李 松，余坤興，劉麗敏，淡 明 ，劉紅堅(jiān)，楊 柳，譚 芳，游建華，戴友銘

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心，南寧 530007；2.廣西壯族自治區(qū)甘蔗研究所，南寧 530007；3.廣西大學(xué)，南寧530005）

甘蔗是中國(guó)最主要的糖料作物，其種植面積占糖料總面積的85%左右，蔗糖產(chǎn)量占食糖產(chǎn)量的90%以上。甘蔗屬于無(wú)性繁殖且長(zhǎng)期連作作物，易受各種病害的積累且傳播快，尤其是目前應(yīng)用化學(xué)藥物無(wú)法防治的甘蔗宿根矮化病（RSD）和花葉病等病害嚴(yán)重發(fā)病，種性退化，產(chǎn)量、質(zhì)量急劇下降。莖尖培養(yǎng)去除甘蔗宿根矮化病和花葉病，生產(chǎn)脫毒健康種苗是恢復(fù)甘蔗優(yōu)良種性、提高甘蔗工農(nóng)效益最有效的技術(shù)措施[1]。甘蔗迅速大量繁殖試管苗，可通過兩種方式：一種是誘導(dǎo)嫩葉外植體產(chǎn)生愈傷組織，由愈傷組織分化植株（Lee,T.S.G，1986;Lee,T.S.G，1987;Daniela Cidade et al,2007）[2,3,4]；另一種是培養(yǎng)莖頂生長(zhǎng)點(diǎn)附近的芽（頂芽、腋芽），使之大量分蘗繁殖。繁殖一定數(shù)量后，誘導(dǎo)芽長(zhǎng)出根，形成完整植株（Hu,C.Y et al，1983;S Lakshmanan P et al，2006；Imtiaz Ahmed Khan et al，2006）[5,6,7]。我國(guó)利用甘蔗外植體進(jìn)行良種快繁的研究工作起步較早，20世紀(jì)70年代通過愈傷組織[8]、腋芽[9]等進(jìn)行甘蔗良種快繁，并大面積應(yīng)用于生產(chǎn)；1994年許莉萍[10]報(bào)道了莖尖培養(yǎng)去除甘蔗花葉病毒。對(duì)甘蔗莖尖培養(yǎng)去除甘蔗宿根矮化病的研究工作開展較晚，但進(jìn)展較快，并已進(jìn)入推廣應(yīng)用階段[11]。但是甘蔗莖尖培養(yǎng)擴(kuò)繁量小，成本高，不利于在生產(chǎn)上大面積推廣應(yīng)用。本研究著重于以莖尖細(xì)胞培養(yǎng)及體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑，實(shí)現(xiàn)深度去病去毒和大幅度提高擴(kuò)繁量。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試品種選用目前廣西當(dāng)家甘蔗品種新臺(tái)糖22號(hào)，由廣西甘蔗研究所生物技術(shù)研究室提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 組培苗繁育方法 設(shè)莖尖培養(yǎng)誘導(dǎo)胚狀體后分化成苗（處理A）、莖尖直接分化成苗（處理B）與腋芽直接分化成苗（處理C）3種繁育方法。

莖尖培養(yǎng)誘導(dǎo)胚狀體后分化成苗方法，即從田間取回生長(zhǎng)健壯的新臺(tái)糖22號(hào)宿根植株，將蔗莖砍成單芽段，在30℃條件下培養(yǎng)20d左右，經(jīng)常規(guī)消毒后剝?nèi)?～2mm的莖尖分生組織在黑暗條件下進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，培養(yǎng)基為：MS+2，4-D 2.5mg/L＋NAA 0.1mg/L；待愈傷組織誘導(dǎo)形成后轉(zhuǎn)入胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，配方為：MS+2，4-D 1.5mg/L＋6-BA 0.5mg/L＋NAA 0.1mg/L；胚狀體形成后轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基，在自然光照條件進(jìn)行綠芽分化，培養(yǎng)基配方為：MS+6-BA 1.0mg/L＋NAA 0.1mg/L；對(duì)所得綠苗進(jìn)行試驗(yàn)研究。以上培養(yǎng)溫度為27±1℃，光照為自然散射光。

