湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院李君李俊雅吳梅青

南五味子不同生長期鞣質(zhì)含量的測定

湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院李君李俊雅吳梅青

南五味子來源于木蘭科植物科植物華中五味子Schisandra sphenantheraRehd.etWils.的干燥成熟果實(shí)。本品能益氣生津、斂肺滋腎、止瀉、澀精、安神，可治療久咳虛喘、津少口干、久瀉、健忘失眠等癥，是中醫(yī)臨床常用的名貴傳統(tǒng)藥物之一。本文以南五味子中鞣質(zhì)含量變化為依據(jù)，用紫外-可見分光光度法結(jié)合干酪素法測定不同生長期南五味子中鞣質(zhì)的含量。

一、儀器與試藥

Aglient8455型紫外-可見分光光度計(jì)，HS6150D超聲提取儀（昆山市超聲儀器有限公司），電子天平（BS224S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。南五味子樣品由貴州GAP基地提供，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院生藥教研室陳隨清教授鑒定為木蘭科植物華中五味子的果實(shí)。沒食子酸對照品（中國藥品生物制品檢定所），干酪素（北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠），無水碳酸鈉。

二、方法與結(jié)果（本實(shí)驗(yàn)應(yīng)避光操作）

1.對照品溶液的制備。精密稱取沒食子酸對照品50mg，置100ml棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每ml含沒食子酸0.05mg）。

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密量取對照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml棕色瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1ml，再分別加入11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法在760nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

y=69.9041X-0.0057，r=0.9994。

3.供試品溶液的制備。取南五味子粉末約2g，精密稱定，置250ml棕色量瓶中，加水150ml，放置過夜，超聲處理10分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置（使固體物沉淀），濾過，棄去初濾液50ml，精密量取續(xù)濾液20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

4.測定法：總酚。精密量取供試品溶液2ml，置25ml棕色瓶容量中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1ml”起，加水10ml，依次測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量（mg），計(jì)算，即得。

不被吸附的多酚。精密量取供試品溶液25ml，加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞錐形瓶中，密塞，置30℃水浴中保溫1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，取出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1ml”起，加水10ml，依次測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量（mg），計(jì)算，即得。按下式計(jì)算鞣質(zhì)的含量：

鞣質(zhì)含量=總酚量-不被吸附的多酚量。

5.精密度試驗(yàn)。精密量取沒食子酸對照品溶液2.0ml，置25ml棕色瓶容量中，加入磷鉬鎢酸試液1ml，加水10ml，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法在760nm的波長處測定吸光度，連續(xù)測定5次，測得RSD值為0.29%，表明樣品的精密度良好。

6.穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密量取沒食子酸對照品溶液2.0ml，置25ml棕色瓶容量中，加入磷鉬鎢酸試液1ml，加水10ml，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，分別在5min，10min，15min，30min，45min，60min放置時(shí)間點(diǎn)，測定其吸光度，測得RSD值為1.28%，表明樣品的穩(wěn)定性良好。

7.重復(fù)性試驗(yàn)。取南五味子粉末約2g，精密稱定，按2.3項(xiàng)下方法制備樣品液，用第4節(jié)方法進(jìn)行分析，測定樣品中鞣質(zhì)的含量，測得RSD值為0.64%，表明樣品的重復(fù)性良好。

8.加樣回收率試驗(yàn)。取南五味子粉末約2g，精密稱定，按第3節(jié)方法制備樣品液，加入一定量的沒食子酸對照品，進(jìn)行紫外-可見分析，計(jì)算加樣回收率，測得RSD值為1.36%，表明樣品的加樣回收率良好。

三、測定結(jié)果

以紫外-可見分光光度法結(jié)合干酪素法分別測定生長期為9月15日，9月25日，10月5日，10月15日，10月25日，11月5日的南五味子樣品。結(jié)果見表1。

表1 貴州GAP基地南五味子不同生長鞣質(zhì)的含量

四、討論

1.以紫外-可見分光光度法結(jié)合干酪素法測定不同生長期南五味子鞣質(zhì)含量的變化趨勢是相同的，在青果時(shí)鞣質(zhì)的含量最高，隨著南五味子果實(shí)的成熟，鞣質(zhì)含量的含量逐漸降低。

2.紫外-可見分光光度法結(jié)合干酪素法測定南五味子中鞣質(zhì)的含量與2000版《中華人民共和國藥典》中皮粉法相比，具有樣品取樣量少，快速，靈敏等特點(diǎn)。但影響其準(zhǔn)確性的主要因素是干酪素中微量雜質(zhì)的含量