李菁，王穎莉，李鵬，徐珍，謝茵，田青平#（.山西醫(yī)科大學藥學院，太原市 03000；.山西中醫(yī)學院，太原市 03004）

高載藥量萘普生微乳的制備及其抗炎鎮(zhèn)痛作用實驗研究Δ

李菁1＊，王穎莉2，李鵬1，徐珍1，謝茵1，田青平1#（1.山西醫(yī)科大學藥學院，太原市 030001；2.山西中醫(yī)學院，太原市 030024）

目的：制備載藥量高的萘普生微乳，并對其進行抗炎、鎮(zhèn)痛作用的初步藥效學研究。方法：以聚山梨酯-80為表面活性劑、十四酸異丙酯為油相、乙醇為助表面活性劑，用相轉(zhuǎn)變溫度法制備萘普生微乳。以1%的雙氯芬酸鈉凝膠劑作為陽性對照藥，低、中、高劑量的萘普生微乳分組局部涂抹給藥后分別用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹、卡拉膠誘發(fā)大鼠足跖腫脹以研究萘普生微乳的抗炎作用；用熱板法和扭體法觀察萘普生微乳對小鼠的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果：所制微乳載藥量達4.2%。中、高劑量的萘普生微乳給藥后能顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹及卡拉膠所致大鼠足跖腫脹，并能明顯提高小鼠的痛閾，減少小鼠醋酸刺激的扭體次數(shù)（P＜0.01或P＜0.05）。與陽性對照藥比較，中、高劑量的萘普生微乳均顯示相近或更強的抗炎鎮(zhèn)痛作用。結(jié)論：采用相轉(zhuǎn)變溫度法制備的萘普生微乳對大鼠及小鼠的炎癥及痛反應(yīng)模型均有抑制作用，有望成為萘普生的新型給藥制劑。

萘普生微乳；藥效學；抗炎鎮(zhèn)痛作用；大鼠；小鼠

萘普生是一類優(yōu)良的非甾體類抗炎藥，對類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、強直性脊椎炎、痛風、運動系統(tǒng)（如關(guān)節(jié)、肌肉及腱）的慢性變性疾病及輕、中度疼痛如痛經(jīng)等，均有肯定療效[1]。萘普生口服吸收迅速而完全，單次給藥后2～4 h血漿濃度達峰值，但缺點是口服給藥易引起“峰谷效應(yīng)”及對胃黏膜有損傷[2]。

經(jīng)皮給藥是非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥有效給藥途徑之一，它可以提高患部藥物濃度，增強局部抗炎作用，避免對胃腸道的不良反應(yīng)[3]。微乳是一種外觀透明、各向同性、能夠自發(fā)形成、粒徑小于100 nm的熱力學穩(wěn)定體系。它的最大優(yōu)點是能提高難溶性藥物的溶解度和經(jīng)皮滲透能力，因而被廣泛用作水難溶性非甾體類抗炎藥如美洛昔康、布洛芬、酮洛芬[4～6]的局部透皮給藥載體。本研究以聚山梨酯-80為表面活性劑、十四酸異丙酯為油相、乙醇為助表面活性劑，用相轉(zhuǎn)變溫度法制備了萘普生微乳，并對其進行了抗炎鎮(zhèn)痛作用的初步藥效學研究。

1 材料

1.1 動物

由山西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。昆明種小鼠，♂，體質(zhì)量22～25 g；♀，體質(zhì)量18～22 g，動物合格證號：醫(yī)動字第090102。Wistar大鼠，♂，體質(zhì)量150～170 g，動物合格證號：醫(yī)動字第090101。

1.2 試藥

萘普生原料藥（浙江車頭制藥有限公司，批號：N070708，含量：99.6%）；聚山梨酯-80（天津基準化學試劑有限公司）；肉豆蔻酸異丙酯（IPM，上海邦成化工有限公司）；二甲苯（分析純，天津市天新精細化工開發(fā)中心）；卡拉膠（天津市博迪化工有限公司）；雙氯芬酸鈉凝膠（武漢馬應(yīng)龍藥業(yè)集團股份有限公司，批號：H10950214，規(guī)格：0.1g·10g－1）；萘普生微乳（山西醫(yī)科大學藥學院制備，批號：G001，載藥量：4.2%）；其余試劑均為色譜純或分析純。