莖尖直接分化成苗方法，即如上所述方法獲取甘蔗的莖尖在MS+6-BA 1.0mg/L＋NAA 0.1mg/L濾紙橋上進(jìn)行分化培養(yǎng)；對(duì)分化培養(yǎng)獲得的莖尖組培苗進(jìn)行試驗(yàn)研究。培養(yǎng)條件與莖尖培養(yǎng)誘導(dǎo)胚狀體后分化成苗方法相同。

腋芽直接分化成苗方法，即上述相同新臺(tái)糖22號(hào)材料，將蔗莖砍成單芽段，經(jīng)用清水洗凈、75%酒精擦表皮后，用0.2%的升汞消毒12min，無(wú)菌水沖洗3次，接種在MS+6-BA 1.0mg/L＋NAA 0.1mg/L進(jìn)行腋芽培養(yǎng)。所獲得的腋芽組培苗進(jìn)行試驗(yàn)研究。培養(yǎng)條件與莖尖培養(yǎng)誘導(dǎo)胚狀體后分化成苗方法相同。

1.2.2 組培苗繁殖影響因素設(shè)計(jì) 以春植蔗為材料，于8月5日、10月5日、12月5日3個(gè)生長(zhǎng)時(shí)間段進(jìn)行取樣處理接種，每個(gè)時(shí)間段觀察不同時(shí)期接種各種繁育方法對(duì)外植體成活情況的影響。以8月5日接種單芽為單位獲得的活外植體經(jīng)1.2.1分化成苗后，進(jìn)行以下研究：

（1）不同激素水平的不同繁育方式組培苗快繁研究：采用二因素，6-BA 五水平：0、0.5、1.0、1.5、2.0mg/L；NAA四水平：0、0.01、0.05、0.1mg/L進(jìn)行試驗(yàn)，以篩選不同類型組培苗培養(yǎng)的最適繁殖培養(yǎng)基。以供體單芽為單位，取生長(zhǎng)基本相近的芽系苗，每個(gè)培養(yǎng)基處理為3瓶苗，每瓶1個(gè)單芽株系苗，設(shè)3次重復(fù)，增殖5代后進(jìn)行組培苗快繁數(shù)據(jù)收集。

（2）不同激素水平組培苗生根試驗(yàn)：采用二因素NAA和ABA各四水平：0、2.5、5.0、7.5mg/L進(jìn)行試驗(yàn)，每種培養(yǎng)基處理為5瓶苗，4次重復(fù)。培養(yǎng)30d后進(jìn)行組培苗生根數(shù)據(jù)收集。

1.2.3 不同處理方式的脫毒效果試驗(yàn) 12月15日從田間選擇生長(zhǎng)一般，明顯感染花葉病的蔗株，采回后取蔗莖中下段蔗汁進(jìn)行PCR檢測(cè)證實(shí)含RSD后，將帶RSD的甘蔗側(cè)芽按1.2.1的三種繁育方式進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)處理接種30個(gè)芽，獲得的組培苗以每個(gè)側(cè)芽為單位建立株系苗，定量比較其脫毒效果。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目與方法

1.3.1 外植體成活率 外植體接種培養(yǎng)一段時(shí)間后，部分外植體因真菌、細(xì)菌、褐化等污染因素導(dǎo)致死亡，外植體成活率即成活外植體數(shù)占接種總數(shù)的百分率。接種后每天上午觀察一次，因人為操作而非材料因素造成的真菌、細(xì)菌污染不列入統(tǒng)計(jì)范圍。

1.3.2 組培苗繁殖速度與質(zhì)量 內(nèi)容主要有：增殖速度、假莖高度、假莖粗、葉片長(zhǎng)度、每瓶苗鮮重等。以接種外植體單芽為基數(shù)，在1.2.2（1）培養(yǎng)條件下增殖至第5代，對(duì)上述內(nèi)容進(jìn)行統(tǒng)計(jì)：增殖速度，處理A、B、C在6-BA 0mg/L+NAA 0-0.1mg/L配比培養(yǎng)條件下統(tǒng)計(jì)全部苗數(shù)，其余配比培養(yǎng)條件下的苗數(shù)，各配比取有代表性的瓶苗，其中，處理A取10瓶苗，處理B、C取總瓶數(shù)的1/4進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，平均每瓶苗的株數(shù)，然后乘增殖總瓶數(shù)，累加得出其增殖總苗數(shù)（增殖速度）。

