徐建國(guó)胡青平王迎籽田呈瑞羅季陽

(山西師范大學(xué)食品科學(xué)與工程系1,臨汾 041004)

(陜西師范大學(xué)食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院2,西安 710062)

堿溶酸沉法提取桑椹籽蛋白質(zhì)的工藝優(yōu)化

徐建國(guó)1胡青平1王迎籽1田呈瑞2羅季陽2

(山西師范大學(xué)食品科學(xué)與工程系1,臨汾 041004)

(陜西師范大學(xué)食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院2,西安 710062)

采用單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)、方差分析和多重比較方法,研究了不同因素對(duì)桑椹籽蛋白質(zhì)提取的影響,確定了堿溶酸沉法提取桑椹籽蛋白質(zhì)的最佳工藝參數(shù)。結(jié)果表明,桑椹籽中蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) (p I)為4.3;影響桑椹籽蛋白質(zhì)得率的主次因素依次為料液比(g/mL)、提取時(shí)間、NaOH溶液濃度及提取溫度;堿溶酸沉法提取桑椹籽蛋白質(zhì)的最佳工藝參數(shù)為:NaOH溶液濃度 0.14 mol/L,料液比 1∶30,提取溫度 40℃,提取時(shí)間 2.0 h。在此條件下,桑椹籽中蛋白質(zhì)的提取率可達(dá) 25.37%。

桑椹 蛋白質(zhì) 堿溶酸沉 優(yōu)化

桑椹 (Mulberry)俗稱桑棗、桑果、桑實(shí)、桑子,為桑科桑屬植物桑(M orus albaL.)的成熟聚花果,全國(guó)大部分地區(qū)均產(chǎn),主產(chǎn)江蘇、浙江、湖南、四川、湖北等地。桑椹營(yíng)養(yǎng)成分豐富,具有滋陰養(yǎng)血、安魂鎮(zhèn)神等功效[1-3],是我國(guó)第一批公布的“既是食品又是藥品”品種之一[4]。其種子中也含有大量的脂肪、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分[5-6]。因此,桑椹在食品和藥品上的應(yīng)用較為廣泛。

目前,在食品工業(yè)中,桑椹主要用于榨汁,制作各種桑椹飲料,而榨汁后的桑椹籽被白白廢棄,不但浪費(fèi)資源,而且造成了環(huán)境污染。因此,研究桑椹籽中蛋白質(zhì)的提取工藝,可為桑椹資源的綜合開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及試劑

桑椹籽由陜西安康桑椹榨汁廠提供,50℃干燥,粉碎 40目備用;牛血清蛋白:國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;考馬斯亮藍(lán) G-250:天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心其他化學(xué)試劑均為分析純或化學(xué)純。

1.2 主要儀器與設(shè)備

VAP10全自動(dòng)凱氏定氮儀:德國(guó) Gerhardt公司; 3110型紫外分光光度計(jì):日本日立公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52AA:上海亞榮生化儀器廠;TSHZ-2A臺(tái)式水浴恒溫振蕩器:上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 蛋白質(zhì)提取的工藝流程[7]

桑椹籽→研磨→加石油醚脫脂→濾渣→自然風(fēng)干→加堿浸提→過濾、離心→蛋白質(zhì)提取液→酸沉→沉淀水洗、中和→干燥→粗蛋白質(zhì)

1.3.2 主要成分分析及蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

水分、總灰分、粗脂肪、膳食纖維及碳水化合物的測(cè)定采用國(guó)標(biāo)方法測(cè)定;桑椹籽中總蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用凱氏定氮儀測(cè)定;桑椹籽中蛋白質(zhì)提取過程中蛋白質(zhì)測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)染色法[8],以牛血清蛋白為對(duì)照品,建立回歸方程。求得回歸方程為

y=74.61x+1.05,R2=0.993 3

式中:y為蛋白質(zhì)質(zhì)量/μg;x表示吸光度值。

桑椹籽中蛋白質(zhì)的提取率 =蛋白質(zhì)提取量/蛋白質(zhì)總量 ×100%

1.3.3 桑椹籽中蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定

桑椹籽蛋白質(zhì)等電點(diǎn)采用比色法測(cè)定[9-10]。測(cè)定的桑椹籽中蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)為 4.3。

