陳石，張德平

(1.南京市胸科醫(yī)院呼吸科，江蘇南京 210029;2.南京市鼓樓醫(yī)院呼吸科，江蘇南京 210008)

研究報告

酸吸入致大鼠肺纖維化初步探索

陳石1，張德平2

(1.南京市胸科醫(yī)院呼吸科，江蘇南京 210029;2.南京市鼓樓醫(yī)院呼吸科，江蘇南京 210008)

目的研究實驗性酸吸入與大鼠肺間質纖維化的相關性及其可能的作用機制，并與傳統(tǒng)的博來霉素致纖維化作一比較。方法健康雄性SD大鼠120只，隨機分為正常對照組、博來霉素組、高濃度鹽酸組、中濃度鹽酸組和低濃度鹽酸組，每組24只。博來霉素組氣管內一次性注入博來霉素誘導纖維化，鹽酸組每周氣管內滴注不同濃度鹽酸1次，正常對照組每周氣管內滴注生理鹽水1次。各組分別于造模后第7、14、28及42天隨機處死6只，取肺組織行HE、Masson染色評價肺組織病理變化，用RT－PCR方法測定肺組織轉化生長因子β1(TGF－β1)的mRNA表達，用免疫組化的方法半定量測定I型膠原蛋白、結締組織生長因子(CTGF)的表達。結果鹽酸組肺泡炎程度始終顯著高于對照組，在開始2周內達到一個高峰，隨后仍舊維持一個相對較高狀態(tài)，28 d達到或者超過博來霉素組水平。鹽酸組纖維化程度隨時間逐漸增強，顯著高于對照組，但始終未超過博來霉素組。鹽酸組肺組織TGF－β1mRNA在28 d時達到博來霉素組水平，至42 d時全面超過博來霉素組水平。博來霉素組大鼠各時間點肺組織I型膠原表達均顯著高于正常陰性對照組及3個鹽酸組。高、中濃度鹽酸組CTGF表達從14 d起高于正常陰性對照組，且隨滴注次數(shù)及時間增加而增強。結論本實驗從一個角度反映了經(jīng)常性胃食管酸反流引起的酸吸入與肺纖維化的相關性，為揭示胃食管反流病(GERD)與特發(fā)性肺纖維化(IPF)的關系提供了初步的實驗室證據(jù)。

肺纖維化;胃食管反流病;鹽酸;博來霉素

胃食管反流病(GERD)與多種呼吸系統(tǒng)疾病有關，如慢性咳嗽、哮喘、阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征、慢性阻塞性肺疾病［1－5］。但它對肺部的纖維化及損傷有時卻被忽略。而近年來隨著24h食管pH監(jiān)測儀等先進儀器的應用，讓人們逐漸認識到胃食管反流可能對特發(fā)性肺纖維化的影響。從1976年Mays等［6］第一次報道了臨床上GERD與肺纖維化的相關性至今，有多篇文獻報道特發(fā)性肺纖維化(IPF)與GERD的相關性［7－9］。最近Raghu［10］進行了一項類似的統(tǒng)計研究，65名確診為IPF的患者，GERD的發(fā)病率高達87%。因此人們推測GERD引起的酸吸入可能與肺纖維化存在某種聯(lián)系［30］。

Popper等［11］報道了向動物氣管內滴入酸可以引起動物肺損傷及纖維化。在酸性條件下肺泡細胞可能被酸破壞，使肺表面活性物質的產(chǎn)生減少，加之富含蛋白成分的血漿滲出，可進一步加重肺組織損傷及纖維化程度。

但至今尚沒有一種動物實驗從病理、蛋白表達、mRNA基因水平等多角度揭示實驗酸吸入引起肺纖維化的動態(tài)演變過程。本實驗分別用病理切片分析、免疫組化蛋白半定量鑒定、PCR等多種方法，觀察鹽酸(胃酸的主要成分)對肺部造成的損傷，以及它和肺纖維化之間可能存在的相關性進行研究，探討二者之間聯(lián)系可能的病理生理機制。

