陳 璐,李 琪,王慶志,孔令鋒,鄭小東

(中國(guó)海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,山東青島266003)

密鱗牡蠣的人工繁育*

陳 璐,李 琪**,王慶志,孔令鋒,鄭小東

(中國(guó)海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,山東青島266003)

研究密鱗牡蠣(Ostrea denselamellosa)的親體培育和苗種培育技術(shù);研究鹽度、溫度、密度和餌料等因子對(duì)浮游幼蟲(chóng)生長(zhǎng)及存活的影響,首次建立密鱗牡蠣的人工繁育技術(shù)。結(jié)果表明,排出體外的D形幼體在水溫23～25℃,經(jīng)約28 d出現(xiàn)眼點(diǎn),進(jìn)入附著變態(tài)階段;幼蟲(chóng)培育的最佳鹽度為30;在24～32℃,幼蟲(chóng)生長(zhǎng)速度與溫度呈正比,成活率與溫度成反比;在培育密度為1,2,3和4/mL 4組中,1/mL組生長(zhǎng)最快,但各組間存活率無(wú)顯著差異;湛江等鞭金藻,50%湛江等鞭金藻+50%扁藻,50%湛江等鞭金藻+50%小球藻和小球藻4種餌料投喂組中,50%湛江等鞭金藻+50%扁藻組的生長(zhǎng)顯著高于其他組;不同附著基的附苗率依次為:扇貝殼>波紋板>篩絹>網(wǎng)片>聚乙烯薄膜。

密鱗牡蠣;人工繁育;環(huán)境因子;附著基

密鱗牡蠣(Ostrea denselamellosaLischke),隸屬于瓣鰓綱(Lanellibranchia),異柱目(Anisomyaria),牡蠣科(Ostreidae),牡蠣屬(Ostrea),一般棲息于潮下帶至水深30 m以內(nèi)的鹽度較高且較穩(wěn)定的淺海,在我國(guó)、朝鮮半島、日本沿海均有分布[1]。密鱗牡蠣軟體部不但富含?；撬帷⒏叨炔伙柡椭舅?還具有低脂肪、低膽固醇及無(wú)機(jī)鹽、維生素含量高的特點(diǎn),營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較為豐富[3]。但由于密鱗牡蠣在我國(guó)沿海分布分散,資源量少等原因,其經(jīng)濟(jì)價(jià)值尚未被開(kāi)發(fā)利用[4]。

近年來(lái),由于海洋開(kāi)發(fā)以及海區(qū)自然環(huán)境的不斷惡化,密鱗牡蠣的資源量日趨減少。因此,開(kāi)展密鱗牡蠣的人工繁殖技術(shù)研究,對(duì)于保護(hù)密鱗牡蠣自然資源,開(kāi)發(fā)新的養(yǎng)殖品種具有重要意義。與牡蠣屬的其他牡蠣一樣,密鱗牡蠣為幼生型種類。性成熟時(shí),密鱗牡蠣雌性個(gè)體將成熟的卵子排放到出水腔中,依靠排水孔附近的外套膜和鰓肌的作用,將卵子壓入鰓腔中,并在這里受精,胚胎發(fā)育成D形幼蟲(chóng)后離開(kāi)母體,在海水中經(jīng)過(guò)一個(gè)浮游階段,然后附著變態(tài)成為稚貝。盡管密鱗牡蠣在我國(guó)分布廣泛,然而關(guān)于其苗種培育的研究迄今未有報(bào)道。本文研究鹽度、溫度、密度和餌料等環(huán)境因子對(duì)密鱗牡蠣浮游幼體的生長(zhǎng)與存活以及不同附著基對(duì)幼體附著變態(tài)的的影響,旨在為建立密鱗牡蠣人工繁育技術(shù)提供基礎(chǔ)材料。

1 材料與方法

1.1 親貝蓄養(yǎng)

人工育苗試驗(yàn)在山東省文登市水產(chǎn)綜合育苗實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。所用種貝為2009年5月采捕于青島膠南水域的野生個(gè)體(平均殼長(zhǎng)(11.2±7.3)cm,殼寬(4.1±2.1)cm,體質(zhì)量(292.1±76.9)g)。將親貝置于室內(nèi)人工暫養(yǎng),暫養(yǎng)期間水溫控制在20～23℃;餌料以湛江等鞭金藻(Isochrysis zhanjiangensis)為主,兼投小球藻(Chlorella vulgaris)和扁藻(Platymonas subcordif ormis)。

