潘 蕾，王 晶，王 娟，何俊霞，李建美，吉日木圖,*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 乳品生物技術(shù)與工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古駱駝保護(hù)學(xué)會(huì)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)

駝乳對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠的影響

潘 蕾1，王 晶2，王 娟2，何俊霞2，李建美2，吉日木圖1,*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 乳品生物技術(shù)與工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古駱駝保護(hù)學(xué)會(huì)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)

目的：探討駝乳對(duì)腺嘌呤所致大鼠慢性腎功能衰竭的作用。方法：采用腺嘌呤復(fù)制慢性腎功能衰竭大鼠模型，以駝乳作為受試物進(jìn)行灌胃干預(yù)。通過檢測(cè)大鼠體質(zhì)量、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、血清總蛋白(TP)、鈣(Ca)、磷(P)、24h尿量、尿蛋白(UP)及腎臟病理組織學(xué)變化，分析駝乳對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠的影響。結(jié)果：駝乳可降低大鼠Scr、BUN水平，減緩UP，調(diào)節(jié)Ca、P的含量，提高SOD、TP水平，具有保護(hù)腎功能的作用。結(jié)論：駝乳對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠的病情起到緩解作用。

駝乳；慢性腎功能衰竭；腺嘌呤

Abstract：Purpose:To figure out whether camel milk has the ability to alleviate adenine-induced chronic renal failure in rats or not. Methods:Rats with adenine-induced chronic renal failure received intragastric administration of camel milk, distilled water or Niaoduqing once a day for 28 consecutive days. As a normal control, normal rats were given distilled water. During this time, the average body weights of all the rats were measured periodically and they were subjected to determination of some blood and urine biochemical parameters, kidney coefficient calculation and renal histopathological observations at the end of administration. Results:Compared with distilled water, camel milk could reduce serum creatinine, blood urea nitrogen and urine 24-hour protein levels, regulate Ca and P levels and increase SOD and TP levels in rats with chronic renal failure after 28-day administration. Conclusion:camel milk has remarkable alleviating effect on chronic renal failure in rats.

Key words：camel milk；chronic renal failure；adenine

慢性腎功能衰竭(CRF)是多種慢性腎臟病發(fā)展的最終結(jié)局，臨床表現(xiàn)復(fù)雜，治療困難，死亡率極高[1]。透析和腎移植療法的問世已顯著提高晚期腎功能衰竭病人的生存率和生活質(zhì)量。但是到目前為止，仍存在著一些薄弱環(huán)節(jié)，如透析治療并發(fā)癥多，技術(shù)復(fù)雜；而換腎則存在異體腎來源、成活率、經(jīng)濟(jì)承受能力等問題。這兩種方法費(fèi)用高、危險(xiǎn)性大、成功率低。能夠接受上述治療的患者在發(fā)病人群中所占比例小，大多數(shù)CRF患者不得不尋求低廉的治療方式，非透析療法最終將成為我國CRF廣泛采用的治療措施[2]。長期以來，我國應(yīng)用中西醫(yī)結(jié)合非透析療法以緩解CRF癥狀及延緩其病程一直受到重視，但藥物治療會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生毒副作用，因此尋找一種可以緩解病程且適合CRF病人長期服用的安全食療法具有重要意義。

近年來，國內(nèi)外對(duì)飲食療法延緩CRF病程的研究成為熱點(diǎn)，如豆類及其制品中的大豆蛋白能改變?cè)缙诼阅I臟疾病進(jìn)程[3]。蒙古國貝格爾駝乳腎病療養(yǎng)院是唯一用駝乳針對(duì)腎病患者進(jìn)行治療的場(chǎng)所。蒙古國科學(xué)院對(duì)當(dāng)?shù)赝寥?、植被、空氣進(jìn)行系統(tǒng)研究發(fā)現(xiàn)，這里的地理?xiàng)l件與其他地區(qū)無明顯差異，同時(shí)蒙古國醫(yī)學(xué)院的研究證明駝乳與腎病的治愈率有直接的關(guān)系[4]。但有關(guān)駝乳對(duì)CRF的影響未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以駝乳為研究對(duì)象，通過建立CRF大鼠病理模型，探討駝乳對(duì)CRF病程的影響，為駝乳緩解CRF病情的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

健康Wistar雄性大鼠50只，SPF級(jí)，體質(zhì)量為(240±20)g，購自內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心。室溫(18±2)℃，濕度50%～60%，通風(fēng)良好，自由進(jìn)食飲水，飼料為全價(jià)顆粒。