1.3 儀器

FA1104型電子天平（上海民橋精密科學儀器有限公司）；千分尺（北京第二量具廠）；8 mm打孔器（黃驊市亞龍儀器儀表廠）。

2 方法

2.1 微乳的制備

以聚山梨酯-80為表面活性劑、乙醇為助表面活性劑、十四酸異丙酯為油相，按表面活性劑與助表面活性劑質(zhì)量比為1∶1，油相與混合表面活性劑質(zhì)量比為1∶9，水含量為60%，用水滴定法制備空白微乳。

藥物只有溶解后才能透過皮膚[4～6]。萘普生在聚山梨酯-80中的溶解度高出在IPM（10.25 mg·mL－1，32℃）中10倍，因此本文采用先將萘普生溶解在表面活性劑中的方法制備載藥微乳。萘普生用藥量大（口服劑量為1 500～2 500 mg· d－1），低的載藥量可能影響其臨床應(yīng)用。為提高微乳載藥量，本文使用了相轉(zhuǎn)變溫度法。將萘普生溶入聚山梨酯-80后，按上述空白微乳處方比例加入助表面活性劑、油相，攪拌均勻后，在磁力攪拌下，逐滴加入蒸餾水，直至混合均勻后，加熱到80℃以上，當混合物變混濁，并出現(xiàn)泡沫后，撤去熱源并在室溫下冷卻，直至澄清、透明、微黃色的微乳形成。本文以載藥量為4.2%的萘普生微乳進行初步藥效學研究。

2.2 抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗

取小鼠50只，♂，隨機均分為5組，即低、中、高劑量（27、54、162 mg·kg－1）的微乳組，空白對照組（相當于中劑量組給藥體積的空白微乳）和1%的雙氯芬酸鈉凝膠（陽性對照組，0.02 g）[7]。給藥1 h后小鼠右耳涂20 μL二甲苯致炎，以左耳作對照。30 min后頸椎脫臼處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑8 mm的不銹鋼圓沖沿耳緣相同部位沖下，用電子天平稱重，以左右耳重差作為腫脹度，比較組間差異，并計算抑制率，腫脹抑制率＝（空白對照組耳腫脹度一給藥組耳腫脹度）/空白對照組耳腫脹度×100%。

2.3 抑制卡拉膠致大鼠足跖腫脹實驗

取大鼠50只，♂，隨機均分成5組。給藥前用千分尺測定各大鼠右后肢的正常足上下徑。低、中、高劑量組分別按18、36、108 mg·kg－1的萘普生微乳給藥。陽性對照組大鼠涂抹1%的雙氯芬酸鈉凝膠0.2 g[7]?？瞻讓φ战M則給予相當于中劑量組給藥體積的空白微乳。給藥1 h后，于各鼠右后足跖中部皮下注入1%的卡拉膠0.1 mL致炎。于致炎后30、60、90、120、240、360 min，用千分尺測定致炎側(cè)足的上下徑，計算各組的腫脹度和最大腫脹抑制率。腫脹抑制率＝（空白對照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度）/空白對照組平均腫脹度×100%。腫脹度＝致炎后的足上下徑－致炎前的足上下徑。

2.4 抑制醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實驗[3]

取小鼠120只，♀♂各半，隨機均分為5組。各組小鼠用8%硫化鈉腹部去毛，去毛面積不小于1.5×1.5 cm2。在去毛處，低、中、高劑量組分別按27、54、162 mg·kg－1的萘普生微乳給藥。陽性對照組涂抹1%的雙氯芬酸鈉凝膠0.02 g?？瞻讓φ战M則給予相當于中劑量組給藥體積的空白微乳。給藥30 min后每只小鼠腹腔注射0.6%的醋酸0.2 mL。觀察記錄注射致痛劑后15 min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，計算鎮(zhèn)痛抑制率。鎮(zhèn)痛抑制率＝（空白對照組扭體次數(shù)－給藥組扭體次數(shù)）/空白對照組扭體次數(shù)×100%。

2.5 熱板法測定小鼠痛閾值

將熱板置于水浴槽上并與水面接觸，調(diào)節(jié)恒溫裝置，控制水溫為（55±0.5）℃。將小鼠逐只放在熱板上，測定各小鼠的正常痛反應(yīng)（舔后足或抬后足并回頭）時間，即痛閾值。每只測2次，每次間隔5 min，以平均值在5～30 s內(nèi)為合格。選出初試合格的♀小鼠120只，隨機平均分為5組。萘普生微乳低、中、高劑量組分別按27、54、162 mg·kg－1給藥。陽性對照組涂抹1%的雙氯芬酸鈉凝膠0.02 g[7]?？瞻讓φ战M則給予相當于中劑量組給藥體積的空白微乳。給藥后分別記錄15、30、45、60、90、120 min時小鼠的痛閾值，如小鼠在熱板上60 s無反應(yīng)按60 s計算。用下列公式計算痛閾提高百分率：痛閾提高百分率＝（用藥后痛閾值－用藥前痛閾值）/用藥前痛閾值× 100%[8]。