假莖高度、假莖粗、葉片長(zhǎng)度、每瓶苗鮮重，處理A、B、C均以6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L配比相同培養(yǎng)條件下統(tǒng)計(jì)。隨機(jī)抽取100株苗，測(cè)定假莖高度、假莖粗、葉片長(zhǎng)度，其中假莖高度，用30cm長(zhǎng)的直尺測(cè)定，以基部起至＋1葉肥厚帶止，取平均值；假莖粗，用游標(biāo)尺測(cè)蔗苗假莖中部，取平均值；葉片長(zhǎng)度，用30cm長(zhǎng)的直尺每株苗＋1葉葉片長(zhǎng)度，取平均值；每瓶苗鮮重，不同處理各取20瓶有代表性的瓶苗，洗凈培養(yǎng)基，在陰涼處自然風(fēng)干水分后用電子分析天平稱重，取平均值。

1.3.3 不正常組培苗 內(nèi)容主要有：白化苗、細(xì)弱小苗、玻璃化苗、瘋長(zhǎng)苗。以瓶為單位對(duì)1.2.2（1）的各處理試驗(yàn)瓶苗進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。白化苗，即蔗苗完全失綠呈白色或部分失綠呈白綠相間，每瓶苗中有1株以上白化苗均入統(tǒng)計(jì)范圍；細(xì)弱小苗，即蔗苗假莖比正常苗小一倍以上，增殖速度極慢，葉片細(xì)長(zhǎng)偏黃，一瓶苗約有1/3以上蔗苗出現(xiàn)此現(xiàn)象均列入統(tǒng)計(jì)范圍；玻璃化苗，即蔗苗腫脹失綠，葉片皺縮成縱向卷曲，增殖能力降低，一瓶苗約有1/3以上蔗苗出現(xiàn)此現(xiàn)象均列入統(tǒng)計(jì)范圍；瘋長(zhǎng)苗，即蔗苗增殖速度較快，蔗苗矮小，高度為正常苗一半左右，一瓶苗約有1/2以上蔗苗出現(xiàn)此現(xiàn)象均列入統(tǒng)計(jì)范圍。

1.3.4 不同激素水平對(duì)組培苗生根的影響 內(nèi)容主要有：生根率、每瓶苗生根率、每株苗根數(shù)、移栽成活率等。生根率，即生根瓶苗數(shù)占試驗(yàn)瓶苗總數(shù)的百分率；每瓶苗生根率，即組培苗轉(zhuǎn)接生根試驗(yàn)后20d，隨機(jī)抽取50瓶生根苗，以有2片葉以上（含2片葉）的蔗苗為標(biāo)準(zhǔn)苗，長(zhǎng)有1條根（含1條）以上的列入統(tǒng)計(jì)范圍，取平均值；移栽成活率，所有參試生根苗進(jìn)行移栽，根據(jù)1.3.2與每瓶苗生根率計(jì)算移栽生根苗數(shù)，移栽后約30d進(jìn)行分株假植育苗，并統(tǒng)計(jì)假植苗數(shù)，假植苗數(shù)占移栽生根苗數(shù)的成分率為移栽成活率。

1.3.5 RSD檢測(cè)、花葉病檢測(cè) 對(duì)1.2.3不同處理試驗(yàn)苗采用PCR技術(shù)進(jìn)行RSD、花葉病病源檢測(cè)，檢測(cè)方法參照鄧展云[12]、李利君[13]，每個(gè)處理隨機(jī)抽取10瓶進(jìn)行檢測(cè)，空白對(duì)照為樣品提取緩沖液，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照分別為經(jīng)鑒定已感染RSD、花葉病病毒和未感染RSD、花葉病病毒的甘蔗植株，由廣西甘蔗研究所生物技術(shù)研究室提供。根據(jù)顯色結(jié)果，并與空白、陰性及陽(yáng)性對(duì)照比較，判定是否感染病毒。每個(gè)樣品均重復(fù)試驗(yàn)3次，若三者均為陽(yáng)性則記為陽(yáng)性，三者均為陰性則記為陰性，陽(yáng)性、陰性均有出現(xiàn)則記為不能確定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)處理用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件，利用LSD（Least-significant difference）最小顯著差數(shù)法和Duncan（Duncan's multiple range test）新復(fù)極差法進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA）作圖比較。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 不同時(shí)期接種對(duì)外植體成活的影響