駝乳：同一批采自新疆牧區(qū)；腺嘌呤(產(chǎn)品批號(hào)AD0013) 上海生工生物工程有限公司；尿毒清顆粒(產(chǎn)品批號(hào)20090615) 康巨藥業(yè)(內(nèi)蒙古)有限責(zé)任公司；NO、SOD、TP、Ca、P、UP試劑盒(產(chǎn)品批號(hào)20090918)南京建成生物工程研究所。

灌胃器、注射器、常規(guī)解剖器械、載玻片、BT-244半自動(dòng)生化分析儀、UV-1700分光光度計(jì)、切片機(jī)、蠟塊包埋機(jī)、顯微成像系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組、造模及給藥

將50只4周齡的Wistar雄性大鼠適應(yīng)1周后，標(biāo)記稱質(zhì)量，隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組、病理模型組、尿毒清干預(yù)組、駝乳高劑量組和駝乳低劑量組，每組10只。每日上午9點(diǎn)造模，除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠給予質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的腺嘌呤混懸液2mL灌胃給藥，正常對(duì)照組給予生理鹽水8mL/kg bw·d灌胃。同時(shí)下午15點(diǎn)灌胃駝乳，駝乳高劑量組灌予駝乳10 mL/kg bw·d、駝乳低劑量組灌予駝乳5mL/kg bw·d、尿毒清干預(yù)組灌予質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%尿毒清溶液10mL/kg·d、正常對(duì)照組和病理模型組分別灌予蒸餾水8mL/kg bw·d。每日1次，共28d。

1.2.2 觀察指標(biāo)

觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間大鼠的體質(zhì)量、神態(tài)、毛發(fā)及活動(dòng)的變化情況。于造模第7、14、21天至第28天結(jié)束，稱量體質(zhì)量，將大鼠置于代謝籠中留取24h尿液，測(cè)定尿量和尿蛋白，第28天心臟采血留樣后，斷頸處死，解剖取雙腎稱質(zhì)量、觀察其外觀并制作切片。

1.2.3 檢測(cè)方法

血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血清總蛋白(TP)：采用BT-244意大利半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定；24h尿蛋白(UP)、NO、SOD、Ca和P：依照試劑盒說明書檢測(cè)；腎臟切片：10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡檢查。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS for Windows 16.00統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(±s)”的形式表示，多組間比較采用方差分析。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 駱駝乳對(duì)CRF大鼠一般情況的影響

模型組及給藥組大鼠體質(zhì)量增長緩慢，同時(shí)出現(xiàn)多飲、多尿、毛發(fā)干枯、精神萎靡等現(xiàn)象。從給藥第3周開始，給藥組大鼠癥狀逐漸改善，通過代謝籠子測(cè)得尿量減少、通過每日定量喂水表明喝水量減少，精神好轉(zhuǎn)。造模給藥大鼠體質(zhì)量與正常組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)，結(jié)果見表1。從CRF大鼠的一般情況可以看出，造模成功，同時(shí)說明駝乳對(duì)CRF大鼠有一定的緩解作用。

2.2 駝乳對(duì)CRF大鼠BUN、Scr含量的影響

圖1 駝乳對(duì)血清肌酐(Scr)含量的影響Fig.1 Effect of camel milk on serum creatinine level in rats with chronic renal failure

由圖1可知，經(jīng)過28d的灌胃干預(yù)后，病理模型組、駝乳高、低劑量組和尿毒清干預(yù)組中Scr水平明顯升高，與正常對(duì)照組比較均有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳低劑量組與病理模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，駝乳高劑量組、尿毒清干預(yù)組與病理模型組有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳高劑量組與尿毒清干預(yù)組比較無顯著性差異(P＞0.05)，駝乳低劑量組與尿毒清干預(yù)組比較有顯著性差異(P＜0.05)，駝乳高、低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。

表1 駝乳對(duì)腎功能衰竭大鼠平均體質(zhì)量的影響Table 1 Effect of camel milk on average body weight of rats with chronic renal failure

圖2 駝乳對(duì)血尿素氮(BUN)含量的影響Fig.2 Effect of camel milk on blood urea nitrogen level in rats with chronic renal failure

