馬梅芳，李芳，陳騰蛟

(1.山東省棗莊市藥品檢驗所，山東 棗莊 277102；2.陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安 710003； 3.山東省棗莊市食品藥品監(jiān)督管理局嶧城區(qū)分局，山東 棗莊 277300)

分光光度法測定南葶藶子中總黃酮的含量

馬梅芳1*，李芳2，陳騰蛟3

(1.山東省棗莊市藥品檢驗所，山東 棗莊 277102；2.陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安 710003； 3.山東省棗莊市食品藥品監(jiān)督管理局嶧城區(qū)分局，山東 棗莊 277300)

目的：建立南葶藶子藥材中總黃酮的含量測定方法。方法：采用分光光度法,以蘆丁為對照品，以5%三氯化鋁甲醇溶液為顯色劑，在波長413nm處對樣品中的總黃酮進行含量測定。結果：總黃酮在3～30μg·mL-1線性關系良好，平均加樣回收率98.95%，RSD=0.90%(n=6)。結論：該方法操作簡便、準確，具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，適用于南葶藶子中總黃酮的含量測定。

南葶藶子；分光光度法；總黃酮；含量測定

南葶藶子為十字花科植物播娘蒿Descurainiasophia(L.) Webb ex Prantl的干燥成熟種子，味辛、苦，性大寒，具有瀉肺平喘，行水消腫功能。用于痰涎壅肺，喘咳痰多，胸脅脹滿，不得平臥，胸腹水腫，小便不利；肺源性心臟病水腫[1]。化學成分研究表明，南葶藶子中含有黃酮類成分，包括山柰酚、槲皮素、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷等[2-5]。藥理研究表明，黃酮類成分具有抑制血小板凝集，促進氣管纖毛運動，抗炎、抗氧化等多方面的活性[6-8]。關于南葶藶子中黃酮類單體成分的含量測定研究已有報道[9-10]。

中藥是一個多組分的復雜體系，由于其多靶位、多器官作用而具有多效性和整體平衡性。中藥中發(fā)揮藥效作用的物質基礎與合成藥物有著巨大的不同，它不是一個或兩個單一的化合物，而是一組或幾組結構類型近似的化合物群。近年來，強調中藥化學成分群的整體性和復雜性特征，中藥有效部位的檢測更加受到重視。本文作者利用黃酮類化合物母核上的酚羥基能與鋁離子絡合顯色的特性，建立了一種適用于南葶藶子中總黃酮含量測定的分析方法，為控制南葶藶子藥材的質量提供了實驗依據。

1 儀器與試藥

UV-2401PC紫外可見分光光度計(日本島津)，sartorius電子天平。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100080-200306)。所用試劑均為分析純。8批南葶藶子樣品，經山東中醫(yī)藥大學石俊英教授鑒定為十字花科植物播娘蒿Descurainiasophia(L.)Webb ex Prantl的種子。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液制備

精密稱取蘆丁對照品15.0mg，甲醇溶解并定容至100mL，得到濃度150μg·mL-1的蘆丁對照品溶液。

2.2供試品溶液制備

取南葶藶子樣品粉末1g，精密稱定，加石油醚(60～90℃)100mL，回流提取至提取液無色，藥渣揮干溶劑，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇補足損失的重量，濾過。

2.3 標準曲線繪制

精密量取濃度150μ·mL-1的蘆丁對照品溶液0.5，1，2，3，4，5mL，加5%的三氯化鋁甲醇溶液1mL，60℃加熱10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在413nm波長測定吸光度值。以蘆丁對照品濃度C為橫坐標，溶液吸光度值A為縱坐標，作標準曲線，求得回歸方程A=2.927×10-2C+2.178×10-2，r=0.999 8。表明蘆丁對照品濃度在3～30μg·mL-1與溶液的吸光度之間呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

精密量取蘆丁對照品溶液(濃度150μg·mL-1)2mL，按標準曲線繪制方法操作，在413nm波長處，連續(xù)6次測定吸光度值，結果RSD=0.05%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別在0，20，40，60，80，100min時，在413nm波長處測定1次吸光度值，結果RSD=0.17%。表明供試品溶液在制備后120min內，穩(wěn)定性良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗

取3號樣品粉末1g，6份，按樣品測定方法平行測定，計算總黃酮含量，結果RSD=0.67%，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取3號樣品(已知含量0.332%)粉末1g，6份，精密稱定，精密加入濃度630μg·mL-1的蘆丁對照品甲醇溶液5mL(含蘆丁對照品3.15mg)，揮干溶劑，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇補足損失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，加入5%的三氯化鋁甲醇溶液1mL，60℃加熱10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在413nm波長處測定吸光度值，由標準曲線讀出濃度C，以干燥品計算總黃酮含量，結果見表1。

表1 總黃酮加樣回收率試驗

注：對照品加入量均為3.15mg

2.8樣品測定

取樣品粉末1g，精密稱定，加石油醚(60～90℃)100mL，回流提取至提取液無色，藥渣揮干溶劑，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇補足損失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，加入5%的三氯化鋁甲醇溶液1mL，60℃加熱10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在413nm波長處測定吸光度值，由標準曲線讀出濃度C，以干燥品計算總黃酮含量，結果見表2。

