1 一般資料與方法

1.1 對(duì)象 本組共32例，其中，男18例，女14例，年齡20～60歲。全部為混合痔嵌頓患者。32例均行手術(shù)治療，分別于術(shù)前、術(shù)后2周抽靜脈血5ml肝素鈉抗凝。

1.2 檢測(cè)目的 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周靜脈血中細(xì)胞表面分子標(biāo)記為CD3+和CD8-的T淋巴細(xì)胞中的IL-4 和IFN-γ含量，從而判斷外周血中的Th1、Th2漂移現(xiàn)象。

1.3 檢測(cè)方法 主要儀器：流式細(xì)胞儀Epics XL·MCL，美國(guó)BECKMAN COULTER公司，低溫高速離心機(jī)Contifuge Stratos，德國(guó)Heraeus公司，旋渦混合器XW－80A江蘇省海門市麒麟醫(yī)用儀器廠。

試劑：PMA、Ionomycin、Monensin美國(guó)Sigma公司出品，抗體和破膜劑。以下均為法國(guó)Immunotech公司出品：細(xì)胞表面標(biāo)記抗體：CD3-Pc5，CD8-FITC；細(xì)胞內(nèi)因子抗體：IL-4-PE，IFN-γ-PE；同型對(duì)照：Rat IgG1-PE(對(duì)應(yīng)于IL-4-PE)，Mouse IgG1-PE(對(duì)應(yīng)于IFN-γ-PE)；破膜劑：IntraPrep破膜劑。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 晨起空腹血5ml用肝素納抗凝。取一只試管，加入200μl血液和200μlRPMI1630。加入10μlPMA工作液＋8μl50μg/ml Ionomycin工作液＋6.8μl 0.1mg/mlMonensin工作液，混勻。置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱4～6小時(shí)。取出混勻，加入20μlCD3-PC5和20ulCD8-FITC，室溫避光孵育15分鐘。分成4管，每管加入100μl已染色的全血，編號(hào)為A1,A2,A3,A3。每管中加入100μl IntraPrep中的Reagebt A（固定液），室溫，避光孵育15分鐘。每管中再加入3mlPBS，1500rpm離心5分鐘，棄除上清。再每管中加入100μlIntraPrep中的Reagent B（破膜和溶血液），同時(shí)各管中按附表1加入相應(yīng)的抗體各10μl，室溫，避光孵育15分鐘。每管中加入3mlPBS，1500rpm離心5分鐘，棄除上清。取0.5ml PBS重懸細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果

手術(shù)前后的外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)PAM誘導(dǎo)后CD3+/CD8-/IFN-γ+和CD3+/CD8-/IL-4+流式細(xì)胞分析結(jié)果。見附表。

經(jīng)Excel平均值的成對(duì)雙樣本分析，對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩檢驗(yàn)。手術(shù)前與手術(shù)后各組數(shù)據(jù)比較均有非常顯著性差異（P＜0.001），手術(shù)前組患者的CD3+IL-4+含量高于手術(shù)前組的CD3+IFN-γ+（P＜0.05），手術(shù)前組患者的CD8+IL-4+含量也高于手術(shù)前組的CD8+IFN-γ+（P＜0.05），而手術(shù)后各組數(shù)據(jù)比較沒有顯著性差異（P＞0.05）。

附表1 試管抗體對(duì)照

附表2 各組PBMC中CD3+/CD8-lL-4+和CD3+/CD8-lFN-γ+的含量（ng/l）比較 （）

附表2 各組PBMC中CD3+/CD8-lL-4+和CD3+/CD8-lFN-γ+的含量（ng/l）比較 （）

3 討論

關(guān)于痔瘡病因的解釋，目前大都只停留在解剖學(xué)的層面上。

臨床發(fā)現(xiàn)，各期的痔瘡病人，都有靜止期和發(fā)作期。只有發(fā)作期的病人會(huì)有出血或疼痛出現(xiàn)。發(fā)作期的痔瘡表現(xiàn)為充血水腫、血栓形成，呈現(xiàn)急性炎癥反應(yīng)，但細(xì)菌感染的跡象不明顯，極少出現(xiàn)化膿性結(jié)局。

痔瘡發(fā)作常常有“情志”方面的病因，如情緒激動(dòng)特別是大怒，痔瘡出現(xiàn)的炎癥反應(yīng)無(wú)法完全用局部“括約肌痙攣”等單一因素解釋。全身性因素應(yīng)該在痔瘡發(fā)作的過(guò)程中扮演重要角色。

人體各個(gè)部位的炎癥反應(yīng)，都與免疫反應(yīng)有關(guān)。免疫反應(yīng)不外乎體液免疫和細(xì)胞免疫。輔助T細(xì)胞Th1/Th2功能上的劃分大大提高了人們對(duì)免疫反應(yīng)極化的認(rèn)識(shí)。近年的研究揭示，體內(nèi)的T輔助細(xì)胞（嚴(yán)格意義上是Th0細(xì)胞）在各種生理與病理?xiàng)l件下可分化為Th1和Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-α和IFN-γ，最特異分泌的細(xì)胞因子是IFN-γ+，Th2細(xì)胞則主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10,最特異分泌的細(xì)胞因子IL4 +，IL-4和IFN-γ常互相排斥。Th1細(xì)胞是細(xì)胞毒性T細(xì)胞，活化I型免疫效應(yīng)在抗病毒感染和細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染的免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用。而Th2細(xì)胞活化II型免疫反應(yīng)與感染的持續(xù)進(jìn)展和慢性化有關(guān)，對(duì)微生物感染具有負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。Th1細(xì)胞可抑制Th2細(xì)胞的作用，反之亦然，外源性IL-4可使T前體細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化，而IFN-γ則可抑制其向Th2細(xì)胞分化。

本文檢測(cè)表明，嵌頓痔病人發(fā)病時(shí)血中T細(xì)胞免疫系統(tǒng)被激活，外周血中Th2細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)，Th2型反應(yīng)模式處于優(yōu)勢(shì)狀態(tài)。推測(cè)嵌頓痔的發(fā)病是在 Th2優(yōu)勢(shì)反應(yīng)模式狀態(tài)下，出現(xiàn)的血管擴(kuò)張明顯、血管通透性顯著增強(qiáng)等。這種血流變學(xué)動(dòng)態(tài)變化使白細(xì)胞外滲閾值明顯降低。這樣的結(jié)果首先是出現(xiàn)水腫，繼而是疼痛和括約肌痙攣，導(dǎo)致靜脈淋巴的回流受阻，從而引發(fā)更嚴(yán)重的水腫及血管破裂出血、血栓形成。

然而，由于體內(nèi)細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)系統(tǒng)非常復(fù)雜，不同的細(xì)胞因子可以產(chǎn)生相同的作用，而同一個(gè)細(xì)胞因子在不同的細(xì)胞和不同條件下亦能產(chǎn)生相反作用。只測(cè)定一種細(xì)胞因子或研究一個(gè)環(huán)節(jié)，而推測(cè)整個(gè)過(guò)程或整個(gè)網(wǎng)絡(luò)作用的結(jié)論，很可能會(huì)出現(xiàn)偏差。因此，對(duì)于Th1和Th2細(xì)胞免疫功能對(duì)血栓性痔的影響，必須充分認(rèn)識(shí)細(xì)胞因子作用的多樣性和復(fù)雜性，全面分析和綜合考慮。