吳珊鵬，林 欣

（1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州市第一醫(yī)院骨科，福建泉州 362000；2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院骨科，北京 100050）

目前已知許多常見(jiàn)的骨科疾病均與骨內(nèi)壓增高有關(guān)，如股骨頭壞死、骨性關(guān)節(jié)炎、跟痛癥等[1-4]，所以骨內(nèi)壓作為骨科臨床和基礎(chǔ)研究日益引起人們的注意。骨內(nèi)高壓臨床治療上較棘手，本課題從自主神經(jīng)系統(tǒng)入手，探討交感神經(jīng)對(duì)骨內(nèi)血管舒縮活動(dòng)的影響。以往有報(bào)道將頸總動(dòng)脈周交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除后，腦部血管出現(xiàn)擴(kuò)張[5]。交感神經(jīng)對(duì)骨內(nèi)血管是否也產(chǎn)生同樣的作用，這是本課題要研究的重點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取新西蘭純種大白兔15只，雌雄不拘，體重（2.16±0.35） kg，右側(cè)膝關(guān)節(jié)“V”形聚乙烯夾板伸直位持續(xù)固定35d，制成固定側(cè)脛骨上端骨內(nèi)高壓模型。

1.1.2 儀器與試劑 YH-4型生理壓力傳感器（北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所），BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司），R80血液流變儀和紅細(xì)胞變形與聚集儀（北京世帝科學(xué)儀器公司），r計(jì)數(shù)器（合肥眾成機(jī)電技術(shù)開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司），放免分析試劑（北京晶美生物公司提供的試劑盒）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 脛骨上端骨內(nèi)壓測(cè)量 將15只大白兔用3%戊巴比妥鈉（25 mg/kg體重）進(jìn)行靜脈麻醉，在脛骨結(jié)節(jié)上方約0.5 cm內(nèi)側(cè)平坦面將側(cè)壓針（內(nèi)徑0.95 mm，外徑1.5 mm）刺入骨髓腔內(nèi)，抽出針芯，滴入2 500 U/ml的肝素生理鹽水，將其連接到Y(jié)H-4型生理壓力傳感器，再連接在BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，進(jìn)行測(cè)壓，每個(gè)部位觀測(cè)10～15 min，待骨內(nèi)壓穩(wěn)定后，記錄其壓力值及曲線。

1.2.2 股動(dòng)脈外膜交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除術(shù) 15只大白兔采用3%戊巴比妥鈉靜脈麻醉，行右大腿上段股動(dòng)脈外膜交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除術(shù)，術(shù)后再測(cè)量脛骨上端骨內(nèi)壓值及曲線。

1.2.3 脛骨骨髓內(nèi)血液流變學(xué)測(cè)量 術(shù)前及交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除術(shù)后第2天，15只兔3%戊巴比妥鈉靜脈麻醉后，分別抽取每只兔右脛骨上端骨髓內(nèi)血約3 ml，在R80血液流變儀和紅細(xì)胞變形與聚集儀上測(cè)量血液流變學(xué)數(shù)值。

1.2.4 NPY和CGRP測(cè)檢 抽取15只兔手術(shù)前、后右脛骨上端骨髓內(nèi)血2 ml，注入含10%EDTA二鈉30 μl和抑肽酶40 μl的試管中，混勻后離心（4℃，3 000 r/min，10 min），分離血漿，-70℃保存待測(cè)。檢測(cè)前，將樣品置于室溫或冷水中逐漸復(fù)融，再次離心（4℃，3 000 r/min，10 min），取上清液測(cè)定。采用放免分析法進(jìn)行分析，用r計(jì)數(shù)器分別測(cè)定骨髓血中NPY和CGRP的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 術(shù)后骨內(nèi)壓結(jié)果

術(shù)后整體骨內(nèi)壓值有下降趨勢(shì)（P<0.05），但有2只兔骨內(nèi)壓值略增高（圖1）。

2.2 骨髓內(nèi)血液流變學(xué)結(jié)果

術(shù)后脛骨上端骨髓內(nèi)血漿黏度值、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、全血黏度值、紅細(xì)胞變形指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)均較術(shù)前明顯下降，而紅細(xì)胞聚集指數(shù)出現(xiàn)明顯上升（表1）。

2.3 NPY和CGRP檢測(cè)結(jié)果

手術(shù)前、后 NPY 值由（17.23±9.58）ng/L 下降至（14.26±8.23） ng/L， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；CGRP 由（28.86±9.76） ng/L 上升至（33.89±9.63） ng/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表1）。

3 討論

筆者以往曾有報(bào)道本研究單項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)果及分析[6-8]。本文在此基礎(chǔ)上，側(cè)重對(duì)實(shí)驗(yàn)組的幾項(xiàng)指標(biāo)綜合進(jìn)行分析，以期進(jìn)一步了解幾項(xiàng)指標(biāo)在交感神經(jīng)與骨內(nèi)壓關(guān)系研究中的意義。