由圖2可知，駝乳高劑量組和尿毒清干預(yù)組中BUN水平比病理模型組顯著降低，尿毒清干預(yù)組與病理模型組有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳低劑量組與病理模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。駝乳高、低劑量組間無顯著性差異，駝乳低劑量組與尿毒清干預(yù)組比較有顯著性差異(P＜0.05)，駝乳高劑量組與尿毒清干預(yù)組之間無顯著性差異。

由圖1、2可知，經(jīng)過28d大鼠灌胃給藥后，病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預(yù)組中Scr、BUN與正常對(duì)照組相比有極顯著性差異(P＜0.01)，其中駝乳高、低劑量組大鼠Scr和BUN水平低于病理模型組大鼠，并且駝乳高劑量組較駝乳低劑量組作用明顯。

2.3 駝乳對(duì)CRF大鼠24h尿量和UP的影響

圖3 5組大鼠24h尿量Fig.3 Changes in urine 24-hour volume of rats from different trial groups

實(shí)驗(yàn)前各組大鼠24h尿量沒有顯著差異。從圖3可知，在實(shí)驗(yàn)過程中，病理模型組、尿毒清干預(yù)組、駝乳高、低劑量組大鼠24小時(shí)尿量有顯著增多趨勢(shì)，而正常對(duì)照組大鼠尿量增多不明顯。正常對(duì)照組與其他4組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

圖4 駝乳對(duì)大鼠慢性腎功能衰竭尿蛋白的影響Fig.4 Effect of camel milk on urine 24-hour protein level in rats with chronic renal failure

由圖4可知，5組大鼠尿蛋白檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預(yù)組尿蛋白含量明顯多于正常對(duì)照組，有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳高劑量組尿蛋白量顯著低于病理模型組，差異極顯著(P＜0.01)，與駝乳低劑量組、尿毒清干預(yù)組比較無顯著性差異(P＞0.05)。駝乳低劑量組與病理模型組、尿毒清干預(yù)組比較無顯著性差異。尿毒清干預(yù)組與病理模型組比較差異極顯著(P＜0.01)。

2.4 駝乳對(duì)CRF大鼠血清SOD、TP、NO的影響

表2 駝乳對(duì)CRF大鼠平均SOD、TP、NO的影響Table 2 Effect of camel milk on the levels of three serum biochemical parameters in rats with chronic renal failure

從表2可知，腺嘌呤致CRF大鼠血中SOD水平明顯降低(P＜0.01)，駝乳高劑量組大鼠血液中SOD水平明顯高于病理模型組(P＜0.05)，而且駝乳高劑量組與尿毒清干預(yù)組沒有差異，從而可看出駝乳可提高CRF大鼠血清SOD水平，減輕腎損害；駝乳高、低劑量組NO含量明顯低于病理模型組，與尿毒清干預(yù)組無差別，說明駝乳對(duì)體內(nèi)NO的含量有一定的調(diào)節(jié)作用，從而減輕過高的NO腎臟的破壞作用；駝乳高、低劑量組血清總蛋白(TP)明顯高于病理模型組，其中駝乳高劑量組與病理模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。

2.5 駝乳對(duì)血清鈣、磷的影響

圖5 駝乳對(duì)CRF大鼠Ca、P含量的影響Fig.5 Effect of camel milk on serum Ca and P levels in rats with chronic renal failure

從圖5可知，病理模型組血鈣較正常對(duì)照組顯著降低，血磷較正常組顯著升高。病理模型組鈣含量與正常對(duì)照組比較明顯降低，具有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳低劑量組鈣含量較病理模型組升高，差異具有顯著性(P＜0.05)，駝乳高劑量組有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳低劑量組與正常對(duì)照組、駝乳高劑量組、尿毒清干預(yù)組比較差異無顯著性(P＞0.05)。

病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預(yù)組血磷含量較正常對(duì)照組升高，駝乳高、低劑量組血磷含量較病理模型組降低，差異具有極顯著性(P＜0.01)，駝乳低劑量組與駝乳高劑量組比較無顯著性差異(P＞0.05)，與尿毒清干預(yù)組比較差異有顯著(P＜0.05)。駝乳高劑量組與尿毒清干預(yù)組比較差異不顯著。

