王彥軍,孫 淼,王宏鈞,侯忠勇,黃 翌,吳 艷,余 多,李金彩,楊飛躍,陳福勇,曹 紅

(中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院,北京海淀100193)

1868年禽白血病被首次報道以來已有140多年,由于該病可造成較大的經(jīng)濟損失而日益為世人所重視[1]。近年來,中國大陸各品系雞種的發(fā)展受到禽白血病的制約。我國政府有關部門正著手制定雞白血病的檢測技術、凈化措施示范及相關標準。

本試驗基于研究中國地方雞種在自然條件下雞白血病流行狀況,通過了解禽白血病(AL)在該品種雞體內(nèi)的抗原、抗體消長規(guī)律以期為制定凈化措施提供試驗數(shù)據(jù)。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測病毒的抗原及相應的抗體,并輔以病毒分離等方法進行復核[2]。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 地方原種雞,共115只。

1.2 采樣日齡 1、7、14、21、28、38、58、68、88 、98、108 、120 、130 、140 、150 、160 、170 、180 、190 、200 、210 、220、260、300 日齡 。

1.3 采集樣本 泄殖腔拭子、血清、無菌抗凝血漿。

1.4 ALV p27抗原檢測試劑盒 購自美國IDEXX公司。

1.5 ALV A、B亞型抗體檢測試劑盒 購自美國IDEXX公司。

1.6 A LV J亞型抗體檢測試劑盒 購自美國IDEXX公司。

1.7 抗原檢測 采集的泄殖腔拭子,經(jīng)-30℃凍融1次后,按照IDEXX公司A LV p27抗原檢測試劑盒操作說明進行試驗。

1.8 抗體檢測 采集的血清,按照IDEXX公司ALV A、B亞型和J亞型抗體檢測試劑盒操作說明進行試驗。

1.9 病毒分離 采集的無菌抗凝血,分離血漿后按照常規(guī)方法,通過DF-1細胞培養(yǎng)進行病毒分離,用試劑盒鑒定。

2 結果

2.1 全群雞只在試驗階段均未發(fā)現(xiàn)由于感染A LV而導致腫瘤死亡病例。至試驗結束時,由于正常死淘等因素,共剩余 89只,其中公雞 54只,母雞35只。

2.2 全群雞只在300日齡內(nèi)的A LV p27抗原陽性率變化情況如圖1所示。

圖1 ALV p27抗原陽性率變化

由圖1中可以看出,全群雞在監(jiān)測的300日齡內(nèi)均有ALV感染發(fā)生。其中ALV p27抗原檢出率在170日齡時達到最高峰,為32.18%;p27抗原檢出率在7日齡時達到最低值,為2.11%。其他日齡呈現(xiàn)不規(guī)律的陽性率變化。

2.3 全群雞只在300日齡內(nèi)的ALV p27抗原陽性數(shù)隨日齡增長情況如圖2所示。

圖2 新增p27抗原陽性個數(shù)趨勢

由圖2中可以看到,A LV p27抗原陽性雞數(shù)隨日齡的增長在不斷增加。在98、140日齡和200日齡達到一個相對的平穩(wěn)期。

2.4 全群雞只在300日齡內(nèi)的ALV A、B亞型抗體陽性率變化情況如圖3所示。

圖3 ALV A、B亞型抗體陽性率變化

由圖3可以看到,全群雞從1日齡到28日齡并未檢測到ALV A、B亞型抗體,從38日齡到300日齡逐漸出現(xiàn)ALV A、B亞型抗體陽性雞只,陽性率在10%以下。在260日齡時該陽性率達到最高峰,為30.86%。

2.5 ALV J亞型抗體陽性率變化情況,全群雞只在監(jiān)測的300日齡內(nèi)各日齡段均未檢測出A LV J亞型陽性雞只。

2.6 260 日齡時對全群雞只進行病毒分離結果,對全群雞只無菌采集抗凝血,分離血漿,接種DF-1細胞進行病毒分離。病毒分離率為29.49%(23/78),相比棉拭子p27檢出率20%(16/80)要高。棉拭子p27檢出陽性數(shù)和血漿病毒分離檢出陽性數(shù)的符合率為79.49%(62/78)。

3 討論

3.1 本試驗主要通過酶聯(lián)免疫吸附試驗,并輔以病毒分離的方法,系統(tǒng)地對野外環(huán)境中的地方雞種ALV的感染和抗體產(chǎn)生情況進行了調(diào)查研究。所得試驗結果對于我們了解地方雞種A LV的自然感染率提供了寶貴數(shù)據(jù),同時也為凈化方案的確定奠定了理論基礎。

3.2 通過試驗可以看出,地方雞原種雞在監(jiān)測的300日齡內(nèi)都有 ALV感染發(fā)生,但是并未檢出ALV J亞型抗體,說明該雞種沒有感染 J亞型ALV。1日齡出現(xiàn)較高的陽性率,隨后7日齡回落到很低的水平。通過對不同雞種1日齡至50日齡的抗原監(jiān)測看出,此現(xiàn)象是普遍存在的,可能是由于一些非特異性因素的影響造成假陽性結果,使得1日齡陽性率偏高。全群雞只在監(jiān)測過程中呈現(xiàn)不規(guī)律的排毒,在170日齡時其p27抗原檢出率達到最高值,為32.18%?？乖栃噪u只數(shù)隨著日齡的增長不斷增加,在98、140日齡和200日齡達到一個相對的平穩(wěn)期。試驗中公雞的 p27抗原檢出率(57.41%)略低于母雞的p27抗原檢出率(69.44%)?？乖臋z出與抗體產(chǎn)生情況沒有相關性。試驗中我們還發(fā)現(xiàn),對于某一感染雞只,其排毒呈現(xiàn)明顯的間歇性,而具體排毒時間點可能與感染日齡、感染方式、病原特性、宿主特性(包括種屬、健康狀態(tài)等)等因素有關。

3.3 目前,使用泄殖腔拭子來檢測p27抗原是國內(nèi)檢測ALV感染的常用方法。但此方法存在一定的非特異性,并不能排除內(nèi)源性病毒的干擾,而內(nèi)源性病毒并不會對雞的生產(chǎn)性能造成危害。因此,病毒分離仍然是判斷雞群是否感染ALV的標準。本試驗中,在260日齡時對全群雞進行病毒分離,結果病毒分離陽性率為29.49%。通過比較可以看到,其陽性率比棉拭子檢出率要高,但兩者符合率并不高,僅為79.49%。

3.4 最近,國內(nèi)A LV感染頻頻發(fā)生,造成了嚴重的經(jīng)濟損失。采取必要的措施對該病進行控制與清除已經(jīng)勢在必行。由于該病的特殊性,必須采取凈化的方法來根除本病。20世紀90年代初,國外已經(jīng)開始進行雞白血病的凈化,并取得了成功。如果對全雞群進行AL的凈化,采用病毒分離的方法固然可靠,但成本較高,耗時費力,且需要具有一定試驗操作技術的人員;若采取棉拭子檢測方法,雖然簡單快捷,但由于非特異性因素的影響會造成誤判[2]。凈化方法的選擇,以及幾種方法的聯(lián)合運用,對于取得較好的凈化效果具有重要的意義。

[1] Sai Y M.禽病學[M].蘇敬良,高福,索勛,主譯.11版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2005.

[2] 張小桃,賴漢漳,曹偉勝.禽白血病病毒檢測方法研究進展[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2009(4)：4-6.

[3] 孫淼,李金彩,郭振華,等.J亞型禽白血病病毒的分離與鑒定[J].中國獸醫(yī)雜志,2009,45(10)：46-48.