李勤勞 陜西電子四零九醫(yī)院(寶雞 721006)

1 實驗材料 1.1 人血漿及試劑 人空腹血漿、采自健康自愿者。加入盛有 3.28%枸櫞酸鈉溶液(抗凝劑)的塑料試管中,血漿與抗凝劑的比例為 9:1,輕輕混勻,離心(800rpm)5min,吸出上層米黃色懸液即為富血小板血漿(PRP)。然后再離心(3000 rpm)8min,吸取上清液,即得貧血小板血漿(PPP)。

1.2 藥品和試劑 三七總皂甙制成每毫升含三七總皂甙 8.75mg[1]。用 0.2mol/L磷酸緩沖液稀釋 2倍、20倍和 200倍,按下述方法加入比色杯,藥物濃度即依次為 2mg/mL,0.2mg/mL、 0.02mg/mL。 5-腺苷二磷酸二鈉鹽(ADP)[上海伯奧生物科技公司(進口分裝)批號:091028],用 0.2mol/L磷酸緩沖液配成1mg/10mL的 ADP溶液。血塞通注射液,每支 10 mL,含三七總皂甙 250 mg(黑龍江省珍寶島制藥有限公司,批號:091208)。血管膠原的制備:處死家兔,分離胸、腹動脈血管,用蒸餾水沖洗干凈,置于勻漿器中,反復(fù)研磨,加蒸餾水制成約 5%的血管勻漿,3000 rpm離心 10 min,吸取上清液,備用。

1.3 主要設(shè)備 TYXN-96多功能智能血液凝聚儀(上海海特醫(yī)學(xué)設(shè)備有限公司制造)。

2 試驗方法 取兩只比色杯,分別加入貧血小板血漿(PPP)和富血小板血漿 (PRP)各 200 mL,置聚集儀中 37℃預(yù)熱 5min,用 PPP杯校“0”,測定 PRP中的血小板數(shù),然后用 PPP稀釋 PRP,調(diào)整血小板數(shù)至30～40萬 /mm3。 試驗時,取兩只比色杯,分別加入PPP、調(diào)整好血小板數(shù)的 PRP各 200 μL,在兩只比色杯中同時加入供試藥液 10 μL,在 PRP杯中放攪拌小棒 1只。置預(yù)熱孔內(nèi)預(yù)熱 5min,用 PPP杯調(diào)聚集儀“0點后”,將 PPP杯放入聚集儀測定孔中,加入 1mg/10mL的 ADP磷酸緩沖液溶液或 5%的血管勻漿10mL,記錄 5min的聚集曲線。以 1min聚集度(PAG1)、5min聚集度 (PAG5)、最大聚集度 (M A)和最大聚集時間(TM A)為指標,分別測定不同濃度的三七總皂甙對 ADP,血管膠原誘導(dǎo)人血小板聚集性的影響。藥物濃度(mg/mL)以在測量杯中的濃度表示。對照組以磷酸緩沖液代替藥液。

3 結(jié)果 試驗所得數(shù)據(jù)用七值法進行顯著性檢驗,比較各藥物組與對照組的差異,結(jié)果見表 1,表 2。

表1結(jié)果表明:三七總皂甙(2mg/mL)能抑制ADP誘導(dǎo)的人血小板聚集,明顯降低 PAG1、PAG5和MA,TM A明顯縮短,與對照組比較差異有顯著性(P＜0.01)。最大聚集密度時間后,還有解聚現(xiàn)象。

表1 血塞通對 ADP誘導(dǎo)人血小板聚集性的影響

表2 血塞通對膠原誘導(dǎo)人血小板聚集性的影響

4 討 論 本研究所用三七總皂甙是從三七(Panax.pseudo— ginseng Wall.var)的根中提取分離制得,據(jù)報道三七能明顯增加冠狀動脈血流量,使心肌耗氧量減少,又有降低動脈壓及減慢心率的作用,使心臟工作量減低[2]三七總皂甙具有降低血小板血栓素A2[3]等藥理作用,本實驗證明,血塞通注射液能不同程度地抑制 ADP和血管膠原誘導(dǎo)的人血小板聚集,其抗血小板聚集作用與拮抗血小板活化因子(PAF)有關(guān)[4]。上述作用也是血塞通注射液在臨床用于治療中風偏癱,淤血阻絡(luò)動脈粥狀硬化性血栓性腦梗塞、腦栓塞等的中藥藥理學(xué)基礎(chǔ)。

[1]陳 奎.中藥藥理研究方法 [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993:581.

[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大詞典 [M].上冊.上海人民出版社,1977:54.

[3]沈映君.中藥藥理學(xué) [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:598.