趙東洋，李先榮，倪艷，陳藝文，李林

(山西省中醫(yī)藥研究院，山西太原 030012)

白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油β-環(huán)糊精包合前后性質(zhì)研究

趙東洋，李先榮*，倪艷，陳藝文，李林

(山西省中醫(yī)藥研究院，山西太原 030012)

混合揮發(fā)油;β－環(huán)糊精;GC－MS

目的:對(duì)β－環(huán)糊精包合前后的白術(shù)、莪術(shù)、連翹總混合油的化學(xué)成分及各油比例變化進(jìn)行研究分析。方法:采用薄層色譜法對(duì)包合物進(jìn)行定性鑒別，GC－MS對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定。結(jié)果:薄層鑒別試驗(yàn)，說(shuō)明包合物已形成;經(jīng)GCMS分析，包合前后混合油主要成分基本一致，但白術(shù)、莪術(shù)、連翹各比例發(fā)生變化。結(jié)論:白術(shù)、莪術(shù)、連翹總混合油經(jīng)β－環(huán)糊精包合后化學(xué)成分基本沒(méi)變，但比例發(fā)生了一定的改變。

揮發(fā)油是一類(lèi)具有芳香氣味、在常溫下能揮發(fā)的油狀液體的總稱(chēng)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油具有抗腫瘤、抗菌、驅(qū)蟲(chóng)及抗過(guò)敏作用，同時(shí)對(duì)中樞神經(jīng)、呼吸系統(tǒng)以及平滑肌等都有廣泛的藥理作用［1］。但揮發(fā)油性質(zhì)不穩(wěn)定，水溶性差，給臨床用藥帶來(lái)很大的不便，采用β－環(huán)糊精包合技術(shù)使揮發(fā)油在β－環(huán)糊精分子中形成一種可釋放的固體粉末，防止揮發(fā)性成分損失，便于提高穩(wěn)定性和制劑生物利用度。

據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，可獲知白術(shù)、莪術(shù)油具較強(qiáng)的抗腫瘤作用［2，3］，而連翹對(duì)抗腫瘤有一定的輔助作用［4］。將此三味藥按一定比例組成復(fù)方，其抗腫瘤效果明顯優(yōu)于各單味藥的抑瘤效果。筆者采用β－環(huán)糊精包合技術(shù)制備總揮發(fā)油包合物，能更大程度保留有效成分，并通過(guò)薄層色譜和GC－MS對(duì)混合揮發(fā)油包合前后的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行的研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器BP211D 十萬(wàn)分之一電子天平，德國(guó)賽多利斯公司;CX－150型超聲波清洗機(jī)，北京天海雙龍醫(yī)療設(shè)備公司;SH－4型磁力攪拌器，北京北德科學(xué)器材有限公司;80－2臺(tái)式低速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠;Agilent5973MS－6890GC氣相質(zhì)聯(lián)用儀，美國(guó)安捷倫公司。

1.2 試藥中藥白術(shù)、莪術(shù)、連翹均符合《中國(guó)藥典》2005年版法定標(biāo)準(zhǔn)(購(gòu)于山西省中醫(yī)藥研究院中藥房);β－環(huán)糊精(購(gòu)于廣東省郁南縣環(huán)糊精廠，純度98%以上);莪術(shù)醇對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)10185－0104);其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 包合物制備工藝研究

2.1.1 揮發(fā)油的提取取白術(shù)、莪術(shù)、連翹三味藥材分別粉碎置于圓底燒瓶中;加入相應(yīng)倍量的水，浸泡，振搖混勻。按照藥典方法［5］分別提取8 h、6 h、5.5 h，收集揮發(fā)油，用乙醚萃取數(shù)次，合并乙醚提取液，低溫?fù)]凈乙醚，即得到3種藥材的揮發(fā)油，密封保存。根據(jù)前期藥理試驗(yàn)最佳抑瘤效果配方比例即白術(shù)油－莪術(shù)油－連翹油為10∶4∶1，配置混合油溶液，避光保存，備用。