2.6 統(tǒng)計學分析

3 結(jié)果與分析

3.1 萘普生微乳對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

各組小鼠耳廓腫脹度及抑制率結(jié)果見表1。

表1 各組小鼠耳廓腫脹度及抑制率比較（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of ear edema in mice and inhibition rate among those groups（±s，n＝10）

表1 各組小鼠耳廓腫脹度及抑制率比較（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of ear edema in mice and inhibition rate among those groups（±s，n＝10）

與陽性對照組比較：＊P＜0.05，#P＞0.05vs.positive control group：＊P＜0.05，#P＞0.05

組別空白對照組陽性對照組萘普生微乳低劑量組萘普生微乳中劑量組萘普生微乳高劑量組劑量/mg·kg－1/ 10 27 54 162腫脹度/mg 14.8±3.1 5.4±2.6 13.1±5.3＊7.4±4.2#5.4±2.7#抑制率/% / 63.7 12.3 51.2 63.9

由表1可見，與空白對照組比較，萘普生微乳中、高劑量組抑制率分別為51.2%和63.9%，可明顯抑制二甲苯所致小鼠的耳廓腫脹（P＜0.05）。低劑量組抑制作用不明顯，與空白對照組比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。萘普生中、高劑量組與陽性對照組比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但低劑量組有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。

3.2 萘普生微乳對卡拉膠致足跖腫脹作用的影響

各組大鼠足跖腫脹度及抑制率結(jié)果見表2。

如表2所示，卡拉膠致大鼠足跖腫脹作用在致炎后60～90 min達到高峰。與空白對照組比較，萘普生中、高劑量組能夠顯著抑制卡拉膠所致大鼠的足跖腫脹，低劑量組也表現(xiàn)出一定的抑制作用。低劑量組在2 h以后，抑制作用幾乎消失；中劑量組在2 h抑制作用最強，之后逐漸減弱；高劑量組在2 h后抑制作用增強，直至6 h時還能維持較高的抗炎作用，抑制率達60%以上。

3.3 萘普生微乳對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

各組小鼠扭體反應(yīng)結(jié)果見表3。

如表3所示，與空白對照組比較，萘普生各劑量組和陽性對照組均能明顯抑制醋酸所致小鼠腹部疼痛，減少扭體反應(yīng)的發(fā)生（P＜0.05）。萘普生各劑量組的抑制作用具有明顯的劑量依賴性。與陽性對照組比較，萘普生中、高劑量組無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），低劑量組有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。

表2 各組大鼠足跖腫脹度及抑制率比較（±s，n＝10）Tab 2 Comparison of pedal swelling in rats and inhibition rate among those groups（±s，n＝10）

表2 各組大鼠足跖腫脹度及抑制率比較（±s，n＝10）Tab 2 Comparison of pedal swelling in rats and inhibition rate among those groups（±s，n＝10）

與空白對照組比較：＊P＞0.05，#P＜0.05，△P＜0. 01；與陽性對照組比較：▲P＞0.05，☆P＜0.05vs.blank control group：＊P＞0.05，#P＜0.05，△P＜0. 01；vs.positive control group：▲P＞0.05，☆P＜0.05

組別空白對照組陽性對照組萘普生微乳低劑量組萘普生微乳中劑量組萘普生微乳高劑量組腫脹度/mm 30 min 6.82±2.34 3.42±0.24#5.23±0.45#☆3.98±1.02#▲2.79±0.42△▲60 min 7.26±2.61 3.72±0.68#5.48±1.42#▲3.34±0.78#▲2.92±1.06△▲90 min 7.73±1.22 4.02±0.49△5.46±2.12#▲3.72±0.49#▲2.74±0.56△▲120 min 6.74±0.52 2.54±0.72#4.74±1.23#☆3.12±0.24#▲2.52±0.23△▲240 min 5.02±0.47 2.23±0.46#3.72±1.34＊☆2.47±0.53#▲1.54±0.63△☆360 min 4.36±0.78 2.34±0.42#3.64±0.28＊▲2.32±0.68#▲1.26±0.24#☆2 h抑制率/% / 63.1 29.4 54.2 62.4

