王世清
(河南省濮陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)所,河南 濮陽(yáng) 457000)
國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局《藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件》(2007002號(hào))中規(guī)定了三黃片每片含鹽酸小檗堿不得低于4.36 mg。然而,筆者在使用該標(biāo)準(zhǔn)過程中,曾先后用上海五四化學(xué)試劑有限公司、上海納輝干燥試劑廠、上海陸都化學(xué)試劑廠的中性氧化鋁測(cè)定同一批三黃片的含量,結(jié)果分別為2.53,4.94,3.02 mg,出現(xiàn)了合格與不合格兩種截然不同的結(jié)論。為了尋找三黃片中鹽酸小檗堿含量測(cè)定不準(zhǔn)確的原因,筆者再次進(jìn)行了試驗(yàn),結(jié)果理想,報(bào)道如下。
Waters高效液相色譜儀手動(dòng)進(jìn)樣器(美國(guó));Precisa92SM202ADR型電子天平;KQ2200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。鹽酸小檗堿對(duì)照品(批號(hào)為110713-200609,中國(guó)藥品生物制品檢定所);中性氧化鋁(批號(hào)為F20080901,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);三黃片(批號(hào)為08010342,襄樊隆中藥業(yè)股份有限公司);乙腈(色譜純),水(重蒸餾水),其他試劑(分析純)。
色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:0.05%十二烷基硫酸鈉(含0.1%磷酸)-乙腈(52∶48);流速:0.8 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):265 nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:20 μL(20 μL定量環(huán));進(jìn)樣方式:手動(dòng)進(jìn)樣。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算不低于4 000。
精密稱取105℃下干燥5 h的鹽酸小檗堿對(duì)照品(含量按98.14%計(jì))12.38 mg,置200 mL無色量瓶中,用甲醇適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過,作為對(duì)照品溶液A(鹽酸小檗堿的濃度為0.060 8 mg/mL)。另精密稱取105℃下干燥5 h的鹽酸小檗堿對(duì)照品14.94 mg(相當(dāng)于3片三黃片的含量),置具塞錐形瓶中,精密加入鹽酸-甲醇(1∶100)溶液75 mL,稱定質(zhì)量,密塞,超聲處理30 min,放冷,再稱重,用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL,置中性氧化鋁柱(5 g,100~200目,1.0 cm×15 cm,用甲醇10 mL預(yù)洗)上,以甲醇60 mL洗脫,收集洗脫液,低溫蒸干,殘?jiān)眉状既芙?,轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中并稀釋至刻度,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過,作為對(duì)照品溶液B(鹽酸小檗堿的理論質(zhì)量濃度為0.097 8 mg/mL)。
取本品10片(除去糖衣),稱定質(zhì)量,研細(xì),取約相當(dāng)于1片的質(zhì)量,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入鹽酸-甲醇(1∶100)溶液25 mL,稱定質(zhì)量,密塞,超聲處理30 min,放冷,再稱重,用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL,置中性氧化鋁柱(5 g,100~200目,1.0 cm ×15 cm,用甲醇 10 mL預(yù)洗)上,以甲醇60 mL洗脫,收集洗脫液,低溫蒸干(避免快速蒸發(fā)引起的邊緣效應(yīng)造成的損耗),殘?jiān)眉状既芙猓D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中并稀釋至刻度,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。用高效液相色譜儀測(cè)定,結(jié)果見表1和表2。
表1 三黃片中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定
表2 以對(duì)照品溶液B為基準(zhǔn)計(jì)算的樣品含量
由表1可見,與標(biāo)準(zhǔn)相比,雖加大了甲醇的洗脫量(增加50%)、加粗了中性氧化鋁柱的直徑(增大50%),卻仍不能改變測(cè)定結(jié)果。結(jié)合本批產(chǎn)品前幾次的測(cè)定結(jié)果,筆者認(rèn)為中性氧化鋁是影響測(cè)定結(jié)果的關(guān)鍵因素。從表2可以看出,中性氧化鋁對(duì)鹽酸小檗堿的吸附作用相當(dāng)嚴(yán)重(雖然此法中鹽酸小檗堿的狀態(tài)與樣品中的不同,但中性氧化鋁對(duì)鹽酸小檗堿的吸附作用可見一斑),損耗達(dá)40%以上;以對(duì)照品溶液B為基準(zhǔn)計(jì)算的樣品含量值與廠家投料相符。因此,選用合格的中性氧化鋁就成為本法的關(guān)鍵。同時(shí),也提示今后遇到此類問題時(shí)應(yīng)多加注意。
在檢驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn),對(duì)照品溶液保存在棕色量瓶與保存在無色量瓶中,峰面積的重復(fù)性不同,使用無色量瓶效果較好,使用棕色量瓶則較差。初步判斷可能是由于鹽酸小檗堿存在兩種異構(gòu)體,進(jìn)樣及操作過程中發(fā)生了吸光轉(zhuǎn)型所致。因此,在配制對(duì)照品溶液和供試品溶液時(shí)宜用無色量瓶,且應(yīng)同時(shí)配制。
[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄ⅥD.