連曉雯，李克生，杜惠芬，袁 明，葉文華，周永奇

（甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院醫(yī)學(xué)生物技術(shù)中心，甘肅 蘭州 730050）

蘭州地區(qū)惡性腫瘤患者弓形蟲抗體IgG和IgM檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析

連曉雯，李克生，杜惠芬，袁 明，葉文華，周永奇

（甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院醫(yī)學(xué)生物技術(shù)中心，甘肅 蘭州 730050）

采用間接ELISA法對(duì)蘭州地區(qū)435例不同臨床類型惡性腫瘤患者血清中的弓形蟲抗體IgG和IgM進(jìn)行檢測(cè)，以50例健康體檢者作為對(duì)照，對(duì)前者伴發(fā)弓形蟲病的情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得出蘭州地區(qū)不同臨床類型惡性腫瘤患者伴發(fā)弓形蟲病的特點(diǎn)及規(guī)律。

惡性腫瘤；弓形蟲抗體IgG；弓形蟲抗體IgM；弓形蟲病

弓形蟲（TOX）是一種寄生在宿主有核細(xì)胞內(nèi)的機(jī)會(huì)致病性原蟲，而弓形蟲病是由弓形蟲寄生在人和多種動(dòng)物體內(nèi)所引起的一種人獸共患病，在人體多為隱性感染，其感染率和感染后的發(fā)病情況與機(jī)體的免疫狀況密切相關(guān)。免疫功能正常的人群感染后一般無臨床癥狀，但免疫功能受損或缺陷患者及孕婦，感染后往往會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重后果[1]。腫瘤患者的免疫功能大多低于正常人，而且抗腫瘤治療中的化療和放療會(huì)使患者的免疫功能進(jìn)一步降低，因而其對(duì)弓形蟲這種機(jī)會(huì)性感染的病原體特別易感。弓形蟲抗體IgG和IgM是弓形蟲感染的重要血清標(biāo)志物，弓形蟲感染早期多產(chǎn)生IgM抗體，IgG抗體產(chǎn)生較IgM抗體晚，但持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，是持續(xù)感染的重要指標(biāo)，兩者在弓形蟲病診斷和流行病學(xué)調(diào)查等方面均被廣泛運(yùn)用。本研究采用ELISA法對(duì)435例臨床確診的惡性腫瘤患者和50例健康體檢者的血清進(jìn)行弓形蟲抗體IgG和IgM的檢測(cè)，以了解蘭州地區(qū)惡性腫瘤患者的弓形蟲感染狀況，并探討其相關(guān)性。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象

隨機(jī)選擇甘肅省腫瘤醫(yī)院確診的惡性腫瘤患者435例為研究組，其中男性167例，女性268例；年齡 12～80歲，平均49歲；消化道惡性腫瘤（食管癌、胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌等）患者29例，肝膽惡性腫瘤患者31例，呼吸道惡性腫瘤（肺癌、支氣管肺癌等）患者30例，婦科腫瘤（宮頸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等）患者71例，乳腺癌患者102例，血液淋巴系統(tǒng)腫瘤患者30例，皮膚癌患者20例，泌尿系統(tǒng)腫瘤（腎癌、膀胱癌等）患者43例，其他類型惡性腫瘤患者79例。對(duì)照組50例為門診健康體檢者，年齡27～78歲，平均46歲。研究組和對(duì)照組的血清均為常規(guī)分離血清，來自甘肅省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 檢測(cè)試劑和儀器

1.2.1 檢測(cè)試劑 純化弓形蟲分泌抗原、陽性標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照血清、陰性標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照血清均來自中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸研所；羊抗人IgG酶、羊抗人IgM酶由北京中山生物技術(shù)公司提供；包被液、封閉液、樣品稀釋液、酶稀釋液和TMB底物均由我院實(shí)驗(yàn)室自行配制。

1.2.2 檢測(cè)儀器 微量可調(diào)式移液器，微量攪拌器，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，酶標(biāo)洗板機(jī)，96孔酶標(biāo)板（深圳市金燦華實(shí)業(yè)有限公司）。

1.3 檢測(cè)方法

用間接ELISA法檢測(cè)弓形蟲IgG抗體和IgM抗體。經(jīng)棋盤滴定實(shí)驗(yàn)確定ELISA的最適反應(yīng)條件為：抗原以1∶1800稀釋包被，血清以樣品稀釋液稀釋，稀釋倍數(shù)為1∶20，羊抗人IgG酶按1∶1000稀釋，羊抗人IgM酶按1∶800稀釋。檢測(cè)為陽性的樣本均進(jìn)行復(fù)核實(shí)驗(yàn)，2次均為陽性者則最終判為陽性。

具體操作步驟：酶標(biāo)板以100微升/孔包被抗原，37℃放置2 h，4℃過夜；隨即以120微升/孔加封閉液，37℃放置2 h，干燥后封裝備用。檢測(cè)時(shí)每板均加陰、陽性對(duì)照血清，振蕩混勻，37℃孵育30 min，洗滌4次，加入工作濃度的羊抗人IgG酶及羊抗人IgM酶，50微升/孔，振蕩混勻，37℃孵育30 min，洗滌5次，加入底物A、B各50微升/孔，37℃避光反應(yīng)10 min，以2 mol/L硫酸終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀于450 nm處讀取OD值，分析結(jié)果。

結(jié)果判定，目測(cè)判斷：顯藍(lán)色為陽性，無色或極淺藍(lán)色為陰性；OD值判斷：根據(jù)弓形蟲標(biāo)準(zhǔn)陽性值和標(biāo)準(zhǔn)陰性值對(duì)照分析，將檢測(cè)血清P/N≥3.0判定為陽性。