1.3.4 桑椹籽中蛋白質(zhì)提取的單因素試驗(yàn)

稱取適量的桑椹籽渣置于錐形瓶中,加入堿液,密封浸提。浸提完畢后抽濾,收集濾液。以堿液作空白,在波長(zhǎng) 595 nm處測(cè)定提取液的吸光度值。重復(fù)三次取其平均值并記錄結(jié)果,計(jì)算蛋白質(zhì)含量。規(guī)定堿液濃度、料液比、提取時(shí)間及提取溫度,分別研究各提取條件對(duì)桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率的影響。

1.3.5 桑椹籽中蛋白質(zhì)提取的正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素的試驗(yàn)結(jié)果,選取 L16(45)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn),并進(jìn)行極差分析、方差分析和多重比較確定最佳浸提條件。

1.4 分析方法

利用統(tǒng)計(jì)分析軟件 DPS v3.01專業(yè)版進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì),并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑椹籽原料的主要成分

經(jīng)測(cè)定,桑椹籽的主要成分為水分 4.0%、粗蛋白 28.7%、粗脂肪 31.4%、膳食纖維 25.6%、碳水化合物 6.4%、灰分3.8%。

2.2 桑椹籽蛋白質(zhì)提取的單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 NaOH濃度對(duì)蛋白質(zhì)提取率的影響

NaOH濃度對(duì)桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率的影響結(jié)果見圖 1。由圖 1可知,NaOH濃度對(duì)桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率的影響較為明顯,隨著NaOH濃度的增加,蛋白質(zhì)提取率增加。當(dāng) NaOH濃度達(dá)到 0.16 mol/L時(shí),桑椹籽蛋白質(zhì)提取率達(dá) 17.87%;濃度增加為 0. 18 mol/L時(shí),提取率為 18.12%;此后再增加 NaOH濃度,蛋白質(zhì)提取量呈下降趨勢(shì)。因此,NaOH濃度宜在 0.16～0.18 mol/L之間。

圖1 堿液濃度對(duì)提取率的影響

2.2.2 料液比對(duì)蛋白質(zhì)提取率的影響

料液比對(duì)桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率的影響結(jié)果見圖 2。由圖 2可知,料液比對(duì)蛋白質(zhì)的提取率的影響較為明顯,隨料液比的增加而提高。高的料液比可降低體系的黏度,增大濃度梯度,加快傳質(zhì)過程,因而提取率高;但料液比過高,蛋白質(zhì)提取率并沒有明顯增加,反而增加了后處理的負(fù)擔(dān),因此初步確定料液比為 1∶30。

圖2 料液比對(duì)提取率的影響

2.2.3 提取時(shí)間對(duì)蛋白質(zhì)提取率的影響

不同提取時(shí)間對(duì)桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率的影響結(jié)果見圖 3。由圖 3可知,隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率提高較快,當(dāng)提取時(shí)間為 2.0 h時(shí),蛋白質(zhì)提取率基本達(dá)到最高,此后再延長(zhǎng)提取時(shí)間,蛋白質(zhì)提取率并沒有明顯提高。從縮短生產(chǎn)周期考慮,初步確定提取時(shí)間 2.0 h。

圖3 提取時(shí)間對(duì)提取率的影響

2.2.4 提取溫度對(duì)蛋白質(zhì)提取率的影響

提取溫度對(duì)桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率的影響結(jié)果見圖 4。由圖 4可知,隨著溫度的升高,蛋白質(zhì)提取率緩慢增加。當(dāng)提取溫度為 60℃時(shí),蛋白質(zhì)提取率最高為 19.27%,當(dāng)提取溫度高于 60℃時(shí),蛋白質(zhì)提取率明顯降低,原因可能是高溫導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。因此初步確定提取溫度為 60℃。

圖4 提取溫度對(duì)提取率的影響

2.3 堿溶法提取桑椹籽蛋白質(zhì)的正交試驗(yàn)

2.3.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)單因素的試驗(yàn)結(jié)果,選取 L16(45)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見表 1。

表 1的結(jié)果表明,各因素對(duì)桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率的影響程度依次為B>C>A>D,即依次為料液比、提取時(shí)間、NaOH濃度、提取溫度。綜合各因素的k值和直接比較,A3B3C3D2為最佳提取條件。

