劉 俊,李 倩,徐紹新,袁 銘,向 陽(yáng)

(武漢健民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司,湖北武漢430052)

腎葆顆粒的提取工藝研究*

劉 俊,李 倩,徐紹新,袁 銘,向 陽(yáng)

(武漢健民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司,湖北武漢430052)

目的:研究腎葆顆粒的最佳提取工藝。方法:采用正交試驗(yàn)方法,以干浸膏得率、正丁醇浸出物和淫羊藿苷含量為考核指標(biāo),優(yōu)選出最佳的腎葆顆粒水提和醇提工藝。結(jié)果:水提的最佳工藝為加8倍水,浸泡半小時(shí),水煮2次,每次2h;醇提的最佳工藝為加10倍量的70%乙醇回流2次,每次2h。結(jié)論:該提取工藝穩(wěn)定可行。

腎葆顆粒;淫羊藿苷;提取工藝;正交試驗(yàn)

腎葆顆粒是武漢健民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司研制開(kāi)發(fā)的一種中藥復(fù)方制劑,主要用于治療慢性腎功能衰竭,該藥由淫羊藿、黃芪、茯苓、大黃等藥材組成,其中黃芪、茯苓等藥材采用加水煎煮提取,淫羊藿、大黃等藥材采用乙醇提取。甙類、黃酮、多糖為方中的主要有效成分,試驗(yàn)選用部分藥材水煎煮提取,部分藥材乙醇回流提取[1],以正丁醇浸出物、淫羊藿苷的含量和干膏量[2]為指標(biāo),采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選最佳試驗(yàn)參數(shù)。

1 儀器和材料

HP—1100高效液相色譜儀(Agilent)、Agilent色譜工作站、CQ—250超聲波處理器(中國(guó)上海船舶電子設(shè)備研究所)、CS—501超級(jí)恒溫器(重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)、氧氣瓶(航天醫(yī)學(xué)工程研究所);淫羊藿苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所),所用試劑中除流動(dòng)相為色譜純級(jí),其余均為分析純級(jí),水為重蒸水;所用藥材購(gòu)自湖北省藥材公司,經(jīng)檢驗(yàn)均符合2010年版中國(guó)藥典一部規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 水提工藝條件的優(yōu)選

2.1.1 水提工藝正交試驗(yàn)

根據(jù)長(zhǎng)期的生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和查閱的相關(guān)文獻(xiàn)資料報(bào)道,影響提取效果的因素有以下四個(gè)方面:加水量、浸泡時(shí)間、提取次數(shù)、提取時(shí)間,故我們?cè)陬A(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以干膏重量和正丁醇提取物為考核指標(biāo),設(shè)立4個(gè)因素,3個(gè)水平,按照L9(34)正交表安排試驗(yàn),見(jiàn)表1:

表1 水提正交試驗(yàn)因素水平表

分別取處方量的黃芪、茯苓等藥材,按設(shè)定的方案進(jìn)行提取、濾過(guò),濾液合并濃縮成稠膏,60℃減壓干燥,稱重(W),參照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅩA浸出物測(cè)定法(熱浸法)[3]62,將干膏粉碎過(guò)二號(hào)篩,作為供試品。取供試品約2～4g,稱定重量(W1),置100ml錐形瓶中,精密加入正丁醇50ml,塞緊,稱定重量,靜置1h后,連接回流冷凝管,加熱至沸騰,并保持微沸1h。放冷后,取下錐形瓶,密塞,稱定重量,用正丁醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,用干燥濾器濾過(guò)。精密量取濾液25ml,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上揮干正丁醇,殘?jiān)?05℃的條件下恒溫干燥3h,移置干燥器中,放冷30min,然后迅速精密稱定重量(W2)。正丁醇浸出物量按下式計(jì)算:正丁醇浸出物重=2W2×(W/ W1)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2:

表2黃芪、茯苓水提正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表與結(jié)果

以正丁醇浸出物和干膏率為考核指標(biāo),因素對(duì)提取的影響順序均為 C>D>A>B,應(yīng)選A3B3C3D3,其中因素B的影響最小,B1、B2、B3對(duì)正丁醇浸出物和干膏率的影響均不大,為縮短工時(shí),提高效率,選擇B1較好。仔細(xì)分析其他三個(gè)因素, A2與A3、C2與C3、D2與D3對(duì)提取的影響差別也不大,從縮短工時(shí),節(jié)省能源考慮,選擇A2、C2、D2較好。最終我們確定的工藝為A2B1C2D2,即8倍水,浸泡30min,水煮2次,每次2h。

