[摘要]目的:檢測(cè)Runx3和Ki-67蛋白在皮膚惡性黑色素瘤(CMM)中的表達(dá)水平，以探討Runx3和Ki-67在CMM發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。方法:采用免疫組織化學(xué)法研究Runx3和Ki-67蛋白在皮膚惡性黑色素瘤、皮膚交界痣及正常皮膚中的表達(dá)。結(jié)果:Runx3蛋白在CMM中陽性表達(dá)率為23.68%，與皮膚交界痣(85.00%)和正常皮膚(90.00%)相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Ki-67蛋白在CMM中陽性表達(dá)率為78.95%，與皮膚交界痣(25.00%)和正常皮膚(25.00%)相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:皮膚惡性黑色素瘤的產(chǎn)生可能與Runx3蛋白的表達(dá)降低及Ki-67蛋白的表達(dá)升高有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]Runx3;Ki-67;皮膚惡性黑色素瘤

[中圖分類號(hào)]Q813.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455(2010)07-1013-02

Expression of Runx3 and Ki-67 in Cutaneous M alignant Melanoma

CAO Jun-hua，CHEN Min-jing，CHEN Jian-hua

(Department of Plastic Surgery，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，Henan，China)

Abstract:ObjectiveTo detect the expression of Runx3 and Ki-67 in Cutaneous M alignant Melanoma(CMM)， in order to explore Runx3' and Ki-67' effection during the generation and development of CMM.MethodsImmunohistochemistry technique was perfomed to evaluate the alterations of the Runx3 and Ki-67 protein in CMM，Junction Nevus and normal skin tissues.ResultsThe expression rate of Runx3 protein in the CMM， Junction Nevus and normal skin is 23.68%，85.00%，90.00%. There was a statical significance between the CMM and Junction Nevus or normal skin(P<0.05);The expression rate of Ki-67 protein in the CMM， Junction Nevus and normal skin is 78.95%，25.00%，25.00%.There was a statical significance between the CMM and Junction Nevus or normal skin(P<0.05).ConclusionThe occurrence and development of CMM may be related to the low-expression rate of Runx3 protein and the high-expression rate of Ki-67 protein.

Key words:Runx3; Ki-67; Cutaneous M alignant Melanoma(CMM)

皮膚惡性黑色素瘤是一種惡性程度較高的體表腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與抑癌基因的失活、突變及細(xì)胞異常增殖密切相關(guān)。Runx3是一個(gè)新近在Runx3家族中受到廣泛關(guān)注的基因，Runx3蛋白與smad2、smad3形成復(fù)合物傳遞TGF-β/activin信號(hào)，在誘發(fā)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期中起重要作用[1]。Ki-67蛋白是人類異常增生細(xì)胞核中普遍存在的標(biāo)志性抗原，在細(xì)胞增殖期表達(dá)，Ki-67蛋白表達(dá)可反映腫瘤細(xì)胞增殖活性，與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后高度相關(guān)[3]?；赗unx3和Ki-67在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用，本研究采用免疫組化(SP)法檢測(cè)Runx3和Ki-67蛋白在CMM、交界痣及正常皮膚組織中的表達(dá)水平。

1材料和方法

1.1病例資料:選取2006～2008年間就診于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院并行皮膚活檢的惡性黑色素瘤患者38例，交界痣患者20例，收集我院整形外科行全皮片移植的非癌患者手術(shù)時(shí)修剪所剩皮膚為正常對(duì)照組。所有研究對(duì)象均有完備的病史資料，且無皮膚病等合并疾病，術(shù)前均未行任何治療。

1.2實(shí)驗(yàn)方法:采用免疫組化s-p法。試劑:兔抗人Runx3多克隆抗體、兔抗人Ki-67多克隆抗體SP試劑盒均購自北京博奧森生物科技公司。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3結(jié)果判定:評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):①根據(jù)著色的強(qiáng)弱，不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;②根據(jù)陽性細(xì)胞面積，陽性細(xì)胞面積/細(xì)胞總面積<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。陽性標(biāo)本判斷標(biāo)準(zhǔn)為:兩者定性積分≥2分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有顯著性。

