蘇 坦 吳美芳

福建省寧德市藥品檢驗(yàn)所，福建 寧德 352100

大黃魚肉質(zhì)細(xì)膩，味道鮮美，為閩東特產(chǎn)。近年來(lái)野生大黃魚數(shù)量逐漸稀少，人工養(yǎng)殖大黃魚規(guī)模逐年擴(kuò)大。為有效控制人工養(yǎng)殖大黃魚的質(zhì)量，提高百姓的生活水平，我所開(kāi)展水產(chǎn)品藥物殘留的檢測(cè)。目前測(cè)定大黃魚中環(huán)丙沙星與恩諾沙星的殘留主要是采用農(nóng)業(yè)部頒布的1077號(hào)公告-1-2008[1]。我們針對(duì)其方法進(jìn)行部分改進(jìn)，使得方法更加準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便。

1 儀器與試藥

Agilent1200-6410 LC/MS QQQ(美國(guó))；CP225D電子分析天平(北京塞多利斯)；IKA MS3震蕩器(德國(guó))；R201BL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申生)；TGL-40B離心機(jī)(上海安亭)；BF2000-M氮?dú)獯蹈蓛x(北京八方世紀(jì))。

環(huán)丙沙星對(duì)照品(130451-200302中檢所)

恩諾沙星對(duì)照品(C：14861400德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司)

甲酸(色譜純，美國(guó)TEDIA公司)甲醇(色譜純，德國(guó)MERCK公司)乙腈(色譜純，德國(guó)MERCK公司)

其余試劑均為分析純

2 色譜條件

色譜柱：Zorbax SB Aq (2.1x100mm，3.5μm)

流動(dòng)相：0.1%甲酸溶液—乙腈=(82：18)

柱溫：25.0℃ 流速：0.3ml/min 進(jìn)樣量：10μL

圖1

3 質(zhì)譜條件

離子化模式：電噴霧離子源(ESI)，正離子模式；

離子噴霧電壓：4KV 干燥氣：10L/min

干燥氣溫度：350℃ 霧化氣壓力：40psi

檢測(cè)條件見(jiàn)表一：

表一 監(jiān)測(cè)的離子對(duì)

圖2

A：環(huán)丙沙星質(zhì)譜圖(288，245) B：恩諾沙星質(zhì)譜圖(316，245)

4 大黃魚樣品前處理

取樣品5.0g±0.01g，加冰乙酸2mL，加乙腈20mL，振搖2min，4500轉(zhuǎn)/min離心5min，加15mL二氯甲烷，手動(dòng)振搖并放氣，精密量取下層溶液10mL移入雞心瓶中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入1mL20%乙腈水溶液旋渦混合90秒，加入2mL乙腈飽和的正乙烷混合10秒，12000轉(zhuǎn)/min離心5min，取下層溶液用0.2μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液10μL進(jìn)樣。

5 加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別稱取環(huán)丙沙星與恩諾沙星對(duì)照品適量，加甲醇制成1.0mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。依次用甲醇制成濃度為5、10、20、40、100、200ng/mL的溶液按“4”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣。

環(huán)丙沙星回歸方程為：Y=5.1386X+1.07468 R=0.9998

恩諾沙星回歸方程為：Y=0.11914X+0.2658 R=0.9993

本實(shí)驗(yàn)的線性范圍為5～200ng/mL；

定量下限為1.0μg/Kg

檢出限為1.0μg/Kg（S/N=10）

6 方法精密度

精密量取環(huán)丙沙星與恩諾沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液加至空白大黃魚糜樣中。按“4”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣6次。環(huán)丙沙星與恩諾沙星濃度的RSD(n=6)分別為0.65%、0.38%。

7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

因陽(yáng)性樣品獲取不易，故取環(huán)丙沙星與恩諾沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液6份空白大黃魚糜樣中，按“4”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣，環(huán)丙沙星與恩諾沙星濃度的RSD分別為1.2%、0.85%。

8 加樣回收率

精密量取環(huán)丙沙星與恩諾沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇制成濃度為20ng/mL的溶液6份空白大黃魚糜樣中，按“4”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣。環(huán)丙沙星與恩諾沙星的平均回收率分別為96.5%、100.2%，RSD分別為1.0%、1.3%

小結(jié)

(1)魚肉中的水分對(duì)本實(shí)驗(yàn)有干擾，部頒標(biāo)準(zhǔn)采用無(wú)水硫酸鈉除水，我們經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)結(jié)果無(wú)顯著變化。

(2)將前處理中取全量的乙腈提取液改為精密量取10mL，可提高方法的可操作性，得出的結(jié)果更準(zhǔn)確。

[1]農(nóng)業(yè)部1077號(hào)公告-1-2008.水產(chǎn)品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法.