江蘇省徐州醫(yī)藥高等職業(yè)學校王繼光湘潭職業(yè)技術學院李君

RP-HPLC法測定不同時期山茱萸中馬錢苷的含量

江蘇省徐州醫(yī)藥高等職業(yè)學校王繼光
湘潭職業(yè)技術學院李君

山茱萸來源于山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥成熟果肉，收載于《中國藥典》2005年版一部，為中醫(yī)臨床常用藥，也是六味地黃丸等常用中成藥的原料?，F(xiàn)代研究證明馬錢苷是山茱萸藥材主要活性成分之一。本文以山茱萸中馬錢苷含量變化為依據(jù)，RP-HPLC法測定不同生長時期，不同產(chǎn)地山茱萸中馬錢苷的含量。

一、材料

1.樣品。山茱萸樣品分別于2008年8月～11月采制河南西峽山茱萸GAP基地、浙江臨安山茱萸GAP基地、陜西佛坪山茱萸GAP基地，經(jīng)王繼光主任中藥師鑒定為山茱萸科植物山茱萸（CornusofficinalisSieb．etZucc.）的果實。

2.主要儀器。島津LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-20A型紫外檢測器，CTO-10ASvp型柱溫箱，CBM-102型工作站，電子天平（BS224S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

3.試劑。馬錢苷對照品（中國藥品生物制品檢定所），甲醇、異丙醇、乙腈為色譜純（天津四友天津四友精細化學品有限公司），所用其他試劑均為分析純。

二、實驗方法

1.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈—水（15∶85）為流動相，檢測波長240nm。

2.對照品溶液的制備。精密稱取馬錢苷對照品適量，加80%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

3.供試品溶液的制備。取本品粉末（過三號篩）約0.1g。精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

4.測定法。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ l，注入液相色譜，測定，即得，見圖1、圖2。

圖1 馬錢苷標準品

圖2 馬錢苷樣品

5.準確稱取馬錢苷對照品2.01mg，80%甲醇定溶于5ml量瓶中，制成對照品溶液。依次以5，10，15，20，25μl進樣，作HPLC分析。以峰面積（X）為橫坐標，馬錢苷對照品含量（Y）為縱坐標，得回歸方程為：y=384308x+25510，r＝0.9996，說明馬錢苷在5.01-24.6μg范圍內(nèi)線性良好。

圖3 馬錢苷對照品含量回歸方程

6.精密度試驗。稱取山茱萸干燥果肉粗粉0.1g，按上述方法制備樣品液，連續(xù)進樣5次，計算RSD值，結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗

表2 河南西峽山茱萸不同生長期馬錢苷的含量

表3 浙江臨安山茱萸不同生長期馬錢苷的含量

7.穩(wěn)定性實驗。同一樣品分別在0，2，4，6，8，12h測定，計算RSD值。

8.重現(xiàn)性實驗。平行稱取山茱萸干燥果肉粗粉0.1g5份，按上述方法制備樣品液，進行HPLC分析，計算RSD值。

表4 陜西佛坪山茱萸不同生長期馬錢苷的含量

9.加樣回收率實驗。精密稱取山茱萸干燥果肉粗粉5份，加入一定量的馬錢苷對照品，按上述方法制備樣品液，進行HPLC分析，計算加樣回收率。

三、實驗結(jié)果與分析

以HPLC法分別測定河南西峽、浙江臨安、陜西佛坪山茱萸生長期為8月15日，8月30日，9月15日，9月25日，10月5日，10月15日，10月25日山茱萸樣品中馬錢苷的含量測定。結(jié)果見表2～表4。

四、討論

實驗結(jié)果顯示，不同生長期、不同產(chǎn)地山茱萸中馬錢苷含量的變化趨勢是相同的，即隨著山茱萸果實的成熟，馬錢苷含量逐漸升高，在果實成熟時馬錢苷的含量最高。不同產(chǎn)區(qū)的山茱萸在同一生長期馬錢苷的含量存在差異，可能是因為不同的山茱萸基地，山茱萸生長環(huán)境的土壤、水分、溫度等條件不同的所致，具體原因有待進一步研究。

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