弓形蟲感染判定依據(jù)：待檢血清檢測(cè)弓形蟲抗體IgG和IgM，兩者中任何一種為陽性，即判定為弓形蟲感染。

2 結(jié)果

2.1 弓形蟲感染檢測(cè)結(jié)果（見表1）

表1 弓形蟲感染檢測(cè)結(jié)果

本次共檢測(cè)惡性腫瘤患者血清435份，弓形蟲感染率為24.14%，健康體檢者共50例，弓形蟲感染率為8.00%，兩者比較有顯著性差異（P＜0.01）。

2.2 弓形蟲抗體IgG和IgM檢測(cè)結(jié)果（見表2）

表2 弓形蟲抗體IgG和IgM檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

本次共檢測(cè)435份惡性腫瘤患者的血清，其中IgG陽性患者68例，陽性率為15.63%；IgM陽性患者48例，陽性率為11.03%；IgG和IgM均為陽性患者11例，陽性率為2.53%。健康體檢者共50例，其中IgG陽性者3例，陽性率為6.00%；IgM陽性者1例，陽性率為2.00%。除肝膽惡性腫瘤患者和婦科惡性腫瘤患者的弓形蟲抗體IgM陽性率明顯高于弓形蟲抗體IgG外，其余各類惡性腫瘤患者弓形蟲抗體IgG的陽性率高于或等于弓形蟲抗體IgM。

3 討論

（1）弓形蟲是一種機(jī)會(huì)致病原蟲，在人體多為隱性感染，當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)，其致病力增強(qiáng)。腫瘤患者免疫力下降，再加上放療或化療使機(jī)體免疫力更低，容易合并或誘發(fā)弓形蟲感染，所以腫瘤患者感染弓形蟲的機(jī)會(huì)增多。據(jù)國(guó)內(nèi)報(bào)道[2～3]，我國(guó)惡性腫瘤患者弓形蟲抗體檢測(cè)陽性率介于 10.34%～63.53%之間。本次研究組惡性腫瘤患者弓形蟲感染率為24.14%，是健康體檢者感染率（8.00%）的3.02倍，兩者之間相比有顯著性差異，此結(jié)果與國(guó)內(nèi)報(bào)道一致，表明腫瘤患者對(duì)弓形蟲有易感傾向。

（2）近年的資料報(bào)道[4～6]，不同地區(qū)人群血清弓形蟲抗體陽性率差異很大。因此，惡性腫瘤患者的弓形蟲抗體陽性率與不同地區(qū)人群弓形蟲的感染率有一定的關(guān)系。從檢測(cè)結(jié)果中可以看出，不同臨床類型惡性腫瘤患者弓形蟲抗體陽性率均高于健康體檢者；在各類惡性腫瘤患者中，消化道惡性腫瘤和皮膚癌患者弓形蟲感染率偏高，此結(jié)果與國(guó)內(nèi)外報(bào)道不完全一致[7～8]。

（3）弓形蟲抗體IgG和IgM是弓形蟲感染的重要血清標(biāo)志物，一般IgG陽性、IgM陰性提示既往感染或慢性感染，IgM陽性、IgG陰性提示有近期感染，而IgG、IgM雙陽性則多為活動(dòng)性感染。比較各類惡性腫瘤患者弓形蟲抗體IgG和IgM的陽性率發(fā)現(xiàn)，絕大多數(shù)惡性腫瘤患者弓形蟲抗體以IgG陽性、IgM陰性為主，提示惡性腫瘤患者既往感染弓形蟲的幾率較大。肝膽惡性腫瘤患者弓形蟲抗體以IgM陽性、IgG陰性居多，說明肝膽惡性腫瘤患者急性期感染的可能性大，其對(duì)機(jī)會(huì)致病性原蟲——弓形蟲更易感。而婦科惡性腫瘤患者的弓形蟲抗體IgM陽性率明顯高于弓形蟲抗體IgG，比較具體病例發(fā)現(xiàn)弓形蟲抗體以IgM陽性、IgG陰性居多，且IgG、IgM雙陽性比率高，這一結(jié)果表明婦科惡性腫瘤患者近期感染弓形蟲的幾率明顯高于其他類型惡性腫瘤患者且多為活動(dòng)性感染。

[1]于恩庶.弓形蟲病學(xué)[M].福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1992.

[2]黃菱，李燕賓，張煒.腫瘤患者合并弓形蟲感染血清抗體檢測(cè)分析[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2002，24（6）：335～336.

[3]楊占軍，謝順清，呂曉嫻.惡性腫瘤患者并發(fā)弓形蟲感染抽樣調(diào)查[J].醫(yī)藥論壇雜志，2005，6（1）：45～46.

[4]盧致民，張振明，牛發(fā)良.腫瘤患者弓形蟲感染調(diào)查[J].廣東醫(yī)學(xué)，1998，19（4）：281～282.

[5]劉愛芹，李雅杰.不同臨床類型的惡性腫瘤患者弓形蟲感染調(diào)查[J].中國(guó)人獸共患病雜志，1998，14（6）：73～74.

[6]張欠欠，張曉文，惠清法.惡性腫瘤患者弓形蟲感染調(diào)查[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2009，9（2）：337.

[7]牛安歐，傅小玉，Hlobil H.用DIFA檢測(cè)腫瘤患者的弓形蟲抗體[J].中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，1997，15：86～88.

[8]黃鶴，閻福華，李川江，等.ELISA檢測(cè)婦科腫瘤患者伴發(fā)弓形蟲感染的調(diào)查[J].中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，2000，18（3）：165～166.

G424.31

B

1671-1246（2010）14-0117-02