2.1.2 水提工藝驗(yàn)證

按照優(yōu)選的最佳水提工藝,取同批次相同量的黃芪、茯苓等藥材,進(jìn)行三次重復(fù)試驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表3:

從以上的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,三次試驗(yàn)的結(jié)果無(wú)明顯差異,說(shuō)明該工藝是科學(xué)合理的。

2.2 醇提工藝條件的優(yōu)選

2.2.1 醇提正交試驗(yàn)

根據(jù)查閱相關(guān)文獻(xiàn)和預(yù)試驗(yàn)的情況,從乙醇濃度、加醇量、提取次數(shù)、提取時(shí)間幾方面考查對(duì)淫羊藿、大黃等藥材的提取。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表4:

表4 淫羊藿、大黃正交試驗(yàn)因素水平表

分別取1倍處方量的淫羊藿、大黃等藥材,按設(shè)定的方案進(jìn)行提取,濾過(guò),濾液合并靜置12h,分取上清液濃縮成稠膏,減壓干燥,稱重,計(jì)算干膏量,依照《中國(guó)藥典》2010年版一部淫羊藿項(xiàng)下淫羊藿苷的含量測(cè)定方法,采用高效液相色譜法測(cè)淫羊藿苷含量[3]306-308,折算成總含量,具體方法和結(jié)果如下表:

(1)色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-2%冰醋酸溶液(52:48)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

(2)對(duì)照品溶液制備:精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量,加甲醇制成1ml含0.1mg的溶液,即得。

(3)供試品溶液的制備:取本品干膏粉約0.1g,精密稱定,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,密塞,超聲處理30min,放置至室溫,加甲醇定容至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

(4)測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,計(jì)算淫羊藿苷的含量,結(jié)果見(jiàn)表5、表6:

表5 淫羊藿、大黃提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表與結(jié)果

表6方差分析結(jié)果表

以淫羊藿苷含量為考核指標(biāo),因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要性為A〉B〉C〉D,應(yīng)選A3B3C2D3;以干膏量為考核指標(biāo),因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要性也為A〉B〉C〉D,應(yīng)選A3B3C3D3?？紤]到因素C不具有顯著性,從節(jié)約能源,節(jié)省工時(shí)考慮,選擇C2較好,最終將乙醇回流的工藝條件定為A3B3C2D3,即以10倍量的70%乙醇回流2次,每次2h。

2.2.2 醇提工藝驗(yàn)證

對(duì)優(yōu)選的試驗(yàn)方案進(jìn)行三次重復(fù)試驗(yàn),所用藥材均為同一批且均為一倍處方量,結(jié)果如表7:

表7醇提工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

結(jié)論:三個(gè)試驗(yàn)號(hào)的結(jié)果沒(méi)有明顯差異,表明該工藝是穩(wěn)定可行的。

3 討論

3.1 本方劑中的水提部分主要含有甙類、多糖等成分,具有補(bǔ)氣固表、利水滲濕、健脾寧心等功效,其中主要有效成分茯苓多糖具有增強(qiáng)肌體免疫力的作用。而茯苓等藥材難以建立含量測(cè)定,故采用正丁醇浸出物作為水提工藝的考核指標(biāo)更具有針對(duì)性。

3.2 淫羊藿為小檗科淫羊藿屬植物箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鮮淫羊藿的干燥地上部分,具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效,對(duì)腎、心血管系統(tǒng)有廣泛的藥理作用,藥理實(shí)驗(yàn)表明:淫羊藿苷(黃酮類)、淫羊藿總黃酮、多糖是淫羊藿的主要有效成分[4]。目前含淫羊藿制劑多以淫羊藿苷為質(zhì)控指標(biāo),故在研究中選擇淫羊藿苷作為醇提工藝的考核指標(biāo)是合理的。

[1]王洪銳,楊帆,陳健勇,譚新,梁惠明.正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)法優(yōu)選淫羊藿提取工藝條件[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2003,19(1):7-8.

[2]盧泓,莊珂.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選淫羊藿提取工藝研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,20(3):36-37.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(二部)[M].醫(yī)藥科技出版社,2010.

[4]王昌林,李呈,王粵新.淫羊藿及其有效成分的藥理研究概況[J].中國(guó)中藥雜志,1998,23 (3):183-185.

[責(zé)任審校:秦春娥]

R944.2

A

1672-1047(2010)04-0031-04

10.3969/j.issn.1672-1047.2010.04.08

2010-06-25

劉 俊,男,工程師。E-mail:whzylj@sohu.com.