3 討論與小結

三氯化鋁顯色分光光度法測定中藥中總黃酮的含量，是根據黃酮類化合物分子中含有的3-羥基、4-羰基或5-羥基、4-羰基或鄰二酚羥基可以與鋁鹽定量結合，形成有色絡合物的原理，通過測定有色絡合物的吸光度，來測定中藥中總黃酮含量的方法。

表2 南葶藶子總黃酮含量測定

注：n=3

化學成分研究表明[2-5]，南葶藶子中含有的黃酮類化合物主要是以槲皮素、山柰素、異鼠李素為苷元的黃酮苷類成分，均含有3-羥基、4-羰基或5-羥基、4-羰基或鄰二酚羥基，因此，可以用三氯化鋁顯色分光光度法測定總黃酮的含量。

本文對檢測波長、顯色劑加入量、樣品處理方法與時間等多個實驗條件進行了優(yōu)化篩選。實驗結果表明蘆丁、三氯化鋁形成的有色絡合物與樣品、三氯化鋁形成的有色絡合物均在413nm附近有最大吸收，故確定檢測波長為413nm。顯色劑5%的三氯化鋁甲醇溶液的加入量為1mL時，測得溶液的吸光度值最大，顯色的靈敏度最高，故確定顯色劑5%的三氯化鋁甲醇溶液的加入量為1mL。南葶藶子中含有的大量脂肪油對總黃酮的測定有一定的干擾，故確定樣品的處理方法為先脫脂，再回流提取。2h以后，延長提取時間，測得總黃酮含量不再增加，故確定樣品提取時間為2h。最終確定最佳實驗條件為：以蘆丁為對照品，檢測波長413nm，顯色劑5%的三氯化鋁甲醇溶液的加入量為1mL，樣品的處理方法為先脫脂，再回流提取2h。

實驗結果表明,不同產地的南葶藶子樣品總黃酮含量差別較大。其中山東濱州產的南葶藶子總黃酮含量最高，達0.521%；陜西商洛產的南葶藶子總黃酮含量最低，為0.324%。可見，產地對南葶藶子藥材中總黃酮的含量有一定的影響。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京：化學工業(yè)出版社，2005：234.

[2] 孫凱，李銑.南葶藶子的化學成分[J].沈陽藥科大學學報，2003，20(6)：419-421.

[3] 孫凱，李銑.南葶藶子中的一個新黃酮苷[J].中國藥物化學雜志，2003，13(4)：233，248.

[4] 王愛芹，王秀坤，李軍林，等.南葶藶子化學成分的分離與結構鑒定[J].藥學學報，2004，39(1)：46-51.

[5] 王愛芹，王秀坤，趙海譽，等.南葶藶子化學成分與質量研究[J].中國藥物與臨床，2005，5(1)：5-6.

[6] 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院.鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘藥物(藥品集)第二分冊[M].上海：上?？茖W技術出版社，1979：111.

[7] 劉詩平，陳尚猛，朱衛(wèi)東.槲皮素及其衍生物的生物活性研究進展[J].中草藥，1991，22(4)：184.

[8] 周新，李宏杰.黃酮類化合物的生物活性及臨床應用進展[J].中國新藥雜志，2007，16(5)：53-55.

[9] 馬梅芳，呂文海.HPLC法同時測定南葶藶子飲片中槲皮素、山柰酚及異鼠李素的含量[J].中國藥事，2009，23(1)：65-67.

[10] 王愛芹，王秀坤，閆興麗，等.HPLC測定南葶藶子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷的含量[J].中國中藥雜志，2004，29(10)：959-961.

DeterminationofTotalFlavoneinDescurainiaSophia(L.)WebbexPrantlbySpectrophotometry

Ma Meifang1, Li Fang2, Chen Tengjiao3

(1.ZaoZhuangInstituteofDrugControl,ZaozhuangShandong277102,China; 2.ShanxiProvincialAcademyofTraditionalChineseMedicine,Xi′anShanxi710003,China; 3.ZaoZhuangYiChengFoodAndDrugAdministration,ZaozhuangShandong277300,China)

Objective: To set u Pthe method for determination of total flavone inDescurainiasophia(L.) Webb ex Prantl.Methods: The Contents of total flavone were determined by spectrophotometry, reference substance was rutin, 5% AlCl3in methanol was chromogenic agent and the detection wavelength was 413 nm.Results: The linear range of total flavone was 3～30μg·mL-1, the average recovery was 98.95%，RSD=0.90%(n=6).Conclusion: This method is simple, rapid, sensitive and accurate with good reproducibility. It is suitable for determination of total flavone inDescurainiasophia(L.) Webb ex Prantl.

Descurainiasophia(L.) Webb ex Prantl; Spectrophotometry; Total Flavone; Determination

*馬梅芳，Email：mameifang0632@126.com

2010-03-16)