劉 琦，陳 曄，詹壽發(fā)*

（1.九江市教研室，江西 九江 332000；2.九江學院生命科學學院，江西 九江 332000）

大葉醉魚草快繁技術(shù)初探

劉 琦1，陳 曄2，詹壽發(fā)2*

（1.九江市教研室，江西 九江 332000；2.九江學院生命科學學院，江西 九江 332000）

以廬山野生植物大葉醉魚草的莖段為材料，對芽、叢生芽及生根培養(yǎng)方面進行了初步的研究.結(jié)果表明：MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L的培養(yǎng)基適宜誘導醉魚草莖段芽和叢生芽生長，MS＋NAA 0.2 mg/L的培養(yǎng)基適宜醉魚草莖段生根.

大葉醉魚草；莖段；組織培養(yǎng)；快速繁殖

0 引 言

大葉醉魚草（Buddleia davidii）為馬錢科植物，別名鬧魚花，落葉灌木，既具有很好的園林觀賞價值，又具有殺蟲、殺蛆、滅孑孓等作用，因此，備受人們的關(guān)注.醉魚草屬植物中有些種容易進行人工繁殖（如種子、扦插等），但也有少數(shù)種（如大葉醉魚草）的種子在土中多年不發(fā)芽，難以繁殖[1].近年來國內(nèi)一些研究者對醉魚草屬中的一些種進行了組織培養(yǎng)繁殖研究，以其莖段或芽作為外植體，以MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基并添加適當濃度的細胞分裂素和生長素，可誘導出試管苗.如段新玲等[2-3]對白花和藍花大葉醉魚草進行組培快繁的研究已取得成果；曾春霞等[4]對花葉日本醉魚草進行了組織培養(yǎng)研究并申請了專利；陳賢等[5-6]對野生的柱穗醉魚草進行了組織培養(yǎng)研究，建立了植株再生和快速繁殖體系.國外研究者對大葉醉魚草的組培快繁研究也已取得成果[7]，但國內(nèi)卻未見相關(guān)報道.為了進一步篩選、提取和研究大葉醉魚草中具有殺蟲活性的次生代謝產(chǎn)物，本文對廬山野生植物大葉醉魚草[8]進行了組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的初步研究，為其開發(fā)利用提供一定的參考.

1 材料與方法

1.1 材料

大葉醉魚草一般生長于海拔20～1 000 m的山坡林緣、溝邊、水旁，在廬山及周邊地區(qū)均有分布.供試的醉魚草采自廬山山下蓮花洞國家森林公園.

1.2 實驗方法

2008年秋季在蓮花洞國家森林公園內(nèi)選擇健康無病害的大葉醉魚草，采取10 cm長幼嫩的帶有飽滿側(cè)芽的醉魚草莖段帶回實驗室進行實驗.將莖段用清水沖洗3 h后用70%乙醇消毒30s，0.1%升汞消毒15min之后用無菌水沖洗3次，切取120個相同的1 cm長并帶有兩個側(cè)芽的莖段，分別接種在添加4種不同濃度激素配比的A、B、C、D組MS培養(yǎng)基上，配方見表1.每瓶培養(yǎng)基中接種3個莖段，每種培養(yǎng)基10瓶，培養(yǎng)溫度控制在（24±2）℃，每日光照持續(xù)12 h.接種后觀察統(tǒng)計莖段培養(yǎng)25 d時出芽等生長情況，并將生長25 d的單個芽體轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中進行繼代增殖培養(yǎng)以誘導叢生芽，以后每隔30 d繼代1次.將繼代培養(yǎng)中苗高3～4 cm，并有3～4片展開葉的健壯小苗轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基中誘導生根，再經(jīng)過煉苗移栽，以得到完整的植株[9-12].

表1 培養(yǎng)基配方

2 結(jié)果與分析

2.1 無菌芽體的誘導

將經(jīng)消毒過的1 cm長并帶有兩個側(cè)芽的莖段接種于A、B、C、D四組培養(yǎng)基中進行出芽誘導培養(yǎng).接種25 d時觀察結(jié)果見表2.從表2可以看出，四種培養(yǎng)基中莖段的成活率均較高，且其基部都產(chǎn)生少量愈傷組織，但A、B組芽的誘導率明顯高于C、D組，均達到了38%以上.觀察比較發(fā)現(xiàn)A、B組愈傷組織塊也明顯較C、D組大，其中A組的側(cè)芽已分化出叢生芽，且較B、C、D組差異顯著.由此可見，大葉醉魚草芽誘導的培養(yǎng)基中最佳激素濃度配比為6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L.

表2 不同培養(yǎng)基莖段生長情況

2.2 莖段繼代培養(yǎng)