表1 正交試驗(yàn)結(jié)果

2.3.2 正交試驗(yàn)方差分析和多重比較結(jié)果

由表 2可知,因素B、C有顯著性差異,說明料液比和提取時(shí)間對(duì)桑椹籽中蛋白質(zhì)的提取率有很大的影響;因素A、D均無顯著性差異,說明NaOH濃度、提取溫度在正交設(shè)計(jì)的四水平內(nèi)對(duì)蛋白質(zhì)的提取率無顯著性影響。為了進(jìn)一步考察顯著因素不同水平間的差異,采用新復(fù)極差法分別對(duì)因素 B、C進(jìn)行多重比較,多重比較用 SSR及LSR值見表 3,比較結(jié)果見表 4。由表 4可知,B3水平和 C3水平為顯著水平,因此因素B、C的水平只能選擇B3和 C3水平,因素A、D因無顯著性差異,其水平可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇。從經(jīng)濟(jì)角度考慮,選擇 A1、D1較為合適。因此,最后確定提取桑椹籽中蛋白質(zhì)的最佳工藝參數(shù)為A1B3C3D1,即采用 0.14 mol/LNaOH溶液、料液比 1∶30、40℃條件下提取 2.0 h,即可達(dá)到最佳提取效果,在此條件下重復(fù)提取桑椹籽蛋白質(zhì) 3次,測(cè)得平均提取率為 25.37%。

表2 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

表3 多重比較用 SSR及LSR值

表4 B、C因素各水平均值多重比較結(jié)果

2.4 桑椹籽蛋白的主要成分

桑椹籽脫脂后,經(jīng)堿溶酸沉、真空凍干后可獲得桑椹籽蛋白,經(jīng)測(cè)定其主要成分為:水分 6.8%、粗蛋白 79.2%、粗脂肪 3.9%、膳食纖維 2.3%、碳水化合物2.5%、灰分 5.2%。

3 結(jié)論

3.1 堿溶酸沉法提取的桑椹籽蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)為4.3,即 p I=4.3。

3.2 堿溶酸沉法提取工藝中,影響桑椹籽中蛋白質(zhì)提取率的因素影響程度由大到小依次為料液比、提取時(shí)間、NaOH溶液濃度、提取溫度,其中料液比和提取時(shí)間對(duì)桑椹籽蛋白質(zhì)提取率的影響顯著,NaOH溶液濃度和提取溫度對(duì)桑椹籽蛋白質(zhì)提取率的影響不顯著。

3.3 堿溶酸沉法提取桑椹籽中蛋白質(zhì)的最佳工藝參數(shù)為提取劑為 0.14 mol/L NaOH溶液、料液比1∶30,在 40℃條件下提取時(shí)間 2.0 h。在此條件下,桑椹籽中蛋白質(zhì)的提取率可達(dá) 25.37%。

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Optimization Extracting Technology of Protein inMulberry Seeds byAlkaliSolution And AcidIsolation

Xu Jianguo1Hu Qingping1Wang Yingzi1Tian Chengrui2Luo Jiyang2
(Departerment of Food Science and Engineering,ShanxiNormalUniversity1,Linfen 041004)
(College of Food Engineering and Nutritional Science,ShaanxiNo rmalUniversity2,Xi′an 710062)

For opti mizing the conditions for extracting protein in mulberry seedswith alkali-solution and acid -isolation,single factor tests,orthogonal experimental design,variance analyse and multiple comparison were applied to study the effects of different factors and optimize the parameters.Results:The p Iof the protein in mulberry seeds is 4.3.The four affecting factors for protein yield rank from strong to weak as material/solvent ratio(g/ml),extraction time,NaOH concentration,and extraction temperature.The determined optimal extraction conditions are NaOH con2 centration 0.14 mol/L,material/solvent ratio 1∶30,extracting time 2.0 h and extraction temperature 40℃.The yield of protein under the opti mal conditions is 25.37%

mulberry seeds,protein,alkali solution and acid isolation,optimization

TS202.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1003-0174(2010)06-0098-04

教育部重點(diǎn)項(xiàng)目 (00118),山西師范大學(xué)自然基金項(xiàng)目(YZ08020)

2009-06-30

徐建國(guó),男,1971年出生,副教授,食品科學(xué)