1 材料與方法

1.1 試劑

博來霉素A5針劑(天津太河制藥有限公司)、鹽酸(南京化學試劑有限公司)、半定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT－PCR)試劑、Trizol(美國Invitrogen公司)、SuperscriptTMⅢReverse Transcriptase (SuperscriptTMIII逆轉錄酶)試劑盒(美國Invitrogen公司)、Oligo(dT)(美國Invitrogen公司)、PCR試劑盒(TaKaRa TaqTM，大連寶生物工程有限公司)、鼠轉化生長因子β1(TGF－β1)單克隆抗體(美國R＆D公司)、大鼠CTGF單克隆抗體(美國Santa Cruz公司)，I型膠原單克隆抗體(美國sigma公司產(chǎn)品)、PV－6000二步法免疫組化試劑盒(北京中衫金橋生物公司)。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的建立和分組:健康雄性SD大鼠120只，體重180～200 g，南京大學模式動物研究所提供【SCXK(蘇)2005－0002】。隨機分為5組:正常對照組(N組)、博來霉素組(B組)、高濃度鹽酸組(H組)、中濃度鹽酸組(M組)及低濃度鹽酸組(L組)，每組24只。鹽酸臨用前用蒸餾水稀釋成0.2、0.1及0.05 mol/L 3個濃度組，每周給予3個鹽酸組氣管內滴注1次(2 m L/kg)。正常組每周氣管內給予等體積生理鹽水1次。博來霉素組一次性氣管內給予博來霉素(5 mg/kg)。

1.2.2 取材:各組分別在造模后第7、14、28及42天隨機處死6只大鼠。氯胺酮腹腔注射麻醉后腹主動脈放血處死大鼠，開胸取肺組織，用生理鹽水將肺組織漂洗數(shù)次，右肺上葉經(jīng)4%甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色、Masson三色染色及免疫組織化學染色。

1.2.3 肺組織病理分析:肺組織經(jīng)不同濃度酒精常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片后，分別給予HE和Masson三色染色。根據(jù)Szapiel等［12］的方法評價肺泡炎和肺纖維化的程度。肺泡炎分4級:無肺泡炎(－)，評0分;輕度肺泡炎(+)，評1分，表現(xiàn)為單核細胞浸潤使肺泡隔增寬，僅限于局部和近胸膜部，面積小于全肺的20%，肺泡結構正常;中度肺泡炎(++)，評2分，受累面積占全肺的20%～50%，近胸膜部較重，重度肺泡炎(+++)，評3分，面積大于50%，偶見肺泡腔內有單核細胞及出血造成實變。肺纖維化分4級:無纖維化(－)，評0分;輕度纖維化(+)，評1分，受累面積小于20%，纖維化累及胸膜及胸膜下的肺間質，肺泡的結構發(fā)生紊亂;中度纖維化(++)，評2分，病變范圍約占全肺的20%～50%，纖維化區(qū)域從胸膜延伸，仍屬局部性;重度纖維化(+++)，評3分，病變范圍大于50%，并有融合，可見大小不等的囊氣腔。

1.2.4 肺組織中TGF－β1－mRNA的表達:采用半定量RT－PCR測定，Trizol法提取肺組織總RNA后，逆轉錄合成cDNA進行PCR擴增。引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，序列如下:(1) TGF－β1:上游5′－GCTAATGGTGGACCGCAAC－3′，下游:5′－GCAGTGAGCACTGAAGCGA－3′，目的片段長度340 bp;(2)β－actin:上游:5′－GAGACCTTCAA CACCCCAGC－3′，下游:5′－CACAGAGTACTTGCGCT CAG－3′，目的基因片段長度654 bp。PCR反應擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳(含0.5 μg/m L溴化乙啶)后，凝膠成像及分析系統(tǒng)下掃描分析，用TGF－β1及β－actin擴增產(chǎn)物的吸光度比值表示每個標本的相對mRNA水平。

1.2.5 肺組織中CTGF與I型膠原的表達測定:采用免疫組化EnVision二步法，分別按CTGF與I型膠原檢測試劑盒說明書進行，

1.2.6 結果分析:免疫組化結果以肺組織中出現(xiàn)棕黃色為陽性顯色，并用Image－pro plus專業(yè)圖像分析軟件系統(tǒng)(美國Media Cybernetics公司)分別對CTGF與I型膠原的表達進行定量分析，在400倍視野下，每張切片隨機選取5個視野，測定積分吸光度來代表CTGF的表達量，在100倍視野下，每張切片隨機選取5個視野，測定積分吸光度來代表I型膠原的表達量。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 肺組織病理學改變

