江蘇省徐州醫(yī)藥高等職業(yè)學(xué)校王繼光湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院李君

RP-HPLC法測(cè)定不同時(shí)期山茱萸中馬錢苷的含量

江蘇省徐州醫(yī)藥高等職業(yè)學(xué)校王繼光
湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院李君

山茱萸來(lái)源于山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥成熟果肉，收載于《中國(guó)藥典》2005年版一部，為中醫(yī)臨床常用藥，也是六味地黃丸等常用中成藥的原料。現(xiàn)代研究證明馬錢苷是山茱萸藥材主要活性成分之一。本文以山茱萸中馬錢苷含量變化為依據(jù)，RP-HPLC法測(cè)定不同生長(zhǎng)時(shí)期，不同產(chǎn)地山茱萸中馬錢苷的含量。

一、材料

1.樣品。山茱萸樣品分別于2008年8月～11月采制河南西峽山茱萸GAP基地、浙江臨安山茱萸GAP基地、陜西佛坪山茱萸GAP基地，經(jīng)王繼光主任中藥師鑒定為山茱萸科植物山茱萸（CornusofficinalisSieb．etZucc.）的果實(shí)。

2.主要儀器。島津LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-20A型紫外檢測(cè)器，CTO-10ASvp型柱溫箱，CBM-102型工作站，電子天平（BS224S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

3.試劑。馬錢苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），甲醇、異丙醇、乙腈為色譜純（天津四友天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司），所用其他試劑均為分析純。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈—水（15∶85）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)240nm。

2.對(duì)照品溶液的制備。精密稱取馬錢苷對(duì)照品適量，加80%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

3.供試品溶液的制備。取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.1g。精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

4.測(cè)定法。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ l，注入液相色譜，測(cè)定，即得，見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 馬錢苷標(biāo)準(zhǔn)品

圖2 馬錢苷樣品

5.準(zhǔn)確稱取馬錢苷對(duì)照品2.01mg，80%甲醇定溶于5ml量瓶中，制成對(duì)照品溶液。依次以5，10，15，20，25μl進(jìn)樣，作HPLC分析。以峰面積（X）為橫坐標(biāo)，馬錢苷對(duì)照品含量（Y）為縱坐標(biāo)，得回歸方程為：y=384308x+25510，r＝0.9996，說(shuō)明馬錢苷在5.01-24.6μg范圍內(nèi)線性良好。

圖3 馬錢苷對(duì)照品含量回歸方程

6.精密度試驗(yàn)。稱取山茱萸干燥果肉粗粉0.1g，按上述方法制備樣品液，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算RSD值，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 精密度試驗(yàn)

表2 河南西峽山茱萸不同生長(zhǎng)期馬錢苷的含量

表3 浙江臨安山茱萸不同生長(zhǎng)期馬錢苷的含量

7.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。同一樣品分別在0，2，4，6，8，12h測(cè)定，計(jì)算RSD值。

8.重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)。平行稱取山茱萸干燥果肉粗粉0.1g5份，按上述方法制備樣品液，進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算RSD值。

表4 陜西佛坪山茱萸不同生長(zhǎng)期馬錢苷的含量

9.加樣回收率實(shí)驗(yàn)。精密稱取山茱萸干燥果肉粗粉5份，加入一定量的馬錢苷對(duì)照品，按上述方法制備樣品液，進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算加樣回收率。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

以HPLC法分別測(cè)定河南西峽、浙江臨安、陜西佛坪山茱萸生長(zhǎng)期為8月15日，8月30日，9月15日，9月25日，10月5日，10月15日，10月25日山茱萸樣品中馬錢苷的含量測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2～表4。

四、討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同生長(zhǎng)期、不同產(chǎn)地山茱萸中馬錢苷含量的變化趨勢(shì)是相同的，即隨著山茱萸果實(shí)的成熟，馬錢苷含量逐漸升高，在果實(shí)成熟時(shí)馬錢苷的含量最高。不同產(chǎn)區(qū)的山茱萸在同一生長(zhǎng)期馬錢苷的含量存在差異，可能是因?yàn)椴煌纳杰镙腔兀杰镙巧L(zhǎng)環(huán)境的土壤、水分、溫度等條件不同的所致，具體原因有待進(jìn)一步研究。

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