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        HPLC法測定木豆葉中牡荊苷的含量

        2010-10-29 06:37:52
        首都食品與醫(yī)藥 2010年2期

        廣州市藥品檢驗(yàn)所三分所(510700)肖佳尚

        木豆葉為豆科植物木豆Cajanus cajan(L.)Millsp.的干燥葉,具有清熱解毒、消腫止痛功效,用于小兒水痘、癰腫瘡癤[1]。木豆葉主要含以牡荊苷為主的黃酮類等有效成分[2]。本試驗(yàn)采用HPLC法測定木豆葉中牡荊苷的含量,以控制其藥材的質(zhì)量,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下:

        1 儀器與試藥

        高效液相色譜儀(HP1050),紫外檢測器;甲醇為色譜純,其他試劑均為分析純;牡荊苷對照品(購自Zigma公司,經(jīng)面積歸一化法處理含量為92.6%);木豆葉藥材購自廣州致信藥業(yè)中藥飲片廠。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件 色譜柱:Nucleodur C18Gravity(250mm×4.6mm,5μm);流動相采用梯度洗脫:0min時甲醇-1%冰醋酸(30:70);20min時甲醇-1%冰醋酸(40:60);流速:1ml/min;檢測波長:339nm;在上述條件下牡荊苷與其他成分分離度良好。

        2.2 對照品溶液的制備 精密稱取牡荊苷對照品2.92mg,置100ml量瓶中,用50%甲醇溶解并稀釋至刻度。

        2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取上述對照品溶液4、8、12、16、20μl注入高效液相色譜儀中,按上述色譜條件測定,測定結(jié)果以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),以色譜峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為:Y=2404.628X-44.552,r=0.9999,線性范圍為0.108~0.541μg。

        2.4 供試品溶液的制備 取本品粉末2.5g,精密稱定,精密加入50%甲醇25ml,超聲處理30 min,用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,濾過,取續(xù)濾液,即得。

        2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對照品溶液10μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,峰面積積分值的RSD為0.52%。

        2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對同一供試品溶液每隔2h測定一次,結(jié)果牡荊苷在12h內(nèi)較穩(wěn)定。

        2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批樣品5份,按含量測定項(xiàng)平行試驗(yàn),測得樣品中牡荊苷的含量平均為0.315mg/g,RSD為2.74%。

        2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品約1.25g,精密加入牡荊苷對照品溶液(0.0792mg/ml)5ml,按供試品溶液的制備及樣品測定項(xiàng)操作,結(jié)果見附表1。

        2.9 樣品測定 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl,分別注入液相色譜儀中,測定峰面積,按外標(biāo)法計(jì)算含量,結(jié)果見附表2。

        附表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

        附表2 樣品含量測定結(jié)果(mg/g,n=2)

        3 討論

        牡荊苷的50%甲醇液經(jīng)紫外掃描在268nm和339nm波長處有最大吸收,339nm波長的響應(yīng)值大于268nm,故選擇339nm作為檢測波長。試驗(yàn)用甲醇和50%甲醇超聲提取效果好。經(jīng)超聲處理20、30、40、50min試驗(yàn),結(jié)果超聲30min即可提取完全,提取時間選擇30min。經(jīng)試驗(yàn),采用本文的梯度洗脫可將牡荊苷與其他黃酮類成分較好地分離。

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