2.6 駝乳對(duì)大鼠腎臟的影響

2.6.1 駝乳對(duì)腎臟外在形態(tài)的影響

圖6 駝乳對(duì)大鼠腎臟形態(tài)的影響Fig.6 Kidneys of rats from different trial groups

從圖6可以看出，病理模型組：腎臟體積明顯增大，質(zhì)量增加，呈大白腎，腎臟表面呈顆粒狀，切開時(shí)皮髓質(zhì)分界不清。正常對(duì)照組：腎臟體積正常，呈褐色，質(zhì)地堅(jiān)實(shí)有光澤。尿毒清對(duì)照組：腎臟亦增大，顏色褐紅色，但較病理模型組程度輕。駝乳低劑量組：呈灰白腎，體積增大，質(zhì)量增加，腎臟表面有顆粒狀。駝乳高劑量組：腎臟呈淺褐紅色，體積輕度增大，較病理模型組輕。

2.6.2 駝乳對(duì)腎臟系數(shù)的影響

由表3可發(fā)現(xiàn)，病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預(yù)組腎臟系數(shù)明顯高于正常對(duì)照組，差異顯著(P＜0.01)。駝乳低劑量組腎臟系數(shù)與病理模型組、駝乳高劑量組比較也無顯著性差異(P＞0.05)，與尿毒清干預(yù)組比較差異有極顯著性(P＜0.01)。駝乳高劑量組與病理模型組比較，差異極顯著(P＜0.01)，與尿毒清干預(yù)組比較，差異具有極顯著性(P＜0.01)。

2.6.3 對(duì)腎臟組織切片的觀察

圖7 不同處理28d后的大鼠腎臟病理切片形態(tài)的比較Fig.7 Histopathological observations on kidneys of rats from different trial groups

由圖7可知，正常對(duì)照組：腎小球和腎小管，無病理改變，管腔內(nèi)無結(jié)晶物沉積。病理模型組：腎小球囊腔擴(kuò)大，間質(zhì)增生，透明樣變性。2,8-二羥基腺嘌呤黃色結(jié)晶占據(jù)整個(gè)腎小球、腎小管；少數(shù)腎小球輕度萎縮，個(gè)別小球代償性肥大，周圍腎小管擴(kuò)張，小管上皮細(xì)胞濁腫，管腔內(nèi)可見多數(shù)黃色結(jié)晶物沉積。尿毒清干預(yù)組：腎小管擴(kuò)張、萎縮、囊腔擴(kuò)大，小管上皮細(xì)胞濁腫，間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤，腎小球、腎小管間質(zhì)內(nèi)2,8-二羥基腺嘌呤黃色結(jié)晶物沉積較病理模型組少，部分小管萎縮，基本正常腎小球較病理模型組多。駝乳高、低劑量組：腎小球囊腔擴(kuò)大，腎小管擴(kuò)張，曲管上皮腫脹，間質(zhì)少量炎細(xì)胞浸潤，間質(zhì)血管輕度擴(kuò)張、腎小球、腎間質(zhì)內(nèi)2,8-二羥基腺嘌呤黃色結(jié)晶沉積較多，結(jié)構(gòu)基本正常腎小球、腎小管數(shù)量較病理模型組多。

表3 駝乳對(duì)大鼠平均腎臟系數(shù)的影響Table 3 Effect of camel milk on average kidney coefficient in rats with chronic renal failure

3 討 論

經(jīng)過28d的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，駝乳對(duì)慢性腎功能衰竭有緩解作用。從圖1、2可知，經(jīng)過28d大鼠灌胃給藥后，病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預(yù)組中Scr、BUN與正常對(duì)照組相比有極顯著性差異，其中駝乳高低劑量組大鼠Scr和BUN水平低于病理模型組大鼠，并且駝乳高劑量組較駝乳低劑量組作用明顯，說明造模成功且駝乳對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠的病情有緩解保護(hù)作用。

蛋白尿的含量和腎衰發(fā)展速率密切相關(guān)[3,5]。美國一組臨床前瞻性研究證實(shí)，蛋白尿的含量對(duì)慢性腎功能衰竭的發(fā)生發(fā)展有預(yù)示價(jià)值，而控制蛋白尿(如用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑等)含量可減緩慢性腎衰的惡化速率[6]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明駝乳可減緩大鼠尿蛋白的丟失，緩解腎功能的惡化。

SOD可通過清除自由基而保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞[7]，而CRF機(jī)體抗氧化能力降低，氧自由基清除系統(tǒng)失代償或衰竭，自由基得不到清除[7-8]，對(duì)腎組織損傷日趨加重，最后導(dǎo)致尿毒癥。有人研究慢性腎衰竭大鼠體內(nèi)總自由基含量顯著增高。自由基增加會(huì)對(duì)腎組織細(xì)胞的膜脂質(zhì)和蛋白質(zhì)產(chǎn)生嚴(yán)重的損傷，加重腎組織一系列病變。表2的數(shù)據(jù)說明駝乳能補(bǔ)充機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的需求，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成。