表3 各組小鼠扭體次數(shù)及抑制率比較（±s，n＝12）Tab 3 Writhing times and inhibition rate in each group（±s，n＝12）

表3 各組小鼠扭體次數(shù)及抑制率比較（±s，n＝12）Tab 3 Writhing times and inhibition rate in each group（±s，n＝12）

與陽性對照組比較：＊P＜0.05，#P＞0.05vs.positive control group：＊P＜0.05，#P＞0.05

組別空白對照陽性對照組萘普生微乳低劑量組萘普生微乳中劑量組萘普生微乳高劑量組劑量/mg·kg－1/ 10 27 54 162扭體次數(shù)29.2±7.4 13.8±9.2 19.4±6.8＊15.8±5.7#8.5±4.6#抑制率/% / 53.8 32.8 46.1 70.2

3.4 萘普生微乳對小鼠痛閾的影響

各組小鼠不同時間的痛閾提高百分率結(jié)果見表4。

如表4所示，與空白對照組比較，給藥后陽性對照組和高、中劑量的萘普生組小鼠痛閾提高百分率明顯升高。萘普生低劑量組對小鼠痛閾的提高程度小，45 min時達最大，但僅有35.6%，之后幾乎沒有改變。與陽性對照比較，萘普生中劑量組痛閾提高百分率無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。高劑量萘普生組與空白對照組比較有顯著性差異，在120 min內(nèi)鎮(zhèn)痛作用逐漸增強，且在120 min時達到最大，痛閾提高率達98%以上。

4 討論

表4 各組小鼠痛閾提高百分率比較（±s，n＝12）Tab 4 Rates of threshold of pain in each group（±s，n＝12）

表4 各組小鼠痛閾提高百分率比較（±s，n＝12）Tab 4 Rates of threshold of pain in each group（±s，n＝12）

與空白對照組比較：＊P＞0.05，#P＜0.05，△P＜0. 01；與陽性對照組比較：▲P＞0.05，☆P＜0.05，★P＜0.01vs.blank control group：＊P＞0.05，#P＜0.05，△P＜0. 01；vs.positive control group：▲P＞0.05，☆P＜0.05，★P＜0.01

組別空白對照組陽性對照組萘普生微乳低劑量組萘普生微乳中劑量組萘普生微乳高劑量組劑量/mg· kg－1/ 10 27 54 162給藥前痛閾/s 14±5.3 13±6.8 14±2.6 16±2.8 15±3.4痛閾提高百分率/% 15 min 10.6±4.7 41.2±8.2#29.2±18.3#▲49.2±19.2#▲64.8±16.7△▲30 min 12.2±3.2 43.6±12.7#31.4±16.7#▲51.2±23.6#▲71.2±43.4△▲45 min 16.1±2.7 60.3±21.4△35.6±24.4#☆60.4±32.8△▲76.3±22.6△▲60 min 14.9±8.2 92.2±17.6△31.7±15.6#★62.7±22.4△▲81.2±37.4△▲90 min 20.9±3.6 81.4±36.5△27.2±22.4＊★61.2±23.6#▲94.2±54.6△▲120 min 22.1±9.4 60.3±21.6#26.7±13.4＊☆53.8±40.3#▲98.2±43.7△☆

筆者發(fā)現(xiàn)，以相轉(zhuǎn)變溫度法制備萘普生微乳，可使微乳的載藥量由原來最大值2.12%提高到4%以上。前期試驗結(jié)果表明，微乳對萘普生的增溶機制是萘普生與表面活性劑在微乳中可形成氫鍵。萘普生分子結(jié)構(gòu)中有羥基和羧基，本身能形成氫鍵；表面活性劑聚山梨酯-80分子結(jié)構(gòu)中也有羥基和羰基，本身也能形成氫鍵。因加熱有助于舊鍵的斷裂和新鍵的形成，當采用相轉(zhuǎn)變溫度法時，原來分子本身之間的氫鍵斷裂，形成更多的萘普生與聚山梨酯-80之間的氫鍵，使微乳的增溶能力增強。

本文以市售的1%雙氯芬酸鈉凝膠為陽性對照藥，對萘普生微乳外用后的抗炎和鎮(zhèn)痛作用進行了初步探討。實驗表明，低、中、高劑量的萘普生微乳能劑量依賴性地抑制醋酸致小鼠的扭體反應(yīng)。中、高劑量的微乳能顯著提高小鼠的痛閾，顯示出與陽性對照藥相近或更優(yōu)的鎮(zhèn)痛作用。