將2.1節(jié)中大葉醉魚草莖段誘導生成的單芽剪切成帶有1葉（非展開葉）1芽的莖段，接種于A-E、B-F、C-G、D-H四組培養(yǎng)基（配方見表1）中進行繼代培養(yǎng).培養(yǎng)30～35 d，觀察發(fā)現(xiàn)最初轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)時，莖段的芽體數(shù)增加緩慢，形成叢生芽的數(shù)目少，經(jīng)過2～3次繼代培養(yǎng)后，叢生芽率逐漸增大.A-E組培養(yǎng)基容易誘導莖段叢生芽（叢生芽率100%）和多芽體的發(fā)生，并且呈矮小密集狀生長.表明繼代培養(yǎng)時，莖段逐漸適應(yīng)了相應(yīng)的培養(yǎng)條件，也可能是體內(nèi)逐步積累了較多的細胞分裂素和生長素，同時也對外部環(huán)境中激素的需求有所降低[3].從表3可以看出，四組培養(yǎng)基中經(jīng)繼代培養(yǎng)的莖段的成活率均達到了100%（培養(yǎng)30 d所統(tǒng)計的莖段成活率）.A-E、B-F組培養(yǎng)基中莖段的分化率均達到100%，但B-F組培養(yǎng)基的叢生芽率較低（50%）；C-G組培養(yǎng)基中莖段的分化率偏低，但誘導叢生芽率為75%；D-H組培養(yǎng)基的分化率最低，未形成叢生芽.表明高濃度6-BA和NAA的激素組合會抑制叢生芽的生長，因此A-E組培養(yǎng)基是大葉醉魚草莖段繼代培養(yǎng)較為理想的培養(yǎng)基，即添加激素的配比為6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L的MS培養(yǎng)基.

表3 不同培養(yǎng)基莖段繼代培養(yǎng)生長情況

2.3 生根培養(yǎng)

當繼代培養(yǎng)基中單株小苗高度達到3～4 cm并有3～4片展開葉時，即可進行生根培養(yǎng).挑取長勢良好的健壯單株小苗分別接種于M、N兩種不同激素配比的生根培養(yǎng)基（配方見表1）中進行生根培養(yǎng)，30 d時觀察并統(tǒng)計生根情況，結(jié)果見表4.M組培養(yǎng)基中苗的生根率、平均根數(shù)以及最大根長均明顯高于N組培養(yǎng)基，其中生根率達到了100%，而N組培養(yǎng)基的生根率為80%.表明添加NAA濃度為0.1～0.4 mg/L的培養(yǎng)基均可用于誘導大葉醉魚草莖段生根，但濃度為0.2 mg/L的誘導效果最佳.

表4 不同NAA濃度對莖段生根的影響

2.4 試管苗移栽

將生根的組培苗取出組培室，煉苗1周左右后，打開瓶蓋1～2 d后取出苗（不要傷根）.洗凈瓊脂后移栽到煉苗基質(zhì)中，移栽前先將基質(zhì)澆足水分，移栽后澆水，完成后罩上塑料薄膜.第1周，每天用小噴霧器噴灑MS培養(yǎng)液（按照水與MS培養(yǎng)液的體積比為2:1配制）1次；1周后，移去塑料薄膜.觀察發(fā)現(xiàn)大葉醉魚草試管苗適應(yīng)外界環(huán)境能力較強，1周后，成活率達90%以上.

3 結(jié) 語

本實驗結(jié)果表明大葉醉魚草莖段最佳芽誘導和繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基均為MS＋6-BA 0.5 mg/L，而較易生根的培養(yǎng)基則為MS＋NAA 0.2 mg/L，選擇大葉醉魚草帶芽莖段作為外植體較易誘導芽的萌發(fā).因此，在選用適當激素配比的條件下，用組培方法可以使大葉醉魚草快速繁殖，以便滿足從大量大葉醉魚草植物中篩選、提取和研究具有殺蟲活性的次生代謝產(chǎn)物的需要，為開發(fā)植物型環(huán)保農(nóng)藥提供一定的依據(jù)，同時可以解決園林綠地大量栽培需求的問題，也可以更好地保護廬山野生大葉醉魚草資源.

[1] 孔衛(wèi)邦，孔繁才.紫花醉魚草種子萌發(fā)條件的研究[J].種子，2002（6）：8-9.

[2] 段新玲，蘇雪痕.藍花大葉醉魚草組培快速繁殖的研究[J].林業(yè)科技通訊，1999（10）：17-19.

[3] 段新玲，任歲動，于軍.白花大葉醉魚草的離體培養(yǎng)和植株再生[J].植物生理學報，2002（12）：533.

[4] 曾春霞，孫衛(wèi)邦.花葉日本醉魚草的微型快繁[J].植物生理學通訊，2004，40（2）：199.

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[6] 陳賢，龔元圣，楊德，等.野生柱穗醉魚草嫩芽的組培技術(shù)研究[J].西部林業(yè)科學，2007，36（4）： 74-79.

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[12]李成才.繁花優(yōu)品醉魚草[J].園林，2002（11）：18.

Abstract：The stem sections of wild Buddleia davidii in Mountain Lushan are taken as materials to conduct a preliminary research on callus induction and the proposed method makes the stem section and root grow rapidly.The results show that,MS+6-BA 0.5 mg/L has a significant effect on Buddleia davidii callus induction and the stem section and root propagates rapidly.

Key words：Buddleia davidii； stem section； tissue culture； rapid propagation

Preliminary Research on Rapid Propagation of Buddleia Davidii

LIU Qi1， CHENYe2， ZHANShou-fa2*

（1.Jiujiang Science of Education Research Institute， Jiujiang 332000， Jiangxi， China； 2.College of Life Science，Jiujiang University， Jiujiang 332000， Jiangxi， China）

Q 945.52

B

1001-4217（2010）02-0076-05

2009-10-26

劉琦（1966-），男，江西九江人，高級教師.研究方向：生物教學和生物資源.E-mail：jjlq095@sina.com；*通訊聯(lián)系人E-mail：zhan9630@126.com

江西省教育廳科技項目（GJJ09353）