[摘要]目的:檢測(cè)白癜風(fēng)患者血清抗黑素細(xì)胞IgG抗體的水平，以及窄譜中波紫外線(narrow band ultraviolet B，NB-UVB)治療前后血清中抗黑素細(xì)胞IgG抗體的變化，探討NB-UVB對(duì)白癜風(fēng)的治療效應(yīng)及抗黑素細(xì)胞抗體的意義。 方法:采用間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)56例白癜風(fēng)患者血清中抗黑素細(xì)胞IgG抗體。選擇16例抗黑素細(xì)胞IgG抗體陽性的進(jìn)展期患者給予窄譜中波紫外線治療，然后再檢測(cè)該抗體。結(jié)果:進(jìn)展期白癜風(fēng)患者血清抗黑素細(xì)胞IgG抗體陽性率顯著高于穩(wěn)定期患者及正常人，NB-UVB治療后進(jìn)展期白癜風(fēng)患者抗黑素細(xì)胞抗體水平明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:白癜風(fēng)患者血清中抗黑素細(xì)胞IgG抗體與疾病的活動(dòng)性有一定的關(guān)系，支持白癜風(fēng)與自身免疫有關(guān)。進(jìn)展期白癜風(fēng)患者血清中抗黑素細(xì)胞IgG抗體水平隨著治療后病情的好轉(zhuǎn)而降低，表明 NB-UVB治療白癜風(fēng)有明顯效果。

[關(guān)鍵詞]白癜風(fēng);抗黑素細(xì)胞抗體;窄譜中波紫外線

[中圖分類號(hào)]Q813.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455(2010)09-1319-03

Variation of IgG antibodies to melanocyte in sera of patients with vitiligo in progressive stage before and after NB-UVB treatment

YU Zhi-ming，LIU Hui-yu，ZHENG Shu-yun，WANG Yan-hua，CAI Li-min

(Department of Dermatology，the First Affiliated Hospital of Harbin Medical University，Harbin 150001，Heilongjiang，China)

Abstract:ObjectiveTo detect the level of IgG antibodies to melanocyte in sera of patients with vitiligo and the variation of its level before and after narrow band ultraviolet B (NB-UVB) treatment， and analyse clinical efficacy of NB-UVB treatment in vitoligo and the significance of IgG antibodies to melanocyte.MethodsIndirect immunofluorescent test was employed to measure IgG antibodies to melanocyte in sera of 56 patients with vitiligo. IgG antibodies to melanocyte were detected again in sera of 16 cases in progressive stage with positive antibodies after NB-UVB treatment.ResultsThe posotive rate of IgG antibodies to melanocyte in patients with vitiligo in progressive stage was significantly higher than patients with vitiligo in stabilization stage and the control group. The level of IgG antibodies to melanocyte was significantly lower after NB-UVB treatment than before NB-UVB treatment， with a statistical significance.ConclusionThe relationship of the antibodies and the activity of the disease supposes that vitiligo is correlated with autoimmune. IgG antibodies to melanocyte decreased accompanied by the improvement of the disease in sera of patients with vitiligo in progressive stage after NB-UVB treatment. It implied satisfied efficacy of NB-UVB treatment in vitiligo.

Key words:vitiligo; IgG antibodies to melanocyte; NB-UVB

白癜風(fēng)是一種局限性或泛發(fā)性色素脫失性皮膚病。該病病因尚不清楚，但許多研究[1-3]表明白癜風(fēng)患者血清中存在抗黑素細(xì)胞自身抗體，且其滴度與疾病的活動(dòng)性有關(guān)。窄譜中波紫外線(narrow band ultraviolet B， NB-UVB)是治療白癜風(fēng)的一種重要手段，效果較好，幾乎無副作用。我們采用間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)了56例白癜風(fēng)患者血清中抗黑素細(xì)胞IgG抗體的水平，以及16例進(jìn)展期白癜風(fēng)患者NB-UVB治療前后抗黑素細(xì)胞IgG抗體的變化，來探討NB-UVB對(duì)白癜風(fēng)發(fā)揮治療效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)及抗黑素細(xì)胞抗體在本病中的意義。

1資料和方法

1.1 臨床資料:搜集白癜風(fēng)患者血清56例，男24例，女32例，12～49歲，平均年齡23歲，病程6個(gè)月～10年，平均14.2個(gè)月。有家族史3例。皮損部位:面頸部19例，軀干部21例，四肢16例，其中進(jìn)展期40例，穩(wěn)定期16例。疾病的活動(dòng)性根據(jù)就診前3個(gè)月內(nèi)原發(fā)白斑有無擴(kuò)大、有無新皮損出現(xiàn)為準(zhǔn)。剔除有光敏史或近2個(gè)月系統(tǒng)應(yīng)用過糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑患者。20份無白癜風(fēng)及其他皮膚病的健康人血清為健康對(duì)照，所有血清凍存-70℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑:霍亂毒素(CT)、堿性成纖維細(xì)胞因子(bFGF)及RPM1640培養(yǎng)液均為GIBCO公司產(chǎn)品。FITC標(biāo)記的羊抗人IgG為上海生物制品研究所產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 黑素細(xì)胞培養(yǎng):正常人黑素細(xì)胞的培養(yǎng)參照文獻(xiàn)[4]改良而成。選用健康男性包皮環(huán)切術(shù)的皮膚，供皮者檢查無獲得性人免疫缺陷病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、衣原體及支原體感染。黑素細(xì)胞培養(yǎng)于黑素細(xì)胞培養(yǎng)液-RPM1640(含10%小牛血清，6nmol/L CT及5nmol/L bFGF)，傳代于6孔培養(yǎng)板，取第3～4代細(xì)胞用-20℃的甲醇固定5min后用于實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 間接免疫熒光法:以上述方法培養(yǎng)的正常黑素細(xì)胞為底物，56例白癜風(fēng)患者和20例健康對(duì)照者的血清為第一抗體，在培養(yǎng)黑素細(xì)胞的6孔培養(yǎng)板上分別加入白癜風(fēng)患者和健康對(duì)照者的血清(稀釋度;1∶10)，室溫孵育48h后，PBS液沖洗3次，每次5min。用FITC標(biāo)記的羊抗人IgG為第二抗體，37℃孵育30min后，PBS液沖洗3次，每次5min，吹干。熒光顯微鏡下觀察黑素細(xì)胞熒光。

1.3.3 NB-UVB治療前及治療后抗黑素細(xì)胞IgG抗體檢測(cè):對(duì)16例抗黑素細(xì)胞抗體陽性的進(jìn)展期白癜風(fēng)患者采取NB-UVB治療(波長(zhǎng)310～315nm，波峰311nm)，起始劑量0.2J/cm2，2次/周，每次遞增10%～20%，最高劑量可達(dá)3.0J/cm2。若出現(xiàn)輕度紅斑和瘙癢，維持原劑量直到癥狀消失，若出現(xiàn)疼痛性紅斑或水皰，待皮損消退后再行照射，照射劑減少10%。照射儀器采用上海西格瑪局部紫外線治療儀SS-U3B和德國Wodman全倉紫外線治療儀。治療過程中，患者以UV防護(hù)鏡保護(hù)眼睛，外生殖器以內(nèi)褲防護(hù)。然后再用上述方法檢測(cè)治療后患者血清抗黑素細(xì)胞IgG抗體。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)使用SPSS10.0軟件處理，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 抗體檢測(cè)結(jié)果:56例白癜風(fēng)患者血清中抗黑素細(xì)胞IgG抗體檢測(cè)結(jié)果見表1。熒光顯微鏡下觀察到陽性的血清，胞漿和胞核呈均勻一致的亮綠色熒光。進(jìn)展期與穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者間抗體陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.46，P<0.01);進(jìn)展期白癜風(fēng)患者與正常對(duì)照組抗體陽性率比較有顯著差異(χ2=12.46，P<0.01);而穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者與正常對(duì)照組抗體陽性率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=2.562，P>0.05)。

2.2 治療后抗體檢測(cè)結(jié)果:16例抗黑素細(xì)胞抗體陽性的進(jìn)展期白癜風(fēng)患者NB-UVB治療8～10周后，8例痊愈(白斑消退，恢復(fù)正常色素90%以上)，5例顯效(白斑縮小，色素再生面積50%以上)，3例有效(色素再生面積20%以上，無新的白斑出現(xiàn))，無效0例(治療前后無變化或皮損擴(kuò)大)，總有效率100%，治療中未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的并發(fā)癥。對(duì)此16例患者復(fù)查血清抗黑素細(xì)胞抗體，3例有效者仍陽性，其他13例轉(zhuǎn)為陰性，治療前后抗體陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