NO在一般情況下可以通過對(duì)腎臟血流動(dòng)力學(xué)及交感神經(jīng)活性的作用，參與腎臟血流動(dòng)力學(xué)及交感神經(jīng)活性的調(diào)節(jié)與腎素釋放的調(diào)節(jié)[9]。正常腎臟中NO是一種擴(kuò)血管物質(zhì)，具有利鈉、利尿、調(diào)節(jié)腎臟血流動(dòng)力學(xué)、參與維持正常血液流量和腎小球?yàn)V過率的作用；抑制系膜細(xì)胞生長和腎小球內(nèi)血栓形成，對(duì)腎臟具有保護(hù)作用，但過高或過低的NO反而對(duì)腎臟均有破壞作用[9-10]。在CRF時(shí)，在TNF、IL-1β、內(nèi)毒素等多種刺激因子作用下產(chǎn)生大量NO，可導(dǎo)致組織損害，其機(jī)制可能是影響細(xì)胞能量代謝，使細(xì)胞修復(fù)和蛋白質(zhì)合成障礙[11]，并生成過氧亞硝酸離子，引起毒性損害。慢性腎功能衰竭可引起低蛋白血癥，并可能抑制蛋白的合成[12-13]。從表2可知駝乳高、低劑量組NO含量明顯低于病理模型組，與尿毒清干預(yù)組無顯著差別，說明駝乳對(duì)體內(nèi)NO的含量有一定的調(diào)節(jié)作用，從而減輕過高的NO腎臟的破壞作用。

鈣、磷代謝與腎臟有密切關(guān)系，鈣、磷代謝紊亂是CRF常見的并發(fā)癥[11]。腎功能減退時(shí)，腎小球的濾過率降低，引起高磷血癥和低鈣血癥，低鈣高磷促進(jìn)甲狀旁腺素(parathyroid hormone，PTH)分泌增加繼而導(dǎo)致甲狀旁腺亢進(jìn)，引起腎性骨病、神經(jīng)病變、心血管系統(tǒng)等損害[14]，駝乳高、低劑量組血鈣比病理模型組高。說明駝乳可改善CRF引起的鈣、磷代謝紊亂，其機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

許多研究表明駝乳具有很高的醫(yī)療價(jià)值，如駝乳乳清蛋白中富含溶菌酶、乳鐵蛋白、乳過氧化物酶和免疫球蛋白等各種保護(hù)性蛋白[15-19]，在機(jī)體的抗病機(jī)制方面也起著重要的作用。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：1)駝乳可緩解腎衰大鼠的一般情況，減緩蛋白尿，調(diào)節(jié)電解質(zhì)；2)駝乳可降低大鼠血肌酐、尿素氮水平，保護(hù)腎功能；3)駝乳可調(diào)節(jié)大鼠血清TP、NO水平，提高SOD水平，加強(qiáng)對(duì)體內(nèi)自由基的清除作用；4)從病理觀察可見，駝乳在一定程度上緩解了腎單位的惡化；5)在其效果上比較，駝乳高劑量組優(yōu)于駝乳低劑量組，在一定程度上對(duì)慢性腎功能衰竭的惡化起到了延緩作用。

因此，長期飲用駝乳可預(yù)防和防止患腎疾病的危險(xiǎn)，對(duì)腎病患者來說駝乳不失為一種對(duì)其病情有益的綠色食品。

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Alleviating Effect of Camel Milk on Chronic Renal Failure in Rats

PAN Lei1，WANG Jing2，WANG Juan2，HE Jun-xia2，LI Jian-mei2，JIRIMUTU1,*
(1. Key Laboratory of Dairy Biotechnology and Engineering, Ministry of Education, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China；2. Camel Protection Association of Inner Mongolia, Hohhot 010018, China)

TS252.2

A

1002-6630(2010)17-0376-05

2010-06-29

潘蕾(1981—)，女， 碩士研究生，研究方向?yàn)槿槠芳夹g(shù)與加工工程。E-mail：panlei621@yahoo.com.cn

*通信作者：吉日木圖(1965—)，男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。E-mail：yeluotuojirimutu@yahoo.com.cn