2.1.1 肺泡炎程度比較:正常陰性對照組(N組)肺泡壁薄，結構正常，無特殊改變。博來霉素陽性對照組(B組)氣管內滴注博來霉素7d后，大鼠肺泡間隔及肺泡內即出現(xiàn)明顯的炎癥反應，可見大量的炎癥細胞浸潤，顯著強于正常陰性對照組(N組)(P＜0.01);此后隨時間推移，炎癥細胞減少，逐漸以纖維化改變?yōu)橹?，可見多灶性，大小不等的纖維化區(qū)域。而在3個鹽酸組肺泡炎癥在開始兩周內達到一個高峰，隨后仍舊維持一個相對較高狀態(tài)，自28 d達到或者超過博來霉素陽性對照組(B組)水平。各組肺泡炎程度見表1。

表1 各組大鼠肺泡炎評分結果(±s)Tab.1 The alveolitis scores in each group of rats(±s)

表1 各組大鼠肺泡炎評分結果(±s)Tab.1 The alveolitis scores in each group of rats(±s)

注:與N組比較，★P＜0.01;與L組比較，▲P＜0.05;與H組比較，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01Note:Compared with the normal group，★P＜0.01;Compared with the group L，▲P＜0.05;compared with the group H，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01

組別(Group)7 d 14 d 28 d 42 d N組(Normal group)0.17±0.41 0.33±0.52 0.17±0.41 0.00±0.00 B組(Bleomycin group)2.17±0.75★▲2.00±0.89★1.17±0.75★◆◆1.00±0.63★◆◆H組(Group H)2.17±0.75★▲2.33±0.52★2.17±0.41★2.00±0.00★M組(Group M)1.50±0.55★1.67±0.52★1.67±0.52★1.50±0.55★L組(Group L)1.33±0.82★1.83±0.98★1.50±0.55★◆1.33±0.52★◆

2.1.2 纖維化程度比較:Masson三色染色判斷肺組織纖維化程度，正常陰性對照組(N組)大鼠肺組織含有少量膠原纖維，未見特殊異常改變。博來霉素陽性對照組(B組)大鼠早期即出現(xiàn)肺間質纖維化，肺間質纖維化逐漸加重，至28d達到頂峰，后逐漸有所下降。鹽酸組早期纖維化程度低，隨時間推移和滴注鹽酸次數(shù)的增加，纖維化程度逐漸增強，雖然沒有達到博來霉素陽性對照組的纖維化程度，但顯著強于正常陰性對照組(P＜0.01)，但3個鹽酸組的纖維化程度都沒有超過博來霉素陽性對照組。結果見表2和圖1(彩插8)。

表2 各組大鼠肺纖維化評分結果(±s)Tab.2 The pulmonary fibrosis scores of rats in each group(±s)

表2 各組大鼠肺纖維化評分結果(±s)Tab.2 The pulmonary fibrosis scores of rats in each group(±s)

注:與N組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01;與B組比較，■P＜0.05;與H組比較，◆P＜0.05Note:Compared with the normal group，★P＜0.05，★★P＜0.01;Compared with the bleomycin group，■P＜0.05;Compared with the group H，◆P＜0.05

組別(Group)7d 14d 28d 42d N組(Normal group)0.00±0.00 0.00±0.00 0.17±0.41 0.33±0.52 B組(Bleomycin group)1.33±0.52★★2.00±0.63★★2.50±0.55★★1.83±0.41★★H組(Group H)0.67±0.52★★■1.00±0.63★★■1.33±0.52★★■1.67±0.52★★M組(Group M)0.67±0.52★★■0.83±0.75★★■1.17±0.41★★■1.50±0.55★★L組(Group L)0.50±0.55★■0.67±0.52★■0.83±0.75★★■1.00±0.63★★■◆

