霍寧波

（濱州職業(yè)學(xué)院家紡學(xué)院，山東 濱州 256603）

乳癖消貼片中標(biāo)示成分及殘留溶劑的含量測定*

霍寧波

（濱州職業(yè)學(xué)院家紡學(xué)院，山東 濱州 256603）

建立了貼片中標(biāo)示成分芍藥苷含量的HPLC分析方法和貼片中各種殘留溶劑含量的GC分析方法。樣品經(jīng)甲醇提取，離心分離后，以乙腈-水（體積比16:84，HAc 0.4%）為流動相，選擇ODS-2 Hypersil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）色譜柱，測定芍藥苷含量。貼片基質(zhì)經(jīng)處理，以GC內(nèi)標(biāo)法測定殘留溶劑含量。結(jié)果表明HPLC法的精密度、重現(xiàn)性和回收率良好；GC分析測得乙酸乙酯、異丙醇、乙醇三種殘留溶劑，貼片中殘留溶劑總量為2.1×10-4。

乳癖消；壓敏膠貼片；芍藥苷；殘留溶劑；含量測定

乳癖消浸膏由鹿角、蒲公英、昆布等15味中藥提取而成，是一種治療乳腺增生急性乳腺炎等疾病的中藥復(fù)方。乳癖消貼片是將乳癖消浸膏溶解在丙烯酸酯壓敏膠中制得的中藥浸膏壓敏膠貼片。浸膏中成分復(fù)雜，同時壓敏膠基質(zhì)的干擾會影響該貼片中有效成分的測定[1]。水溶性成份芍藥苷是乳癖消浸膏中的主要藥效成分，含量比較高，便于測定。

文獻(xiàn)中關(guān)于芍藥苷的測定多針對片劑、顆粒制劑等[2-7]，目前未見關(guān)于HPLC法測定壓敏膠貼片中標(biāo)示成分含量的報道。因此本實驗選取芍藥苷作為標(biāo)示成分，建立HPLC法測定乳癖消壓敏膠貼片中芍藥苷含量，為該壓敏膠貼片的質(zhì)量控制提供參考。

外用制劑中殘留的有機溶劑會對皮膚產(chǎn)生刺激作用，引起皮膚過敏反應(yīng)，中國藥典中對外用制劑中殘留溶劑的限度（5×10-4）做了規(guī)定[8]。丙烯酸酯壓敏膠中含有多種溶劑，且基質(zhì)制備過程中需要加入溶劑，盡管在壓敏膠貼片制備過程中絕大部分干燥揮發(fā)，但其中可能含有少量溶劑殘留，本實驗建立了氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測定貼片中有機溶劑的殘留量[9-10]，以便于該壓敏膠貼片的質(zhì)量控制。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

電子天平；超級恒溫水??；LC-2010A高效液相色譜系統(tǒng)（日本島津）；Angilent 6890氣相色譜儀（美國安捷倫）；超聲儀；高速離心機。

乳癖消壓敏膠貼片（自制）；芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）；甲醇、乙腈（均為色譜純），乙酸乙酯、正庚烷、異丙醇、無水乙醇、苯、乙醚、丙酮（均為分析純）均購自天津科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心。HPLC法流動相使用前過0.45 μm微孔濾膜，并超聲脫氣30 min。

1.2 高效液相色譜條件

ODS-2 Hypersil C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）色譜柱；柱溫：30℃；檢測波長230 nm；流動相：乙腈-水（體積比16:84，HAc 0.4%）；流速1 mL/min；進(jìn)樣體積10μL。

1.3 氣相色譜條件

FID檢測器；FFAP柱（30 m×0.53 mm×1 μm）；柱溫65℃恒溫10 min；載氣：氮氣；流速2 mL/min；分流比50:1；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃。

1.4 樣品前處理

1.4.1 芍藥苷含量測定樣品前處理

取3 cm×3 cm貼片，除去背襯層，精密稱定基質(zhì)重量0.33 g，置100 mL具塞錐形瓶中，加入甲醇5 mL，超聲20 min，離心（5 000 r/min）10 min，取上清液備用。沉淀物再加甲醇5 mL，同法操作2次，充分抽提，合并上清液全部轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶甲醇定容，過濾。進(jìn)樣10μL，按外標(biāo)法以峰面積計算。

1.4.2 殘留溶劑含量測定樣品前處理

取3 cm×3 cm貼片，除去背襯層，精密稱定基質(zhì)重量0.33 g。乙醚溶解基質(zhì)后離心（8 000 r/min）10 min，取上層清液置10 mL容量瓶中，加入濃度為0.148 mg/mL的丙酮1 mL作內(nèi)標(biāo)物，乙醚定容，作為供試品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 HPLC分析中樣品提取劑的選擇

按“1.4.1”的方法，4份乳癖消貼片基質(zhì)質(zhì)量分別為0.083、0.082、0.079、0.082 g，分別用70%、80%、90%和100%甲醇-水溶液提取，25 mL容量瓶中定容，分別進(jìn)樣10μL測定峰面積。由表1可見以甲醇提取所得提取率最高。

2.2 HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取一定量的芍藥苷置25 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容。用甲醇將其稀釋成4.03、8.06、12.10、16.13和32.26 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣測定。以峰面積（Y）對質(zhì)量濃度（X，μg/mL）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：

表明芍藥苷質(zhì)量濃度在4.03～32.26μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。芍藥苷的HPLC圖見圖1。

