李秀娟 魯 曾 黃賢剛

（日照職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品工程學(xué)院，山東 日照 276800）

牡蠣中牛磺酸含量測(cè)定方法的建立

李秀娟 魯 曾 黃賢剛

（日照職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品工程學(xué)院，山東 日照 276800）

確定分光光度法測(cè)定?；撬岷康臈l件，其最佳測(cè)定條件為：8mL 1mol/L的醋酸鈉，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%甲醛作為顯示劑，在60℃下進(jìn)行顯色反應(yīng)，顯色20min后在350nm下進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)該試驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示該方法測(cè)定?；撬岢杀镜?，干擾少，重現(xiàn)性好，為測(cè)定的最佳方法。

分光光度法；牡蠣；?；撬?/p>

牛磺酸（lyium cortex taurine）又稱牛膽堿、牛膽素，化學(xué)名2－氨基乙磺酸，結(jié)構(gòu)式為NH2CH2CH2SO3H，因從牛膽汁（bovine bile）中首次分離而得名［1］。牛磺酸具有多種生物藥物功能，對(duì)心臟、肝臟、內(nèi)分泌機(jī)能等起著一定的作用，并有促進(jìn)人體細(xì)胞代謝、調(diào)節(jié)生理功能、治療疾病的作用［2］。

目前國內(nèi)外?；撬岽蠖嗖捎没瘜W(xué)方法合成，但該方法環(huán)境污染較為嚴(yán)重；而提取天然?；撬岬墓に囯m簡單且無污染，但價(jià)格遠(yuǎn)高于化學(xué)合成的牛磺酸。因此，從海洋低值產(chǎn)品中提取?；撬峋哂休^高的經(jīng)濟(jì)、實(shí)用和環(huán)保價(jià)值［3］。目前國家標(biāo)準(zhǔn)食品中?；撬岬臏y(cè)定方法為液相色譜法，該法在應(yīng)用時(shí)，所需設(shè)備較為昂貴，成本較高。使得該提取方法的研究進(jìn)展較為緩慢。因此，急需找到一種簡便、準(zhǔn)確的?；撬釡y(cè)定方法，以促進(jìn)海洋低值產(chǎn)品中?；撬崽崛》椒ǖ难芯?。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

1.1.1 原料與試劑

牡蠣：日照水產(chǎn)品市場(chǎng)；

乙醇、乙酰丙酮、甲醛、醋酸鈉：AR，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；

?；撬針悠罚˙C）：湖州生物化學(xué)有限公司。

1.1.2 試驗(yàn)儀器

高速組織搗碎機(jī)：DS－1，上海標(biāo)本模型廠制造；

電熱恒溫水浴鍋：HH－2，龍口市先科儀器公司；

實(shí)驗(yàn)室臺(tái)式精密PH計(jì)：KE1106/KE1106B型，武漢科易科技有限公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：N－1001型，上海蘭科儀器；

紫外可見分光光度計(jì)：752型，上海光譜儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 顯色原理 ?；撬崾且环N氨基酸，本身無紫外吸收。在醋酸鈉存在下，牛磺酸與乙酰丙酮和甲醛經(jīng)過加熱反應(yīng)生成 N－取代基－2，6－二甲基－3，5－二乙酰基－1，4－二氫吡啶。該配合物顯黃色，在400nm左右有一肩峰，其吸收值與?；撬嵩谝欢舛确秶鷥?nèi)呈線性。

1.2.2 分光光度計(jì)條件的確定 分別對(duì)影響吸光度的波長、顯色溫度、顯色時(shí)間、乙酰丙酮、甲醛、醋酸鈉用量進(jìn)行確定，最終確定采用分光光度計(jì)法測(cè)定?；撬岬淖罴言囼?yàn)條件。在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，除所需確定的因素外，其他因素的試驗(yàn)條件如下：10mL 1mol/L的 醋 酸 鈉，1mL 乙 酰 丙 酮，1mL 37%甲醛作為顯示劑，在50℃下進(jìn)行顯色反應(yīng)，顯色10min后測(cè)定。

1.2.3 牡蠣中?；撬岬奶崛?采用水提法對(duì)牡蠣中的?；撬徇M(jìn)行提取，并最終通過分光光度計(jì)對(duì)其中的?；撬岷窟M(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 測(cè)定條件的確定

2.1.1 波長的確定 采用1.2.2所述方法，從340～510nm每隔10nm測(cè)量1次吸光度，結(jié)果見圖1。

圖1 吸光度與波長的關(guān)系圖Figure 1 Effect of wavelength on absorbance

由圖1可知，吸光度在350nm時(shí)達(dá)到最高，這與文獻(xiàn)［4］所采用的吸光度有所不同，這可能是由于在進(jìn)行試驗(yàn)方法的確定時(shí)未對(duì)最大吸收波長進(jìn)行確定，從而造成了最大吸收波長的偏差。

2.1.2 顯色溫度的確定 在350nm下，對(duì)不同顯色溫度下的顯色試驗(yàn)，進(jìn)行吸光度的測(cè)定，結(jié)果見圖2。

圖2 吸光度與溫度的關(guān)系圖Figure 2 Effect of temperature on absorbance

由圖2可知，溫度在60℃時(shí)，其吸光度達(dá)到最高。因此采用60℃作為其顯色溫度。

2.1.3 顯色時(shí)間的確定 在350nm下，60℃溫度下進(jìn)行顯色反應(yīng)，對(duì)不同顯色時(shí)間的吸光度進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖3。

圖3 吸光度與顯色時(shí)間關(guān)系圖Figure 3 Effect of the time of developer on absorbance

由圖3可知，吸光度在25min時(shí)達(dá)到最高，在20～40min內(nèi)無顯著差異（P＞0.1），20min與15min相比存在顯著差異（P＜0.05）。因此采用顯色時(shí)間20min后的進(jìn)行測(cè)定，并在顯色40min內(nèi)測(cè)定完畢。

2.1.4 醋酸鈉用量的確定 在350nm下，60℃溫度下加入不同量的1mol/L的醋酸鈉進(jìn)行顯色反應(yīng)，反應(yīng)至20min時(shí)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖4。

圖4 吸光度與醋酸鈉用量關(guān)系圖Figure 4 Effect of the amount of sodium acetate on absorbance

由圖4可知，醋酸鈉用量在8mL時(shí)達(dá)到最大，隨著醋酸鈉用量的加大，其吸光度反而呈下降趨勢(shì)，說明醋酸鈉對(duì)此試驗(yàn)有較大的影響。

2.1.5 乙酰丙酮用量的確定 在350nm下，60℃溫度下加入不同量的乙酰丙酮進(jìn)行顯色反應(yīng)，反應(yīng)至20min時(shí)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖5。

圖5 吸光度與乙酰丙酮用量關(guān)系圖Figure 5 Effect of the amount of acetyl acetone on absorbance

由圖5可知，乙酰丙酮用量在0.6mL時(shí)達(dá)到最高，隨著乙酰丙酮用量的加大，其吸光度反而呈下降趨勢(shì)。

2.1.6 甲醛用量的確定 在350nm下，60℃溫度下加入不同量的37%甲醛進(jìn)行顯色反應(yīng)，反應(yīng)至20min時(shí)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖6。

由圖6可知，37%甲醛用量在2mL時(shí)吸光度達(dá)到最高，隨著甲醛加入量的加大其吸光度呈下降趨勢(shì)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的確定

采用上述所確定的試驗(yàn)方法，即：8mL 1mol/L的醋酸鈉，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%的甲醛作為顯示劑，60℃下進(jìn)行顯色反應(yīng)，顯色20min后在350nm下進(jìn)行測(cè)定，其標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖7。

圖6 吸光度與甲醛用量關(guān)系圖Figure 6 Effect of the amount of formaldehyde on absorbance

圖7 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)工作曲線Figure 7 Standard working curve of taurine

由圖7可知，分光光度法測(cè)定?；撬嵩?00mg之內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為0.997 5。

2.3 牡蠣中牛磺酸測(cè)定的添加回收率試驗(yàn)

在牡蠣中精確添加一定量的?；撬針?biāo)準(zhǔn)樣品，然后采用水提法對(duì)牡蠣中的?；撬徇M(jìn)行提取，并用陽離子交換樹脂進(jìn)行純凈處理，最終得到的添加率試驗(yàn)結(jié)果見表1。

由表1可知，水提法提取的牛磺酸，用分光光度法進(jìn)行測(cè)定時(shí)其他物質(zhì)對(duì)吸光度的影響較?。辉摐y(cè)定方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好；此方法與液相色譜法相比所需設(shè)備投入較小，成本較低，為一種簡單實(shí)用的測(cè)定方法。

表1 ?；撬釡y(cè)定的添加回收率試驗(yàn)Table 1 Recovery of taurine added sample

3 結(jié)論

本試驗(yàn)確定了分光光度法測(cè)定牛磺酸含量的條件，其最佳測(cè)定條件為：8mL 1mol/L的醋酸鈉，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%甲醛作為顯示劑，在60℃下進(jìn)行顯色反應(yīng)，顯色20min后在350nm下進(jìn)行測(cè)定，該試驗(yàn)方法測(cè)定牛磺酸在200mg內(nèi)具有較好的線性相關(guān)，該方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，不失為一種簡單實(shí)用的?；撬釡y(cè)定方法。

1 Hayes K C.Myocardial failure in cats associated with low plasma taurine：A versible cardiomy pathy［J］.Science，1987（14）：237.

2 丁力，萬華印.?；撬釋?duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)理［J］.廣州醫(yī)藥，1995（1）：3～5.

3 何麗華，申曉輝.食品中?；撬釋?duì)人體的影響［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2003，30（1）：768～772.

4 楊涓，魏智清，龐偉.分光光度法測(cè)定寧夏枸杞中?；撬岷浚跩］.農(nóng)業(yè)科學(xué)研究，2005，26（2）：28～30.

The determination of taurine in ostrea rivularis by spectophotometry

LI Xiu－juan LU ZengHUANG Xian－gang

（College of Food Engineering，Rizhao polytechnic，Rizhao，Shandong276826，China）

This article determined the conditions of taurine for content spectrop－h(huán)otometer.The result showed that the amount of 1mol/L sodium acetate is 8mL，acetyl acetone is 0.6mL，37%formaldehyde is 2mL.The experiment only under 60℃ develop 20min，can obtained accurate results under 350nm wavelength.

spectmphotometer；oyster；lyium cortex taurine

10.3969 /j.issn.1003－5788.2010.05.023

李秀娟（1967－），女，日照職業(yè)技術(shù)學(xué)院副教授，碩士。E－mail：lxj818＠163.com

2010－06－01