3討論

白癜風(fēng)的病因仍不清楚。目前主要有以下學(xué)說:自身免疫學(xué)說、神經(jīng)介質(zhì)學(xué)說、先天性黑素細(xì)胞缺失及遺傳因素[5-7]。早在40年前人們就發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)與一些自身免疫性疾病有關(guān)，并在病人血清中發(fā)現(xiàn)了一些自身抗體，如抗胃壁細(xì)胞抗體、抗腎上腺抗體、抗甲狀腺抗體等[8]。一些研究發(fā)現(xiàn)，白癜風(fēng)患者血清中存在特異性抗黑素細(xì)胞自身抗體，而且此抗體的水平與疾病的活動(dòng)性有密切關(guān)系，即進(jìn)展期白癜風(fēng)患者該抗體的陽性率明顯高于穩(wěn)定期及正常人[1-3]。本試驗(yàn)中對(duì)56例白癜風(fēng)患者(包括進(jìn)展期40例和穩(wěn)定期16例)抗黑素細(xì)胞IgG抗體進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期患者血清抗黑素細(xì)胞IgG抗體陽性率顯著高于穩(wěn)定期和正常對(duì)照組，并有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，此結(jié)果與以往研究結(jié)果相符，提示白癜風(fēng)與自身免疫有一定相關(guān)性。NB-UVB光療的作用機(jī)理主要是使表皮單位面積的黑色素細(xì)胞體積增大、樹狀突延長(zhǎng)、酪氨酸酶的活性加強(qiáng)以促進(jìn)皮膚黑色素形成，從而使表皮各層黑色素含量增加，皮膚變黑;另一方面通過影響免疫功能誘導(dǎo)皮膚浸潤活化的淋巴細(xì)胞凋亡，在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及變態(tài)反應(yīng)中發(fā)揮作用。目前NB-UVB的應(yīng)用非常廣泛，除白癜風(fēng)之外，還可以治療很多頑固的且原因不明的皮膚病如銀屑病、副銀屑病、玫瑰糠疹、斑禿、痤瘡以及帶狀皰疹等炎癥性皮膚病，在近年來臨床的廣泛應(yīng)用中表現(xiàn)療效良好且?guī)谉o不良副作用。本試驗(yàn)中選擇16例抗黑素細(xì)胞抗體陽性的進(jìn)展期白癜風(fēng)患者，采用NB-UVB照射治療，總有效率為100%。同時(shí)對(duì)這16例患者復(fù)查血清中抗黑素細(xì)胞抗體，其中皮損痊愈及顯效的13例均轉(zhuǎn)為陰性，抗體陽性率在治療前后有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這可能是由于NB-UVB治療后抑制了免疫反應(yīng)，使黑素細(xì)胞抗體產(chǎn)生減少，抗體陰轉(zhuǎn)，黑素細(xì)胞的破壞停止，致使患者的白斑區(qū)有正常色素再生，無新的白斑出現(xiàn)，此結(jié)果進(jìn)一步提示白癜風(fēng)與自身免疫密切相關(guān)。而療效相對(duì)較差的3例有效患者，復(fù)查血清中抗黑素細(xì)胞抗體無一例轉(zhuǎn)陰。以上結(jié)果表明，臨床治療效果與血清中抗黑素細(xì)胞抗體的變化高度相關(guān)，抗體產(chǎn)生減少則臨床上治療效果較好，反之亦然。3例療效相對(duì)較差的患者可能是由于個(gè)體差異，對(duì)NB-UVB治療不敏感，這樣的患者可能需要治療的時(shí)間更長(zhǎng)，才能達(dá)到滿意的治療效果。由此可見，抗黑素細(xì)胞抗體有利于監(jiān)測(cè)NB-UVB治療白癜風(fēng)的臨床有效性。我們還應(yīng)該考慮到，人體是一個(gè)各器官系統(tǒng)相互作用的整體，同時(shí)機(jī)體與外界環(huán)境無時(shí)無刻不在交互作用，很多疾病不是一種原因和機(jī)理可以解釋的。因此，尚需要進(jìn)一步的研究、隨訪和觀察，才能更好地揭示白癜風(fēng)與自身免疫的關(guān)系以及紫外線對(duì)人體免疫系統(tǒng)的影響，為臨床治療白癜風(fēng)等很多疾病提供理論及實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

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[收稿日期]2010-06-16 [修回日期]2010-08-20

編輯/張惠娟