2.2 肺組織中TGF-β1m RNA的表達

博來霉素陽性對照組(B組)TGF－β1mRNA在7、14 d表達顯著高于其他各組(P＜0.05)，但表達水平逐漸下降，至第28天時與正常陰性對照組(N組)差異無顯著性(P＞0.05)。3個鹽酸組在第7、14天兩個時間點顯著低于博來霉素陽性對照組(P＜0.05)，自第28天起3個濃度鹽酸組肺組織TGF－β1 mRNA表達水平與博來霉素陽性對照組差異無顯著性(P＞0.05)，42 d時3個濃度鹽酸組TGF－β1 mRNA表達水平已經(jīng)高于博來霉素陽性對照組(P＜0.05)。結果見表3、圖2。

表3 大鼠肺組織中TGF－β1mRNA的表達結果(±s)Tab.3 The expression of TGF－β1 mRNA in the rat lung tissues(±s)

表3 大鼠肺組織中TGF－β1mRNA的表達結果(±s)Tab.3 The expression of TGF－β1 mRNA in the rat lung tissues(±s)

注:與N組比較，*P＜0.05;與B組比較，▲P＜0.05;與H組比較，◆P＜0.05Note:Compared with the normal group，*P＜0.05;Compared with the bleomycin group，▲P＜0.05;Compared with the group H，◆P＜0.05

組別(Group)7d 14d 28d 42d N組(Normal group)0.46±0.12 0.44±0.08 0.43±0.16 0.45±0.10 B組(Bleomycin group)0.86±0.24*0.95±0.18★0.73±0.13*0.47±0.11 H組(Group H)0.62±0.06*▲0.70±0.08*▲0.82±0.11*0.87±0.11*▲M組(Group M)0.58±0.08▲0.62±0.09*▲0.72±0.21*0.79±0.22*▲L組(Group L)0.53±0.11▲0.59±0.16*▲0.63±0.12*◆0.72±0.06*▲

注:Maker:DL2000 marker;B:博來霉素陽性對照;N:正常對照組;H:高濃度鹽酸組;M:中濃度鹽酸組; L:低濃度鹽酸組;β－act:內參圖2各實驗組大鼠肺組織28 d時TGF－β1 mRNA的表達Note:Maker:DL2000 marker;B:Bleomycin group;N:Normal group;H:H igh－dose HCl group;M:Middle－dose HCl group;L:Low－dose HCl group;β－act:Internal standardFig.2 The expression of TGF－β1 mRNA in the rat lung tissues at 28 d

2.3 肺組織CTGF的表達

CTGF是調節(jié)成纖維細胞生長和ECM合成的宿主因子，是TGF－β1促纖維化效應的下游介質，在肺纖維化過程中發(fā)揮重要作用。文獻報道CTGF蛋白在肺纖維化中表達顯著增加，與肺間質纖維化的程度密切相關。本實驗研究表明CTGF在正常陰性對照組(N組)肺組織均為弱表達或不表達。博來霉素陽性對照組(B組)CTGF的表達在從7 d開始出現(xiàn)升高，14 d達到高峰，以后出現(xiàn)下降。高、中濃度鹽酸組(H、M組)CTGF表達隨時間增加而增強，自42d起與博來霉素組差異無顯著性(P＞0.05)。結果見表4及圖3(彩插8)。

表4 不同時間點各組大鼠肺組織CTGF表達(A值，±s)Tab.4 The expression of CTGF in rat lung tissue at different time points in each group(A，±s)

表4 不同時間點各組大鼠肺組織CTGF表達(A值，±s)Tab.4 The expression of CTGF in rat lung tissue at different time points in each group(A，±s)

注:與N組比較，*P＜0.05;與B組比較，▲P＜0.05;與H組比較，◆P＜0.05Note:Compared with the normal group，*P＜0.05;Compared with the bleomycin group，▲P＜0.05;Compared with the group H，◆P＜0.05

組別(Group)7 d 14 d 28 d 42 d N組(Normal group)1269.67±427.30 1388.83±200.71 1415.17±376.54 1313.17±434.63 B組(Bleomycin group)3906.83±798.86*4873.67±730.18*3887.17±728.11*3143.17±598.97*H組(Group H)1839.50±473.74▲2233.33±616.78*▲2646.33±861.03*▲3044.00±649.84*M組(Group M)1759.83±270.66▲1784.00±313.46▲2325.83±684.07*▲2739.67±634.44*L組(Group L)1469.50±301.67▲1657.67±314.71▲◆1961.00±320.52▲2408.50±606.19*▲

