奶牛胚胎移植技術(shù)是目前奶牛繁育領(lǐng)域中先進(jìn)的生物技術(shù)，是生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奶牛和提高母犢出生比例的有效途徑。2008年12月，個(gè)舊市畜牧技術(shù)推廣站與云南中科胚胎工程生物技術(shù)有限公司合作，在乍甸乳業(yè)奶牛場和市畜牧技術(shù)推廣站肉牛養(yǎng)殖場進(jìn)行了荷斯坦奶牛性別控制胚胎移植試驗(yàn)，移植妊娠率為32.6%，產(chǎn)犢率為73.3%，性別控制準(zhǔn)確率達(dá)90.9%，收到了一定的效果。

一、試驗(yàn)地點(diǎn)

云南省個(gè)舊市乍甸乳業(yè)奶牛場、市畜牧技術(shù)推廣站肉牛養(yǎng)殖場。

二、試驗(yàn)材料

1. 受體母牛的選擇。①品種:荷斯坦奶牛、黃牛。②年齡:18~20月齡青年牛和1~4胎的經(jīng)產(chǎn)母牛。③體重:青年牛體重為成年牛體重的75%。④無產(chǎn)科疾病:直腸檢查母牛生殖系統(tǒng)(卵巢、卵泡、子宮)發(fā)育正常，無生殖道疾病，無流產(chǎn)史，發(fā)情正常，無傳染性疾病。⑤營養(yǎng)狀況良好:選擇健康、體型較大、性情溫馴、膘情適中的母牛，營養(yǎng)狀況中等以上。

2. 藥品和器械。前列腺素、2%普魯卡因注射液、70%酒精棉球、胚胎移植槍、無菌外套、衛(wèi)生紙。

3. 冷凍性控胚胎。云南中科胚胎工程生物技術(shù)有限公司提供。

三、試驗(yàn)方法

1. 對受體牛催情。按照受體選擇標(biāo)準(zhǔn)，共選擇受體牛85頭。受體牛同期發(fā)情處理，采用2次注射前列腺素的方法，即在受體牛發(fā)情周期的任意一天注射前列腺素4毫升，間隔11天后第二次注射前列腺素5毫升，36~72小時(shí)后進(jìn)行發(fā)情觀察，每天早晨、中午、下午各觀察1次，每次1小時(shí)，并做好詳實(shí)的記錄。

2. 對受體牛的黃體及子宮同步檢查。第二次注射前列腺素后，根據(jù)受體牛發(fā)情情況，在發(fā)情后的第七天，直腸檢查受體牛子宮、黃體大小、質(zhì)地、性狀等，未排卵及新生黃體或黃體界限不明顯的受體牛予以淘汰，不進(jìn)行移植。經(jīng)檢查確定黃體合格的受體牛先用2%普魯卡因注射液尾椎硬膜外麻醉，消毒、清洗擦拭外陰后進(jìn)行移植。

3. 冷凍胚胎的操作程序。胚胎操作室要求干凈、無灰塵、無異味。在移植前進(jìn)行紫外線消毒，所有器械、用品需經(jīng)嚴(yán)格消毒處理且擺放井然有序，便于使用。工作人員的手臂在操作前要用酒精棉消毒。本實(shí)驗(yàn)所采用的胚胎冷凍保護(hù)劑為甘油，多步脫甘油解凍處理后進(jìn)行移植，移植程序?yàn)?胚胎解凍→胚胎質(zhì)量鑒定→合格胚胎裝管→移植。

4. 胚胎移植。將解凍裝管的胚胎在較短的時(shí)間內(nèi)(原則上不超過10分鐘)植入受體牛體內(nèi)，同時(shí)要注意兩手的協(xié)調(diào)性，避免在移植的過程中擦破子宮內(nèi)膜。移植部位是黃體發(fā)育較好一側(cè)子宮角的上二分之一至下三分之一，如有可能則越深越好。

5. 移植后受體牛的飼養(yǎng)管理。受體牛要栓系圈養(yǎng)，保持環(huán)境安靜，避免應(yīng)激。每天補(bǔ)飼精料2.5千克，精料要營養(yǎng)豐富、品質(zhì)優(yōu)良，同時(shí)，供給優(yōu)質(zhì)牧草，注意補(bǔ)充維生素A、D、E和微量元素及礦物質(zhì)，每天飼喂青貯飼料25千克以上，禁止飼喂霉變飼料。

四、結(jié)果

對85頭受體牛進(jìn)一步篩選，共選出適宜胚胎移植的母牛46頭，經(jīng)過二次同期發(fā)情處理，3個(gè)月后進(jìn)行直腸妊娠檢查，確定移植妊娠的15頭，移植平均妊娠率為32.6%。產(chǎn)犢11頭，其中母犢10頭、公犢1頭，產(chǎn)犢率73.3%，性別控制準(zhǔn)確率達(dá)90.9%。

五、討論

1. 與受胎率相關(guān)的主要因素。此次選擇的母牛發(fā)情正常，營養(yǎng)狀況良好，經(jīng)產(chǎn)牛年齡為1.5~6歲，無產(chǎn)科疾病，但受胎率仍較低，主要原因有2方面:一是初次進(jìn)行胚胎移植，缺乏實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，技術(shù)員水平較低。二是胚胎質(zhì)量。胚胎質(zhì)量也是決定移植成功與否的重要因素之一，只有好的胚胎才能獲得較高的受胎率。選擇A級胚胎可保證獲得較高的受胎率，但此次移植的胚胎全部是B級，所以移植試驗(yàn)的受胎率相對較低。

2. 發(fā)情癥狀與受胎率的關(guān)系。受體牛的兩次發(fā)情癥狀明顯，外陰腫脹明顯，黏液量多，清亮干凈的受胎率較高。

3.黃體發(fā)育與受胎率的關(guān)系。通過對受體牛進(jìn)行直檢，黃體發(fā)育直徑在0.6~1.5厘米之間，凸出卵巢表面，有彈性、柔軟的受胎率高。

4. 受體牛的年齡跟受胎有關(guān)。此次移植選擇的受體牛為1~4胎的經(jīng)產(chǎn)牛，受胎牛15頭，其中青年牛6頭，占40%，青年牛相對經(jīng)產(chǎn)牛受胎率較高。

5. 受體牛的飼養(yǎng)管理。對牛群進(jìn)行精心飼養(yǎng)管理，日糧精粗搭配，在胚胎移植前6~8周開始加強(qiáng)營養(yǎng)供給，在同期發(fā)情處理前1周開始飼喂精料，每天2.5千克，直到胚胎移植時(shí)。苜蓿、黑麥草自由采食，粗料以青貯玉米秸為主。保持牛體況良好，膘情中等。受體牛自由運(yùn)動。

(作者聯(lián)系地址:許婭虹 馬云章 李寧仙 云南省個(gè)舊市畜牧技術(shù)推廣站 郵編:661110;王建云 龍梅 云南省紅河州動物衛(wèi)生監(jiān)督所 郵編:661110)