗方法

1.3.1 主要儀器與藥品

9FZ－15B型多用磨粉機(國營簡陽機械廠)、CQ250超聲波清洗儀(上海超聲波儀器廠)、RE－52A型旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，95%乙醇(哈爾濱市新達化工廠).

1.3.2 藥用成分提取

藥材處理采用常溫浸泡，超聲波輔助提取法.將處理后的根剪成3 cm左右小段，120目篩磨成絮狀粉末.取根粉1.5 kg，平均分成6份，每份按料液比1∶20(g∶mL)加入95%乙醇浸泡過夜.次日超聲波提取30 min后過濾得濾液，重復3次，合并總濾液，旋轉蒸發(fā)儀回流濃縮至300 mL，定為原液，回收乙醇.原液加水稀釋至不同濃度，蒸餾水做對照.

1.3.3 室內殺蟲試驗

參照葉碟法［12］，將未使用過任何農藥的新鮮白菜葉片用圓形打孔器打成Φ=2 cm葉碟，取一定量分別浸入已配制好的各濃度藥液中片刻后取出.取Φ=9 cm培養(yǎng)皿放入濾紙，噴少許水保濕，每皿10片葉碟.每濃度設10皿為一組，每個培養(yǎng)皿放入健康幼蟲5條，重復3次.試驗過程中為防止有寄生蠅出現(xiàn)，用網(wǎng)遮罩，并保持葉碟新鮮，及時撿出死蟲，蟲糞多時應及時更換新培養(yǎng)皿.記錄24 h、48 h、72 h各組死蟲數(shù).

1.3.4 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)采用校正死亡率±標準差表示，采用SPSS Statistics17.0進行統(tǒng)計學分析，求出半致死濃度(LC50)［13－14］.

校正死亡率%=(處理組死亡率－對照組死亡率)/(1－對照組死亡率)(Abbott公式).

2 結果與分析

研究表明:當濃度為160 mol/L時，72 h內4齡幼蟲表現(xiàn)出高度的拒食現(xiàn)象，幼蟲在葉碟附近趨避繞行;其余濃度處理見表1.校正死亡率隨瑞香狼毒總提取液稀釋倍數(shù)增大而降低，濃度為2.5 mol/L時殺蟲效果不高，72 h時僅達到27.09%.統(tǒng)計學分析表明，3個處理時間條件下各組數(shù)據(jù)與對照組相比均達到差異顯著水平，48 h和72 h時與對照組相比達到差異極顯著，而濃度為80 mol/L和40 mol/L，殺蟲效果差異不顯著，即毒力相近.

表1 提取物對菜青蟲活性測定結果

表2 提取物對菜青蟲的毒力測定結果

表2所示:3個處理時間，校正死亡率與濃度之間有很好的相關關系，P＜0.05，回歸顯著，經計算 LC50分別為 39.36 mol/L、17.02 mol/L 和8.81 mol/L.可能是由于隨時間延長毒物在受試蟲體內逐漸累積所致.

3 討論

前人試驗過程中將提取液濃縮至稠膏狀，該試驗發(fā)現(xiàn)稠膏狀物很難從圓底瓶中取出，而且不易吸水，稀釋濃度不確定.為解決以上問題，本實驗取2.50 kg根粉按料液比 1∶20(g∶mL)加入95%乙醇，濃縮至500 mL，定為原液，而原液中含有的乙醇，可以作為媒溶劑，再進一步加水稀釋，便于總提取物直接應用.

該試驗中菜青蟲直接從試驗田白菜地獲得，齡期為4齡，不同齡期取食量及抗藥能力有所不同，1～3齡幼蟲的取食量小，而5齡幼蟲易進入蛹期［11］，影響試驗.本試驗中選用4齡菜青蟲，此時期較3齡及3齡前的取食量大，且在72 h的試驗期間不化蛹.

在農業(yè)生產中，毒殺不如拒食作用的效果好［17］，毒殺作用會造成葉片損傷，對產量會造成一定的影響，而拒食作用使害蟲趨避，可以更好的保護作物葉片.且拒食作用不破壞食物鏈.本試驗濃度為160 mol/L時對4齡菜青蟲有較好的拒食作用，但對藥材原料需求量大，有關拒食作用，仍有待于進一步研究.

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Study on the Insecticidal Activity of Stellera Chamaejasme

Shi Chuanqi，Wang Chen
(Harbin Normal University)

The applications of Stellera chamaejasme in botanical pesticide are studied in this paper，which is concentrated 2.50 kg root powder and 95%ethanol mixture to 500 ml as the crude solution，dilutes to different concentrations and adopted the disc－leaf－method to kill the 4th larva of Pieris rapae.The results show that a high antifeedant effect when the concentration is 160 mol/L.The effects of concentration 80 mol/L and 40 mol/L are similar.The highest insecticidal effect is 85.36%when the concentration is 80 mol/L at 72 h，but only 27.09%when the concentration is 2.5 mol/L.Under the 3 processing time，LC50(Lethal Concentration 50)are 39.36 mol/L，17.02 mol/L and 8.81 mol/L.Therefore，Stellera chamaejasme in the use of botanical pesticide has good prospects.

Stellera chamaejasme;Crude extraction;Larvae of Pieris rapae;Insecticide

2010－10－11

*通訊作者

(責任編輯:李佳云)