2.4 肺組織I型膠原的表達

由于纖維化的肺中過度的TGF－β1和CTGF的表達，導致I型和III型膠原的增生，膠原在肺間質中沉積，使肺組織基質結構紊亂形成纖維化。本實驗結果顯示，博來霉素陽性對照組(B組)大鼠各時間點肺組織I型膠原表達均顯著高于正常陰性對照組(N組)(P＜0.05)，與肺組織病理形態(tài)學改變相一致;高中低3個濃度鹽酸組(H、M、L組)各時間點I型膠原表達始終低于博來霉素組(P＜0.05)。中低濃度鹽酸組自28d起I型膠原纖維表達強于正常陰性對照組(P＜0.05)，但始終沒有達到高濃度鹽酸組及博來霉素組的I型膠原表達程度。結果見表5、圖4(彩插8)。

表5 不同時間點各組大鼠肺組織I型膠原表達(I A值，×103，±s)Tab.5 The expression of collagen type I in the rat lung tissues at different time points in each group(I A，×103，±s)

表5 不同時間點各組大鼠肺組織I型膠原表達(I A值，×103，±s)Tab.5 The expression of collagen type I in the rat lung tissues at different time points in each group(I A，×103，±s)

注:與N組比較，*P＜0.05;與B組比較，▲P＜0.05;與H組比較，◆P＜0.05Note:Compared with the normal group，*P＜0.05;Compared with the bleomycin group，▲P＜0.05;Compared with the group H，◆P＜0.05

組別(Group)7 d 14 d 28 d 42 d N組(Normal group)14.12±5.31 15.51±4.66 14.69±5.86 18.49±4.94 B組(Bleomycin group)39.91±13.73*58.31±21.37*82.99±11.53*79.95±10.97*H組(Group H)21.84±7.24▲37.28±13.67*▲46.72±15.96*▲60.12±10.19*▲M組(Group M)18.65±6.32▲22.63±11.25▲◆33.03±3.67*▲◆40.37±14.89*▲◆L組(Group L)14.20±5.23▲16.80±7.77▲◆28.36±11.22*▲◆36.82±8.79*▲◆

3 討論

本實驗通過反復多次微量低濃度酸注入，既模擬胃食管反流引起的微量誤吸，又可以觀察酸對肺纖維化發(fā)生發(fā)展所起的作用以及纖維化程度與酸的濃度的關聯(lián)性，防止了肺水腫的發(fā)生。通過觀察7、14、28及42 d四個時間點的肺組病理學改變、TGF－β1mRNA、TGF－β下游因子CTGF的表達、I型膠原纖維定量來了解實驗性酸吸入對肺組織的真正影響。

博來霉素誘導的肺纖維化模型雖然無法完全模擬人類IPF的慢性纖維化進展過程［13］，但由于目前尚無更好的動物模型，仍是目前公認的和人類肺間質纖維化最相似的動物模型［14－15］。因此本實驗選用博來霉素造模作為陽性對照組，生理鹽水組作為陰性對照組，與3個不同濃度的鹽酸組進行比較。

肺組織病理結果顯示，正常對照組肺泡結構正常，而博來霉素組大鼠早期即出現(xiàn)肺間質纖維化，后期隨時間推移有所下降，與文獻報道基本相符［16］。而3個鹽酸組的肺泡炎呈逐漸增強趨勢，從28 d起全面超過博來霉素組。這表明3個鹽酸組的肺泡炎從范圍和程度上不斷增加。并隨時間推移和滴注鹽酸次數(shù)的增加，纖維化程度逐漸增強。

在參與肺纖維化的細胞因子中，TGF－β是作用最為關鍵的細胞因子［17］。其中TGF－β1與肺纖維化關系最為密切，在肺纖維化發(fā)病機制中起著重要作用。CTGF是調節(jié)成纖維細胞生長和ECM合成的宿主因子，是TGF－β1促纖維化效應的下游介質。文獻報道［18］CTGF蛋白在肺纖維化中表達顯著增加，與TGF－β1、I型膠原蛋白表達量呈正相關。本研究發(fā)現(xiàn)，3個濃度鹽酸組肺組織TGF－β1mRNA表達顯著高于正常對照組，且有逐漸增加的趨勢，至第28天和博來霉素組無顯著性差異，CTGF表達規(guī)律也與此類似，這充分說明鹽酸對纖維化形成有一定的促進作用，可以從基因水平上調肺組織內的TGF－β1及其下游介質CTGF蛋白的表達，從而促進肺纖維化發(fā)生發(fā)展。