1.2 幼蟲(chóng)的收集、培育與采苗

親貝暫養(yǎng)期間,每日觀察密鱗牡蠣鰓腔中是否有受精卵。由于密鱗牡蠣干露后,雙殼略微張開(kāi),肉眼可以直接觀察其鰓腔中是否含有受精卵。將鰓腔中含有受精卵的親貝移于孵化池中待產(chǎn),直至D形幼蟲(chóng)排放完畢,再將親貝取出。

D形幼蟲(chóng)收集完畢后,將其移至15 m3水池中蓄養(yǎng),密度2～3/mL。培育用水為二級(jí)砂濾海水并經(jīng)350目篩絹過(guò)濾,鹽度30,水溫24～25℃。D形幼蟲(chóng)時(shí)期日換水1/3,至后期殼頂幼蟲(chóng)日換水1/2以上,每10 d倒池一次。密鱗牡蠣D形幼蟲(chóng)的開(kāi)口餌料為湛江叉鞭金藻,殼頂幼蟲(chóng)之前只投喂金藻,密度為5 000/mL;殼頂幼蟲(chóng)時(shí)期開(kāi)始加喂適量扁藻,金藻量調(diào)整為3×104/mL,眼點(diǎn)出現(xiàn)前加至5×104/mL。每日觀察、測(cè)量幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)和攝食情況。

當(dāng)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)至約350μm×320μm時(shí),開(kāi)始出現(xiàn)眼點(diǎn)和足。眼點(diǎn)幼蟲(chóng)比例達(dá)20%時(shí)開(kāi)始投放采苗器。采苗器采用櫛孔扇貝貝殼,用1∶10的鹽酸溶液浸泡以除去表面污物,并用清水沖洗浸泡備用。125～150片扇貝殼串成一吊,垂懸于培育池中供幼蟲(chóng)附著。每片扇貝殼附著15～20個(gè)牡蠣苗后取出,移另池培養(yǎng)4～7 d后出池。幼蟲(chóng)附著期間,加大充氣量和投餌量。

1.3 環(huán)境因子對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)與存活的影響

采用5 L容器,分別研究溫度、鹽度、密度及餌料對(duì)浮游幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)和存活的影響。溫度實(shí)驗(yàn)的溫度梯度為24、26、29和32℃,鹽度為30;鹽度實(shí)驗(yàn)的鹽度梯度為18、22、26、30,溫度為24℃;密度實(shí)驗(yàn)的密度梯度為1、2、3、4/mL,溫度為24℃,鹽度為30;餌料實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)組為:1)湛江等鞭金藻(107/mL);2)50%金藻(0.5×107/mL)+50%扁藻(106/mL);3)50%金藻(0.5×107/mL)+50%小球藻(5×107/mL);4)小球藻(5×107/mL)。溫度、鹽度和餌料實(shí)驗(yàn)的幼蟲(chóng)初始密度均為1/mL。各實(shí)驗(yàn)梯度均設(shè)3個(gè)重復(fù),每2 d取樣1次,測(cè)定生長(zhǎng)和密度,連續(xù)觀測(cè)13 d至幼蟲(chóng)開(kāi)始附著為止。

1.4 附著基對(duì)幼蟲(chóng)附著變態(tài)的影響

采用10 L容器,眼點(diǎn)的幼蟲(chóng)密度為1/mL,分別投放扇貝串,波紋板,篩絹(80目),網(wǎng)片(20目)和聚乙烯薄膜5種附著基,觀察密鱗牡蠣浮游幼蟲(chóng)的附著情況,每組試驗(yàn)均設(shè)置3次重復(fù)。投放附著基6 d后,統(tǒng)計(jì)不同附著基的幼蟲(chóng)附著數(shù)量,并計(jì)算單位面積(cm2)的幼蟲(chóng)附著量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

利用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS(16.0)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA),檢驗(yàn)處理間的差異顯著性,當(dāng)P<0.05時(shí)認(rèn)為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 浮游幼蟲(chóng)的培育