接種時(shí)期與培養(yǎng)方式不同，外植材料的成活率也不同，而且引起外植體死亡的因素也不同。處理A與處理B不同時(shí)期接種成活率相近，3個(gè)時(shí)間段平均成活率分別為49.14%和48.58%、77.04%；引起芽死亡的原因也相同，均為褐化（見圖1）。處理C不同時(shí)期接種成活率不同，以8月5日成活率最高，其次為10月5日；引起芽死亡的原因主要是材料帶菌（見圖1、2）。經(jīng)差異性分析，處理A與B成活率差異不顯著（Sig=0.86>0.05），處理A、B與處理C成活率差異達(dá)極顯著水平（Sig<0.01）。

圖1 不同處理的外植體成活率

圖2 不同時(shí)期接種外植體死亡情況

2.2 不同處理在不同激素水平下對(duì)組培苗繁殖的影響

2.2.1 增殖速度 不同激素水平對(duì)組培苗的增殖速度影響較大，但同一激素水平對(duì)不同處理組培苗的增殖速度影響程度相近（見表1）。試驗(yàn)結(jié)果表明，組培苗增殖速度最高的為處理A（為2589倍），其次是處理B（297倍），最低為處理C。經(jīng)差異分析，處理間差異達(dá)極顯著水平（Sig<0.01）；6-BA和NAA對(duì)甘蔗組培苗增殖培養(yǎng)均具有明顯的效果，其中6-BA與NAA同時(shí)存在時(shí)，組培苗增殖苗數(shù)較多，6-BA與NNA獨(dú)立存在時(shí)，6-BA增殖效果遠(yuǎn)高于NAA，在參試培養(yǎng)基中，以6-BA 1.5mg/L+NAA 0.01～0.1mg/L增殖效果較好。

表1 不同激素水平組培苗快繁情況

2.2.2 組培苗質(zhì)量 以6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L激素配比培養(yǎng)條件下對(duì)各處理試管苗質(zhì)量進(jìn)行測(cè)定。處理不同，蔗苗質(zhì)量不同（圖3）。假莖高度以處理C最高，為5.56 cm，其次為處理B，為4.53 cm，處理A為4.49 cm，與處理C差異極顯著（Sig<0.01）；各處理葉片長(zhǎng)度、假莖粗的表現(xiàn)與假莖高度相同（Sig>0.05）；每瓶苗鮮重，以處理A最高，達(dá)13.7g，其次為處理B，為10.5 g，處理C只有6.3 g，差異極顯著（Sig<0.01）。在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，若不及時(shí)轉(zhuǎn)接新培養(yǎng)基，處理A部分蔗苗會(huì)出現(xiàn)枯黃，處理B、C極少出現(xiàn)此現(xiàn)象。

2.2.3 不同處理對(duì)組培苗（不正常苗）生長(zhǎng)的影響 甘蔗組培繁殖過程中，絕大部分為生長(zhǎng)正常的苗，但也有一小部分為不正常生長(zhǎng)的苗。從外觀上分類，本試驗(yàn)中不正常生長(zhǎng)的苗類型有白化苗、細(xì)弱小苗、玻璃化苗、瘋長(zhǎng)苗4種情況（見圖4），不正常苗發(fā)生率最高的是處理A，其次為處理B。玻璃化苗各處理之間均未達(dá)到顯著水平（Sig<0.01），但白化苗、細(xì)弱小苗、瘋長(zhǎng)苗處理A和處理B與處理C相比都達(dá)到了極顯著水平（Sig<0.01）。

2.3 不同激素水平對(duì)組培苗生根及移栽成活率的影響

2.3.1 不同處理不同激素水平對(duì)組培苗生根的影響 試驗(yàn)結(jié)果（見表2）表明，不同處理間組培苗生根差異不顯著，生根率處理A為75.3%，處理B為76.9%，處理C為76.6%。NAA和ABA對(duì)甘蔗組培苗生根具有明顯的作用，NAA和ABA單獨(dú)使用時(shí)，NAA的生根效果好于ABA；NAA和ABA同時(shí)一起使用時(shí)，兩者對(duì)生根具有一定的累加效應(yīng)，但效果不明顯。在16個(gè)培養(yǎng)基中，以NAA 7.5mg/L+ABA 2.5mg/L生根率最高，達(dá)95.0%，為最佳生根培養(yǎng)基。