由于TGF－β1和CTGF的表達增加，導致I型膠原的增生［19］，膠原在肺間質中沉積，使肺組織基質結構紊亂形成纖維化［20］。本實驗結果顯示，高中低3個濃度鹽酸組各時間點I型膠原表達都未達到博來霉素組水平。但都有表達增加，體現(xiàn)了反復酸吸入致纖維化并逐漸增強的趨勢。

本實驗結果表明，微量酸造成的纖維化速度較為緩慢，但由于反復不斷的鹽酸滴注刺激引起異常及過度修復，使纖維化進程呈進行性加重，可能比博來霉素更好的模擬肺纖維化的病程，更加符合生理學演進和疾病發(fā)生發(fā)展過程。

由于實驗條件和實驗周期限制，雖然鹽酸組的纖維化程度得到體現(xiàn)，但實驗性酸吸入的濃度、頻率與天然的胃酸濃度以及GERD胃食管反流的頻率尚存在差距。同時，還應該認識到:肺纖維化的發(fā)病機制錯綜復雜，多種因素的參與并相互作用，還需要用各種手段監(jiān)測更多的相關因子來觀察酸對大鼠肺部的具體作用及其與纖維化之間的關系。

綜上所述，實驗性酸吸入可導致肺纖維化。本實驗從一個角度反映了經(jīng)常性胃食管酸反流引起的酸吸入與肺纖維化的相關性，雖然并不能完全模擬重建胃食管反流引起酸吸入對肺部的真正影響，但通過本實驗可以更好地為揭示人類GERD與IPF的關系提供了初步的實驗室證據(jù)。

(本文圖1、3、4見彩插8。)

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Correlation of Experim ental Acid Aspiration and Pulm onary Fibrosis in Rats

CHEN Shi1，ZHANG De－ping2
(1.Nanjing Chest Hospital，Nanjing 210029，China;2.The Affiliated Drum Tower Hospital，Nanjing University Medical College.Nanjing 210008)

ObjectiveTo study the pathology and possible mechanism of experimental hydrochloric acid(HCl) inhalation induced pulmonary fibrosis in rats and make a comparison with traditional bleomycin－induced fibrosis.M ethods 120 male SD rats were random ly divided into nomal control group，bleomycin group，high－dose HCl group，middle－dose HCl group and low－dose HCl group.The bleomycin group was intratracheally injected bleomycin once to induce pulmonary fibrosis.The three HCl groups were intratracheally injected HCl once per week.The control group was given saline in the same way.Six rats of each group were random ly sacrificed on day 7，14，28 and 42，respectively.The histological changes of the lung tissue were evaluated by HE and Masson's trichrome staining.The mRNA expression of transforming growth factor－β1(TGF－β1)was assayed by RT－PCR，and the CTGF and collagen type I protein expressions were analyzed by immunohistochemistry.ResultsThe hydrochloride group had a significantly higher extent of alveolitis(P＜0.01)，reaching a peak at the first 2 weeks，and then still maintained at a relatively high status，and from 28 d to reach or exceed that in the bleomycin group.Hydrochloric acid group fibrosis gradually increases over time，significantly higher(P＜0.01 or 0.05)，but not consistently exceeded that in the bleomycin group(P＞0.05).Similar results appeared in the TGF－β1mRNA，I－collagen and CTGF expression in immunohistochemical assessment.ConlusionThe results of this studyindicate from the point of view a relationship between recurrent gastro－esophageal acid reflux caused by acid inhalation and pulmonary fibrosis，and provides preliminary experimental evidence for the relationship between gastroesophageal reflux disease(GERD)and idiopathic pulmonary fibrosis(IPF).

Pulmonary fibrosis;GERD;Hydrochloric acid;bleomycin;Rat

R－33

A

1005－4847(2010)04－0335－06

2009－09－27

江蘇省醫(yī)學135重點人才資助項目(編號:RC2001005)。

陳石(1981－)，男，研究方向:間質性肺病。E－mail:cshonest1981@sina.com

張徳平，E－mail:dpzhang207@yahoo.com.cn