密鱗牡蠣從受精卵至D形幼蟲(chóng)的排放平均需要2 d。剛排出體外的D形幼蟲(chóng)平均殼高(133±2.1)μm,殼長(zhǎng)(149.3±1.4)μm。

在幼蟲(chóng)培育密度為0.5～1/mL時(shí),浮游幼蟲(chóng)前期(1～14 d)生長(zhǎng)速度較慢,平均日增長(zhǎng)為(5.6±0.7)μm;當(dāng)殼長(zhǎng)達(dá)到(180±2.3)μm時(shí),進(jìn)入殼頂幼蟲(chóng)期,生長(zhǎng)速度明顯加快,日均增長(zhǎng)達(dá)到(12±1.3)μm(見(jiàn)圖1);浮游幼蟲(chóng)經(jīng)28 d生長(zhǎng),殼長(zhǎng)約(320±1.1)μm時(shí),幼蟲(chóng)開(kāi)始出現(xiàn)眼點(diǎn)。殼高(H)與殼長(zhǎng)(L)回歸方程:H=1.074L-26.706(r=0.977)。

圖1 密鱗牡蠣浮游幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)Fig.1 Shell height and length ofO.denselamellosalarvae

2.2 環(huán)境因子對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)與存活的影響

2.2.1 鹽度對(duì)浮游幼蟲(chóng)生長(zhǎng)與存活的影響 如圖2所示,從第3d開(kāi)始,幼蟲(chóng)在不同鹽度下的生長(zhǎng)開(kāi)始出現(xiàn)差異,其中鹽度18下幼蟲(chóng)生長(zhǎng)最為緩慢,并于第7天開(kāi)始顯著低于鹽度22,30和26組(P<0.05);鹽度30下幼蟲(chóng)平均日增長(zhǎng)量最大。鹽度18實(shí)驗(yàn)組幼蟲(chóng)的存活率較其他海水鹽度組低,但差異不顯著(P>0.05)。

圖2 不同鹽度對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和存活的影響Fig.2 The growth and survival rates ofO.denselamellosa at different salinities

2.2.2 溫度對(duì)浮游幼蟲(chóng)生長(zhǎng)與存活的影響 如圖3所示,從第3天開(kāi)始,幼蟲(chóng)在不同溫度下的生長(zhǎng)開(kāi)始出現(xiàn)差異,其中24℃組幼蟲(chóng)生長(zhǎng)最為緩慢,并且顯著低于溫度32℃組(P<0.05);第7天開(kāi)始,24℃組幼蟲(chóng)的平均日增長(zhǎng)量顯著低于29℃和32℃組(P<0.05);第13天開(kāi)始,24℃組幼蟲(chóng)的平均日增長(zhǎng)量顯著低于26℃組(P<0.05)。第5天開(kāi)始,不同組別的幼蟲(chóng)存活率開(kāi)始出現(xiàn)差異;第7天,29℃和32℃組的幼蟲(chóng)存活率明顯低于24℃組(P<0.05);第11天時(shí),各組存活率依次為:24℃組>26℃組>29℃組>32℃組。

圖3 不同溫度對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和存活的影響Fig.3 The growth and survival rates ofO.denselamellosa at different temperatures

2.2.3 密度對(duì)浮游幼蟲(chóng)生長(zhǎng)與存活的影響 如圖4所示,從第5天開(kāi)始,不同密度組幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)開(kāi)始出現(xiàn)差異,其中3/mL和4/mL組幼蟲(chóng)生長(zhǎng)最為緩慢,并且顯著低于1/mL組(P<0.05)。但各密度組之間的幼蟲(chóng)存活率差異不顯著(P>0.05)。

圖4 不同密度對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和存活的影響Fig.4 The growth and survival rates ofO.denselamellosa at different destinies

2.2.4 餌料對(duì)浮游幼蟲(chóng)生長(zhǎng)與存活的影響 如圖5所示,從第3天開(kāi)始,不同餌料組幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)開(kāi)始出現(xiàn)差異,其中金藻+扁藻投喂組的幼蟲(chóng)生長(zhǎng)最為迅速,第7天始顯著高于小球藻投喂組(P<0.05);第9天時(shí),各組生長(zhǎng)率依次為金藻+扁藻組>金藻+小球藻組>金藻組>小球藻組。但投喂不同的餌料對(duì)幼蟲(chóng)的存活率影響不顯著(P>0.05)。

圖5 不同種餌料對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和存活的影響Fig.5 The growth and survival rates ofO.denselamellosa at different diets

2.3 附著基對(duì)幼蟲(chóng)附著變態(tài)的影響

投放附著基6 d后,波紋板、聚乙烯薄膜、篩絹、扇貝殼和網(wǎng)片5種附著基的單位面積平均附苗量分別為0.67,0.08,0.30,1.77和0.01/cm2。扇貝殼的附苗數(shù)量顯著高于其他附著基。

圖6 密鱗牡蠣幼蟲(chóng)各附著基附著情況Fig.6 The settling rates ofO.denselamellosa for five substrates

3 討論

許多貝類在繁殖季節(jié),親體將成熟的精子和卵子排出體外,精子和卵子在海水中受精,稱為卵生型;相反,有部分貝類在繁殖時(shí),親體將成熟的卵子排放到出水腔中,依靠排水孔附近的外套膜和鰓肌的作用,將生殖細(xì)胞壓入鰓腔中,并在這里受精,胚胎發(fā)育成D形幼蟲(chóng)后離開(kāi)母體,在海水中經(jīng)過(guò)自由浮游階段,然后附著變態(tài)成為稚貝,稱為幼生型[5-6]。牡蠣屬為幼生型,如密鱗牡蠣,歐洲牡蠣(Ostrea edulis),希臘牡蠣(Ostrea lurida)[6-7]。密鱗牡蠣親貝體內(nèi)的受精卵發(fā)育到D形幼蟲(chóng)期后,排到海水中進(jìn)行浮游生活,然后附著變態(tài)成稚貝,營(yíng)固著生活。在水溫23℃時(shí),密鱗牡蠣的受精卵經(jīng)2 d左右發(fā)育成D形幼蟲(chóng),而太平洋牡蠣受精卵僅需20～22 h便可發(fā)育成D形幼蟲(chóng)[8];密鱗牡蠣D形幼蟲(chóng)經(jīng)過(guò)28 d左右的培育,平均殼長(zhǎng)達(dá)320μm時(shí),幼蟲(chóng)開(kāi)始出現(xiàn)眼點(diǎn),而太平洋牡蠣D形幼蟲(chóng)僅需20 d左右,幼蟲(chóng)平均殼長(zhǎng)可達(dá)280μm時(shí),幼蟲(chóng)出現(xiàn)眼點(diǎn)[8]。

密鱗牡蠣的浮游期為28 d,大大超過(guò)一般雙殼貝類的浮游時(shí)間,如太平洋牡蠣浮游期為18～20 d[8],泥蚶浮游期為10 d左右[9],菲律賓蛤仔為9～10 d[10],文蛤?yàn)?～8 d[11],青蛤?yàn)?～6 d[12]。因此,密鱗牡蠣的育苗難度也相對(duì)加大,對(duì)水質(zhì)的要求更高。由于6～7月海水中輪蟲(chóng)、撓足類等浮游動(dòng)物的卵較多,一旦其進(jìn)入幼蟲(chóng)培育水體,孵化的輪蟲(chóng)、撓足類則會(huì)與浮游幼蟲(chóng)競(jìng)爭(zhēng),影響幼蟲(chóng)生長(zhǎng)。所以防止輪蟲(chóng)、撓足類的卵子進(jìn)入育苗水體對(duì)于密鱗牡蠣幼蟲(chóng)培育的成敗尤為重要。