表2 不同激素水平組培苗生根情況

2.3.2 不同處理不同激素水平對(duì)組培生根苗室外移栽成活率的影響 將已完全長(zhǎng)根的組培苗冼凈后移栽到室外叢栽苗圃，移栽前統(tǒng)計(jì)苗根系質(zhì)量情況，結(jié)果見圖5。試驗(yàn)結(jié)果表明，處理C根系優(yōu)于處理B和處理A，但各處理之間差異不顯著（Sig>0.05），處理B和處理A的根質(zhì)量相似，差異不明顯（Sig>0.05）；3種類型的瓶苗室外移栽成活率均較高（圖6），差異不明顯。

2.4 不同處理對(duì)組培苗去除RSD、花葉病的效果

不同處理對(duì)組培苗去除RSD、花葉病的效果不同（見表3）。試驗(yàn)結(jié)果表明，在去除RSD方面，處理A能去除RSD，去除率95%；其次為處理B，RSD去除率為70%；處理C無(wú)法去除RSD，與處理A和處理B差異極顯著（Sig<0.01）。

在去除花葉病方面，處理A去除率達(dá)100%；其次為處理B，花葉病去除率為75%；處理C無(wú)法去除花葉病，與處理A和處理B差異極顯著（Sig<0.01）。

表3 不同處理試管苗對(duì)RSD和花葉病脫毒效果

3 結(jié)論

3.1 不同時(shí)期接種對(duì)外植體成活的影響

兩種莖尖外植體在不同時(shí)間段接種，外植體死亡因素的相同，主要是褐化引起。甘蔗莖尖分生組織接種在培養(yǎng)基上，不到24h就開始陸續(xù)出現(xiàn)褐化，72h后褐化率達(dá)100%。莖尖接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)下暗培養(yǎng)2周左右，未褐化的組織4周長(zhǎng)出乳白色致密胚性愈傷組織，小部分褐化較輕的組織也能長(zhǎng)出乳白色致密胚性愈傷組織；然后轉(zhuǎn)入胚狀體誘導(dǎo)培基1周后，逐漸長(zhǎng)出米黃色的胚性細(xì)胞團(tuán)進(jìn)而分化出苗，從接種到出現(xiàn)再生苗約需30～40d時(shí)間；甘蔗莖尖接種在分化培養(yǎng)基上，褐化情況與甘蔗莖尖愈傷組織培養(yǎng)相似，存活的莖尖40d左右長(zhǎng)出綠芽，60d左右分化成叢芽；腋芽外植體接種在分化培養(yǎng)基上，褐化程度較輕，個(gè)別較重的對(duì)苗的成活影響也不大，因褐化原因沒有引起腋芽死亡，引起腋芽外植體死亡的主要因素是真菌、細(xì)菌污染。腋芽由于有葉組織的保護(hù)及未有損傷，沒有產(chǎn)生褐變，故其成活率較高，產(chǎn)生的污染主要是外植體組織內(nèi)的真菌、細(xì)菌引起，大部分是在培養(yǎng)20d以后陸續(xù)發(fā)生。因此，若用莖尖進(jìn)行脫毒苗繁育，在接種及培養(yǎng)前期，對(duì)莖尖進(jìn)行處理，以降低褐化程度，可提高成活率。

3.2 不同處理對(duì)組培苗繁殖速度與質(zhì)量的影響

莖尖分生細(xì)胞是種質(zhì)細(xì)胞，通過誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的胚性細(xì)胞，因此一個(gè)莖尖經(jīng)誘導(dǎo)后分化再生較多的植株；而莖尖和腋芽直接分化出苗，以芽繁芽，其繁殖速度較低。在相同的培養(yǎng)條件下，由于不同處理其蔗苗繁殖速度不同，其蔗苗的質(zhì)量也有所不同。本試驗(yàn)莖尖胚性細(xì)胞苗增殖較快，每瓶苗的數(shù)量較多，平均每株苗的營(yíng)養(yǎng)、光、氣等條件相對(duì)較低，因此其增殖苗相對(duì)較細(xì)，且在繁殖過程中因培養(yǎng)中營(yíng)養(yǎng)不足出現(xiàn)蔗苗枯黃的現(xiàn)象；腋芽苗增殖較慢，平均每株苗的營(yíng)養(yǎng)、光、氣等條件相對(duì)較好，苗較粗壯；莖尖苗質(zhì)量處于莖尖胚性細(xì)胞苗與腋芽苗之間。因此，為提高組培苗質(zhì)量，莖尖胚性細(xì)胞苗在繁殖過程中，適當(dāng)降低每瓶苗的基本苗數(shù)，改善培養(yǎng)條件，并可以提高繁育速度。