正常情況下，NPY與CGRP在血漿中的濃度是維持在相對(duì)平衡狀態(tài)的，而NPY、CGRP活性物質(zhì)對(duì)血管調(diào)節(jié)又是對(duì)立統(tǒng)一的，以保持血管的正常舒縮功能，保證組織血液供應(yīng)。當(dāng)CGRP釋放增加（或NPY釋放減少），將出現(xiàn)血管擴(kuò)張，促使血液流變學(xué)改變，使血漿黏度下降，血小板凝聚性下降。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，交感神經(jīng)切斷后，脛骨骨髓血CGRP含量顯著增加，NPY含量下降，全血黏度值及血漿黏度值均出現(xiàn)下降，血液出現(xiàn)稀釋傾向。骨內(nèi)壓于術(shù)后也出現(xiàn)下降，說(shuō)明交感神經(jīng)切斷與血液黏度下降、血液稀釋及骨內(nèi)壓下降呈正相關(guān)關(guān)系，從該角度說(shuō)明了交感神經(jīng)切斷有降低骨內(nèi)壓作用。

表1 實(shí)驗(yàn)組手術(shù)前、后血液流變學(xué)測(cè)量值和NPY、CGRP值比較（±s，n=15）Tab.1 Comparison ofdetected hemorrheological value and NPY,CGRP level before and after the operation in experimentgroup(±s,n=15)

表1 實(shí)驗(yàn)組手術(shù)前、后血液流變學(xué)測(cè)量值和NPY、CGRP值比較（±s，n=15）Tab.1 Comparison ofdetected hemorrheological value and NPY,CGRP level before and after the operation in experimentgroup(±s,n=15)

P值NPY（ng/L）CGRP（ng/L）全血黏度值（mPa·s）切變率（200/s）切變率（300/s）切變率（5/s）切變率（1/s）血漿黏度值（mPa·s）全血高切還原度（BRVi-H）全血低切還原度（BRVi-L）紅細(xì)胞剛性指數(shù)（IR）紅細(xì)胞變形指數(shù)（TK）紅細(xì)胞聚集指數(shù)（EagI）指標(biāo)名稱 術(shù)前 術(shù)后17.23±9.58 28.86±9.76 14.26±8.23 33.89±9.63<0.01<0.01 6.29±0.72 7.67±0.80 13.56±1.61 20.93±2.23 1.60±0.18 15.18±2.11 59.20±8.43 8.08±1.96 1.25±0.18 3.34±0.23 4.64±0.63 6.34±0.81 10.53±1.42 17.54±3.53 1.41±0.18 10.45±1.75 49.46±8.13 6.26±2.00 1.05±0.20 3.94±0.43<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.05<0.01<0.05<0.01

股動(dòng)脈外膜交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除術(shù)是一種治療肢體骨內(nèi)高壓新方法，以往報(bào)道較少，本課題從基本實(shí)驗(yàn)指標(biāo)做起，探索該方法的可行性。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，該方法有降低骨內(nèi)壓作用，課題選擇手術(shù)前后骨內(nèi)壓、血液流變學(xué)和神經(jīng)肽三項(xiàng)指標(biāo)，尚不能完全體現(xiàn)該方法對(duì)骨內(nèi)壓的影響。因此，在此基礎(chǔ)上，筆者正計(jì)劃做更進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，如血流動(dòng)力學(xué)、血管周圍分子因素及該方法是否對(duì)肢體產(chǎn)生副作用等指標(biāo)。從多方面來(lái)驗(yàn)證該方法的可行性，為今后過(guò)渡到臨床治療骨內(nèi)高壓患者做好前期準(zhǔn)備。

[1]李鵬翠,衛(wèi)小春,牛金亮.骨內(nèi)壓在激素誘導(dǎo)型股骨頭壞死病程發(fā)展中的價(jià)值[J].生物骨科材料與臨床研究,2006,14(2):39-41.

[2]李賽波,吳耀持.膝骨性關(guān)節(jié)炎組織形態(tài)及細(xì)胞因子變化與中醫(yī)藥干預(yù)的影響[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2008,12(7):1313-1316.

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[5]田洪孝,張廣國(guó),尹燕新,等.頸總動(dòng)脈交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫術(shù)治療腦癱近期隨訪[J].中國(guó)矯形雜志,2006,14(13):1025-1026.

[6]吳珊鵬,孔抗美,王新家.股動(dòng)脈外膜交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除對(duì)骨內(nèi)壓超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2004,21(8):986-987.

[7]吳珊鵬,孔抗美,王新家.股動(dòng)脈外膜交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除對(duì)骨內(nèi)高壓血液流變學(xué)的影響[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2004,21(9):1119-1120.

[8]吳珊鵬,孔抗美,齊偉力,等.股動(dòng)脈外膜交感神經(jīng)網(wǎng)剝脫切除對(duì)骨內(nèi)高壓神經(jīng)肽的影響[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2006,23(1):88-89.