2.1.2 包合物的制備精密稱(chēng)取取2.1.1項(xiàng)下混合油1.5 g，加入無(wú)水乙醇1.5 mL，超聲至清亮，制成混合揮發(fā)油的無(wú)水乙醇溶液，備用。稱(chēng)取β－環(huán)糊精15 g，按其5倍量比例加入蒸餾水，加熱使溶解制成過(guò)飽和溶液，置磁力攪拌器上至規(guī)定溫度55℃，緩慢滴加混合揮發(fā)油無(wú)水乙醇溶液，邊加熱邊攪拌1.5 h，放冷，置冰箱冷藏24 h，抽濾，30～60℃石油醚洗至無(wú)揮發(fā)油氣味，低溫真空干燥后研磨，即得白色粉末狀的混合揮發(fā)油β－環(huán)糊精包合物。

2.2 薄層定性鑒別

稱(chēng)取包合物1 g，置離心管中，加乙酸乙酯5 mL，超聲處理15 min，離心，傾出上清液為乙酸乙酯提取液。殘?jiān)訜o(wú)水乙醇5 mL，超聲處理15 min，放置24 h，離心，傾出上清液為無(wú)水乙醇提取液。再精密稱(chēng)取2.1.1項(xiàng)下混合揮發(fā)油0.375 g于5 mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，作為對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯(9∶1)為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在110℃烘至斑點(diǎn)顯色［6］，結(jié)果，混合揮發(fā)油包合物的乙酸乙酯提取液無(wú)相應(yīng)斑點(diǎn)。包合物無(wú)水乙醇提取液與混合揮發(fā)油的乙酸乙酯對(duì)照液有相應(yīng)斑點(diǎn)，且包合前后混合油斑點(diǎn)個(gè)數(shù)一致，而且斑點(diǎn)色澤、大小基本一致，可以推斷包合前后混合油化學(xué)成分基本沒(méi)變。

2.3 揮發(fā)油包合前后GC－MS研究

2.3.1 色譜條件GC條件:HP－5(0.25 mm×30 m，0.25 μm)石英彈性毛細(xì)管柱色譜柱;采用程序升溫，初始60℃，保持3 min，以5℃/min升至120℃，然后以3℃/min升至225℃;進(jìn)樣口溫度為200℃;載氣為高純氦氣;進(jìn)樣量1.0 μL;分流比為20∶1;MS條件:EI離子源;電子能量70eV;接口溫度280℃;離子源溫度為230℃;回極桿溫度150℃;電子倍增電壓2300V;質(zhì)量掃描范圍29～350amu。

2.3.2 供試品的制備

2.3.2.1 包合物混合油溶液的制備稱(chēng)取包合物1 g 4份，分置4個(gè)15 mL具塞離心管中，加入無(wú)水乙醇10 mL，混勻，密封，超聲15 min后放置過(guò)夜。次日離心(2 500 r/min/10 min)，傾取上清液合并，置于50 mL圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，三氯甲烷定容，作為供試品［7］。2.3.2.2白術(shù)、莪術(shù)、連翹總混合油溶液制備精密稱(chēng)取2.1.1項(xiàng)下白術(shù)－莪術(shù)－連翹(10∶4∶1)混合油0.75 g，用三氯甲烷定容于10 mL量瓶中，精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作為供試品。

2.3.3 陰性樣品溶液制備

a)缺連翹混合油溶液:按比例精密稱(chēng)取白術(shù)－莪術(shù)(10∶4)0.7 g，用三氯甲烷定容于10 mL量瓶中，精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作為陰性白術(shù)、莪術(shù)混合油。

b)缺莪術(shù)混合油溶液:按比例精密稱(chēng)取白術(shù)－連翹(10∶1)0.55 g，同上法制備，作為陰性白術(shù)、連翹混合油。

c)缺白術(shù)混合油溶液:按比例精密稱(chēng)取莪術(shù)－連翹(4∶1)0.25 g，同上法制備，作為陰性莪術(shù)、連翹混合油。

2.3.4 對(duì)照藥材揮發(fā)油溶液制備分別精密稱(chēng)取白術(shù)油、莪術(shù)油、連翹油0.5 g、0.2 g、0.05 g于10 mL量瓶中，三氯甲烷定容。分別精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作為對(duì)照白術(shù)油、莪術(shù)油和連翹油。