在密鱗牡蠣幼蟲(chóng)培育過(guò)程中,各環(huán)境因子對(duì)幼蟲(chóng)發(fā)育影響顯著。試驗(yàn)表明,在鹽度26～30下幼蟲(chóng)生長(zhǎng)速度較快,鹽度18時(shí),幼蟲(chóng)死亡率并沒(méi)有明顯高于其它鹽度梯度,但通過(guò)觀察,發(fā)現(xiàn)低鹽下幼蟲(chóng)活動(dòng)緩慢,胃不飽滿,對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍。幼蟲(chóng)生長(zhǎng)速度與溫度關(guān)系密切,在23～32℃之間生長(zhǎng)速度隨溫度的升高而加快,但32℃時(shí)幼蟲(chóng)死亡率明顯高于其它溫度梯度。隨著夏季水溫的升高,密度對(duì)幼蟲(chóng)培育的影響更加顯著。在密度梯度為1,2,3和4/mL的4個(gè)組別中,密度越高,生長(zhǎng)率越低,但各組之間死亡率并沒(méi)有明顯差距。就貝類而言,單一餌料的營(yíng)養(yǎng)不夠全面均衡,而2種以上的餌料,則可充分的供給所需的養(yǎng)分[12-14]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看,混合投喂的效果明顯好于單一餌料,即使像小球藻這種效果差的餌料,經(jīng)混合搭配后,幼蟲(chóng)生長(zhǎng)效果也較好。密鱗牡蠣育苗期正值盛夏,金藻培養(yǎng)難度大,餌料的混合投喂有效的解決了這個(gè)難題,滿足了幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的需要,保障育苗的順利進(jìn)行。

當(dāng)密鱗牡蠣幼蟲(chóng)即將結(jié)束浮游生活變態(tài)附著時(shí),即生長(zhǎng)至約350μm×320μm時(shí)在軟體部中央生出一個(gè)黑點(diǎn),稱眼點(diǎn)。密鱗牡蠣的眼點(diǎn)較太平洋牡蠣的眼點(diǎn)大,眼點(diǎn)形成后幼蟲(chóng)游泳能力減弱,相繼形成足,足伸出體外匍匐尋機(jī)分泌足絲附著,因此眼點(diǎn)的出現(xiàn),是投放附著基時(shí)機(jī)的標(biāo)志。由于幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育速度有所差異,出現(xiàn)眼點(diǎn)時(shí)間也有早有晚,因此應(yīng)在眼點(diǎn)幼蟲(chóng)比例達(dá)1/3以上時(shí)開(kāi)始投放附著基。投放過(guò)早,因附著基上沉降浮泥污物,影響附苗,同時(shí)也不便管理;如果投放過(guò)晚又將錯(cuò)過(guò)附著機(jī)會(huì)。因此,附著基的投放時(shí)間對(duì)幼蟲(chóng)的附著變態(tài)尤為重要。

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Techniques of Artificial Breeding of the Oyster Ostrea denselamellosa

CHEN Lu,LI Qi,WANG Qing-Zhi,KONG Ling-Feng,ZHENG Xiao-Dong
(College of Fisheries,Ocean University of China,Qingdao 266003,China)

Broodstock conditioning and larval rearing were for the first time investigated in the oysterOstrea denselamellosa.The effects of salinity,water temperature,density and diets on growth and survival rates ofO.denselamellosalarvae were also examined.After larval rearing of about 28 days,the larvae developed to the stage of metamorphosis characterized by the appearance of eye spot in 28～30 psu at 23～25℃.As the temperature changed from 24℃through 32℃,the growth rate of the larvae was positively correlated to temperature,while the survival rate negatively correlated.For the four experimental groups with stocking densities of 1,2,3 and 4 larvae mL-1,larvae reared at the lowest density had the largest mean size,but there is no significant difference in survival rate.Compared with two monoalgal diets ofIsochrysis zhanjiangensisandPlatymonas subcordif ormisand a mixed diet ofI.zhanjiangensisandChlorella vulgaris,the highest growth rate was achieved with the mixed diet ofI.zhanjiangensisandP.subcordif ormis.The setting rates of the oyster larvae varied depending on the type of substrate used.The scallop shell had the highest setting rate of larvae,followed by plastic sheet,screen mesh,monofilament nylon and plastic film.

Ostrea denselamellosa;artificial breeding;environmental factors;substrates

S917.4

A

1672-5174(2011)03-043-05

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2006AA10A409)資助

2009-12-07;

2010-03-29

陳 璐(1983-),男,碩士生。E-mail:aludibaby@163.com

**通訊作者:Tel:0532-82031622;E-mail:qili66@ouc.edu.cn

責(zé)任編輯 于 衛(wèi)