2結(jié)果

2.1正常皮膚、交界痣及MM中 Runx3和Ki-67蛋白的表達(dá)情況(圖1～6):Runx3蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，在MM中Runx3表達(dá)陽性率明顯低于在交界痣及正常皮膚組織中的表達(dá)陽性率;Ki-67蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，在MM組織中表達(dá)陽性率明顯高于交界痣及正常皮膚組織。

2.2Runx3和Ki-67蛋白在不同組織類型中的表達(dá)見表1。

2.3 獨(dú)立樣本體檢驗(yàn)結(jié)果: Runx3和Ki-67蛋白在正常皮膚中的表達(dá)與交界痣中的表達(dá)之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，Runx3和Ki-67蛋白在正常皮膚、交界痣中的表達(dá)與在MM中的表達(dá)之間存在明顯差異，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 Runx3與Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性:Runx3與Ki-67蛋白在MM中同時(shí)表達(dá)，經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)性分析可知，二者呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

3討論

Runx3是Runx3家族中新近受到廣泛關(guān)注的基因，在誘發(fā)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期過程中起重要作用。在TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，被激活的smad4復(fù)合物需在Runx3蛋白的指導(dǎo)下，方能從細(xì)胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)特定靶位點(diǎn)，并加強(qiáng)smad4復(fù)合物與靶位點(diǎn)的結(jié)合強(qiáng)度[2]。因此，Runx3可能作為TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，對(duì)TGF-β上皮細(xì)胞生長起負(fù)調(diào)控作用，其表達(dá)缺失或改變將直接導(dǎo)致Smad蛋白功能的受限，進(jìn)而影響TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的生物活性，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]。我們應(yīng)用免疫組化SP法研究發(fā)現(xiàn)正常皮膚、交界痣及MM組織中Runx3蛋白均表達(dá)于細(xì)胞核，正常皮膚及交界痣組織中Runx3蛋白陽性率分別為(90.00%)、(85.00%)，明顯高于MM(23.68%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05﹚。提示Runx3蛋白低表達(dá)或失表達(dá)可能與MM的發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，檢測(cè)Runx3蛋白水平可能為MM的診斷及預(yù)后提供理論依據(jù)。

Ki-67是人類增生細(xì)胞核中普遍存在的標(biāo)志性抗原，在細(xì)胞增殖期時(shí)表達(dá)，與細(xì)胞周期關(guān)系密切[5]。細(xì)胞的增殖和凋亡之間達(dá)到一種平衡狀態(tài)，才能使多細(xì)胞有機(jī)體的各種生長發(fā)育正常進(jìn)行，這需要細(xì)胞的增殖、分化和凋亡過程的緊密配合才能實(shí)現(xiàn)。Ki-67的表達(dá)過度往往提示細(xì)胞增殖過度，且與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后高度相關(guān)[3]。通過對(duì)Ki-67檢測(cè)可估計(jì)惡性腫瘤的細(xì)胞增殖情況及惡變程度。本研究顯示MM中Ki-67蛋白陽性率(78.95%)明顯高于正常皮膚組織(25.00%)和交界痣組織(25.00%)，提示細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)是腫瘤發(fā)生的一個(gè)因素。

MM具有無限生長和早期浸潤轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，目前還沒有較好的治療方法。通過本研究表明，Runx3和Ki-67與MM的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。提高Runx3蛋白的表達(dá)，促進(jìn)TGF-β/smad4信號(hào)通路活化可能為MM的治療提供一個(gè)新方法。Ki-67可幫助判斷病人的預(yù)后和治療方案的選擇。

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[收稿日期]2010-04-19 [修回日期]2010-06-28

編輯/張惠娟