2.3.5 GC－MS結(jié)果與分析按上述條件對(duì)上述樣品進(jìn)行GC－MS分析，并用質(zhì)譜圖庫(kù)進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢索和面積歸一化法計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)圖1～8和表1。利用GC－MS對(duì)白術(shù)、莪術(shù)、連翹總混合油及其包合物混合油進(jìn)行分析，分離鑒定了11個(gè)化合物，包合前后化學(xué)成分基本沒(méi)變。通過(guò)對(duì)圖1～圖8的混合油、包合油、對(duì)照藥材揮發(fā)油及其陰性樣品混合油液GC－MS圖分析比對(duì)，可知1、2、3號(hào)峰代表連翹;5、8、10代表莪術(shù);4、6、7、9、11代表白術(shù)。也可以得出連翹油包合后相對(duì)含量有比較明顯地下降;莪術(shù)油含量有所增加;白術(shù)油的相對(duì)含量增加幅度較大。通過(guò)β－環(huán)糊精包合前后，混合油中白術(shù)、莪術(shù)和連翹各油的比例發(fā)生了一定程度的改變。

圖1 白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油

圖2 包合物混合油

圖3 連翹油

圖4 白術(shù)、莪術(shù)油

3 討論

3.1 薄層定性鑒別試驗(yàn)證明了包合物已形成，包合前后無(wú)論是斑點(diǎn)的個(gè)數(shù)、位置，還是大小和色澤基本沒(méi)有改變，可以推斷混合油包合前后主要成分無(wú)明顯變化。

圖5 莪術(shù)油

圖6 白術(shù)、連翹油

圖7 白術(shù)油

圖8 莪術(shù)、連翹油

表1 包合前后保留時(shí)間和相對(duì)百分含量

3.2 經(jīng)GC－MS分析，更進(jìn)一步證明包合前后的混合油化學(xué)成分基本沒(méi)變，但混合油中白術(shù)、莪術(shù)、連翹油組成比例發(fā)生了改變。白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油是多組分組成的復(fù)方，化學(xué)成分復(fù)雜，各組分化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)差別較大，因此，β－環(huán)糊精對(duì)混合油中不同成分包合能力可能有所差異。經(jīng)β－環(huán)糊精后，莪術(shù)油相對(duì)含量增加，白術(shù)油含量增加較明顯，而連翹油下降比例較大。這種變化也不排除是由于混合油復(fù)方中連翹含量很低，相同分析方法，連翹誤差較大所引起。再者，文章分離鑒定了大約混合油中85%的主要成分，而其余成分包合前后的變化情況及其對(duì)混合油的比例是否有影響此文章還未做研究，有待進(jìn)一步考察。而經(jīng)β－環(huán)糊精包合，白術(shù)、莪術(shù)、連翹混合油中各油比例的改變是否會(huì)對(duì)混合油包合物抑瘤率有顯著影響則是下一步研究的目標(biāo)。

［1］滑艷，鄧雁如，汪漢卿.各種揮發(fā)油的藥理活性及在醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2003，14(5):467－470.

［2］張宗，張鴻翔，史天良，等.白術(shù)揮發(fā)油抗腫瘤作用的研究［J］.腫瘤研究與臨床，2006，18(12):799－800.

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［6］宋洪濤，郭濤，顏秀濤，等.肉桂揮發(fā)油β－環(huán)糊精包合物的制備工藝研究［J］.中草藥，2000，31(11):818－840.

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1001－1528(2010)07－1243－04

2009－10－14

山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(20080311054－2)

趙東洋(1985－)，女，在讀研究生，研究方向:從事中藥物質(zhì)基礎(chǔ)與新劑型研究。Tel:15834075155 E－maiL:zhaodongyang0626@ 126.com

*通訊作者:李先榮(1953－)，教授，博士生導(dǎo)師。Tel:(0351)4668040 E－maiL:XRLi－01@163.com