3.3 不同處理對(duì)組培苗（不正常苗）生長(zhǎng)的影響

本試驗(yàn)組培苗出現(xiàn)的不正常苗有白化苗、細(xì)弱小苗、玻璃化苗和瘋長(zhǎng)苗。莖尖胚性細(xì)胞分化長(zhǎng)成的苗，4種不正常生長(zhǎng)狀態(tài)的苗的發(fā)生率高于莖尖苗和腋芽苗；莖尖苗其不正常苗發(fā)生情況與莖尖胚性細(xì)胞苗相似；腋芽分化的苗，在發(fā)生形態(tài)上是以芽長(zhǎng)芽，只有玻璃化苗發(fā)生。4種生長(zhǎng)不正常苗在生根試驗(yàn)中，白化苗、細(xì)弱小苗、玻璃化苗均能正常生根，但玻璃化苗所長(zhǎng)根系質(zhì)量較低，而瘋長(zhǎng)苗在生根培養(yǎng)基中仍處于增殖狀態(tài)，很少有根的發(fā)生。上述不正常生長(zhǎng)苗是否屬于變異正在進(jìn)行研究之中。因此，在組培繁育過程中，適當(dāng)降低激素水平與培養(yǎng)代數(shù)，可減少不正常苗的發(fā)生率。

3.4 不同處理不同激素水平對(duì)組培苗生根及移栽成活率的影響

本試驗(yàn)結(jié)果，同一甘蔗品種不同供體器官，在相同培養(yǎng)繁育條件下，不同處理間組培苗生根率、根系質(zhì)量及室外移栽成活率等差異不顯著。因此，基因型相同的不同供體器官繁殖的組培苗，對(duì)生根培養(yǎng)基的反應(yīng)相同。

3.5 不同處理對(duì)組培苗去除RSD、花葉病的影響

甘蔗宿根矮化病病原菌和病毒在植物體內(nèi)的傳播有兩種方式，一種是通過胞間連絲傳播，另一種是隨著營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)流在維管束系統(tǒng)傳播。莖尖分生組織生長(zhǎng)活躍，且維管束系統(tǒng)尚未形成，宿根矮化病菌和病毒顆粒幾乎不能到達(dá)生長(zhǎng)點(diǎn)。因此，莖尖培養(yǎng)脫毒效果與莖尖剝離大小有關(guān)，剝離越小，其脫毒效果越好，但成活率越低。本試驗(yàn)結(jié)果，甘蔗莖尖胚性細(xì)胞苗與莖尖苗均有去除RSD、花葉病的作用，腋芽苗不能去除RSD、花葉病。

4 討論

莖尖分生細(xì)胞是種質(zhì)細(xì)胞，從理論上看，通過莖尖分生細(xì)胞培養(yǎng)誘導(dǎo)胚性細(xì)胞團(tuán)是一條理想的快繁途徑，可獲得大量的胚狀體及再生植株。本研究表明，利用甘蔗莖尖誘導(dǎo)胚性細(xì)胞團(tuán)分化再生植株，不僅試管苗擴(kuò)繁增殖量遠(yuǎn)高于莖尖快繁和腋芽快繁，無(wú)性系變異不明顯，而且其脫毒效果好，能較徹底地去除供體中的甘蔗宿根矮化病和花葉病。因此，甘蔗莖尖體細(xì)胞培養(yǎng)誘導(dǎo)胚性細(xì)胞分化再生植株途徑解決了甘蔗目前脫毒試管苗生產(chǎn)中存在擴(kuò)繁量小、成本高的難題，有利于甘蔗脫毒健康種苗在生產(chǎn)中大面積推廣應(yīng)用。

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