本實驗以二甲苯致小鼠耳廓腫脹和卡拉膠致大鼠足跖腫脹實驗來考查萘普生微乳外用后的抗炎效果。在卡拉膠誘發(fā)大鼠足跖腫脹實驗中，筆者用千分尺厚度測量法計算腫脹度，避免了容積法測量時要將足跖多次浸泡在水中而引起的對藥效的影響?？寡讓嶒灲Y(jié)果表明，低、中、高劑量的萘普生微乳對二甲苯致小鼠耳廓腫脹和卡拉膠致大鼠足跖腫脹都有不同程度的抑制作用，萘普生中、高劑量組的抗炎效果更為顯著。

綜上所述，萘普生微乳局部外用后表現(xiàn)出較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，表明萘普生經(jīng)皮吸收效果良好，對急性炎癥和腫脹都有肯定的療效，為下一步開發(fā)其局部外用制劑提供了一定的基礎(chǔ)。

[1]張倫.萘普生市場透析[J].中國藥房，2003，14（6）：326. [2]Brogden RN，Heel RC，Speight TM，et al.Naproxen up to date：a review of its pharmacological properties and therapeutic efficacy and use in rheumatic disease and pain states[J].Drugs，1979，18（4）：241.

[3]楊其蓮，盧靜，張瑞雯，等.艾司氟比洛芬凝膠抗炎鎮(zhèn)痛作用的藥效學研究[J].中國新藥與臨床雜志，2006，25（4）：266.

[4]Yuan Y，Li SM，Mo FK，et al.Investigation of microemulsion system for transdermal delivery of meloxicam[J].Int J Pharm，2006，321（9）：117.

[5]陳華兵，翁婷，常雪靈.布洛芬微乳的制備及其透皮吸收研究[J].中國藥學雜志，2004，39（1）：42.

[6]Rhee YS，Choi JG，Chi SC，et al.Transdermal delivery of keto-profen using microemulsions[J].Int J Pharm，2001，228：161.

[7]徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：719、714、695．

[8]Ribeiro RA，Vale ML，F(xiàn)erreira SH，et al.Analgesic effect of thalidomide on inflammatory pain[J].Eur J Pharmacol，2000，391（1～2）：97．

Study on Preparation of Naproxen Microemulsion with High Drug-loading Rate and Its Anti-inflammatory and Analgesic Effect

LI Jing，LI Peng，XU Zhen，XIE Yin，TIAN Qing-ping（Dept.of Pharmacy，Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China）
WANG Ying-li（Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan 030024，China）

OBJECTIVE：To prepare Naproxen microemulsion with high drug-loading rate and study its anti-inflammatory and analgesic effect.METHODS：Naproxen microemulsion was prepared by phase transfer temperature（PIT）method with polysorbate-80 as surfactants，alcohol as cosurfactant and isopropyl myristate as oil phase.1%dichlofenac sodium gel was used as positive control.High-dose group，medium-dose group and low-dose group were treated with Naproxen microemulsion.Then xylene and carrageenan were used to induce ear edema in mice and pedal swelling in rats respectively in order to study anti-inflammatory effect of Naproxen microemulsion.The hot-plate test and writhing test were adopted to study the analgesic effect.RESULTS：Drug-loading rate of preparation reached 4.2%.Xylene-inducing ear edema in mice and carrageen-inducing pedal swelling in rats were relieved significantly by treating with middle dose and high dose Naproxen microemulsion.The threshold of pain in mice was also increased and writhing times caused by acetic acid decreased（P＜0.01 or P＜0.05）.Medium dose and high dose Naproxen microemulsion was equal or superior to positive control in anti-inflammatory and analgesic effect.CONCLUSION：Naproxen microemulsion prepared by PIT method shows obvious anti-inflammatory and analgesic effect in mice and rats，which may be a new type of naproxen preparation.

Naproxen microemulsion；Pharmacodynamics；Anti-inflammatory and analgesic effect；Rats；Mice

R 965；R971+.4

A

1001-0408（2010）05-0406-03

2009-06-03

2009-08-03）

Δ山西省科技廳農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項目資助（2007032013）

＊碩士研究生。研究方向：微乳透皮給藥系統(tǒng)。E-mail：jing. lee@163.com

#通訊作者：副教授，博士。研究方向：藥理學。電話：0351-4690955。E-mail：tianqp123456@163.com