2.3 HPLC分析方法的精密度、重現(xiàn)性與回收率

按含量測定項下制備的同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，測得質(zhì)量濃度分別為21.673、21.555、21.332、21.415、21.154 μg/mL，平均質(zhì)量濃度為21.426 μg/mL，RSD為0.94%。按含量測定方法取同一批樣品分別測定5次，測得樣品中芍藥苷質(zhì)量百分含量分別為 0.438%、0.429%、0.432%、0.441%、0.436%，平均含量為0.435%，RSD為1.09%。向5個25 mL容量瓶中分別加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL的已知濃度的芍藥苷對照品溶液，分別向其中加入供試品溶液2.0 mL，按供試品測定項下方法操作，測定得芍藥苷峰回收率為99.7%～102.8%，RSD為1.17%。

2.4 GC分析中內(nèi)標(biāo)物的選擇

為了消除手動進(jìn)樣造成的進(jìn)樣體積差異，實驗采用內(nèi)標(biāo)法測定。根據(jù)含有的乙酸乙酯、乙醇等溶劑的沸點、極性以及相互之間有無反應(yīng)，選擇合適的內(nèi)標(biāo)物。通過對苯乙酮和丙酮的考察，發(fā)現(xiàn)丙酮的保留時間適中且與其它溶劑峰分離度好，適合作為內(nèi)標(biāo)物。

2.5 GC色譜條件的選擇

可能存在的殘留有機溶劑的極性都較小，通過對HP-5柱和FFAP柱的考察，結(jié)果表明：HP-5柱出峰慢，受溶劑峰影響明顯，且各物質(zhì)分離度差，這可能是由于該柱為非極性柱的原因；弱極性的FFAP柱對各溶劑的分離效果較好。

由于各溶劑沸點較為接近，為避免各峰之間的干擾，本試驗選擇的柱溫升溫程序為柱溫65℃恒溫10 min。殘留溶劑對照品的GC色譜圖見圖2。

2.6 GC標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取乙酸乙酯、乙醇、異丙醇、正庚烷、甲苯至100 mL容量瓶中，以乙醚為溶劑，配制濃度分別為0.727、0.882、0.896、0.800、0.915 mg/mL的溶液。精確量取以上5種溶液各0.5、1、2、3、5 mL，分別轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，向以上各容量瓶加入0.74 mg/mL的丙酮1 mL作內(nèi)標(biāo)，乙醚定容做貯備液。分別進(jìn)樣0.2μL測定。以對照品與內(nèi)標(biāo)峰面積比Al/As為縱坐標(biāo)Y，以乙酸乙酯、乙醇、異丙醇、正庚烷、甲苯與內(nèi)標(biāo)物丙酮的質(zhì)量濃度比Cl/Cs為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：各溶劑線性關(guān)系良好，見表2。

2.7 樣品測定

氣相色譜法測得乙酸乙酯、異丙醇、乙醇三種殘留溶劑，未檢測到正庚烷、苯，且乳癖消貼片中殘留溶劑總量為2.1×10-4（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。

3 結(jié)論

本實驗采用HPLC法測定乳癖消貼片中的芍藥苷含量，方法操作簡單，與雜質(zhì)峰的分離度好，精密度高，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠；采用GC法測定了貼片中的殘留溶劑含量，結(jié)果符合2005版國家藥典小于5×10-4（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）的規(guī)定，為這種新開發(fā)的中藥外用制劑的質(zhì)量控制提供了參考。

[1]龐謗，楊欣，孫文基.高效液相色譜法測定篇著浸膏片中阿托品的含量[J].藥物分析雜志，2008，28（3）：414-416.

[2]李捷瑋，金柔男，李翔.多種中成藥中芍藥苷的含量測定[J].藥物分析雜志，2009，29（9）：1440-1443.

[3]陳春紅，韓俊琦，姚永強.HPLC法測定不同溶劑提取的赤芍中芍藥苷的含量[J].浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報，2006（9）：30-31.

[4]謝艷麗.高效液相色譜法測定乳癖消膠囊中芍藥苷的含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2009，6（6）：35-36.

[5]姜云云，潘亞菊，范國榮.HPLC法測定乳癖消片中芍藥苷含量[J].藥學(xué)實踐雜志，2007，25（5）：330-333.

[6]紀(jì)松崗，費揚，趙亮.高效液相色譜法同時測定牛黃降壓丸中芍藥苷和黃芩苷的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（4）：602-605.

[7]譚生建，劉剛，張華.梯度洗脫HPLC法測定抗栓保心片中芍藥苷和丹酚酸B的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（7）：110 4-1106.

[8]國家藥典委員會.中國藥典一部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1995.

[9]Min J.Yang，Janusz Pawliszyn.Headspace membrane extraction combined with multiplex gas chromatography and mass selective detector formonitoring of volatile organic compounds[J].Journal of Microcolumn Separations，1996，8（2）：89-98.

[10]張俊偉.藥物中有機殘留溶劑的測定方法概述[J].現(xiàn)代儀器，2004（3）：10-14.

Determination of Marked Component and Residual Solvents in Rupixiao Patch

HUO Ning-bo
（Department of Textile，Binzhou Vocational College，Shandong Binzhou 256603，China）

A HPLC and GC method was established to detect content of paeoniflorin and residual solvents.After the sample was extracted with methanol and separated by centrifuger，paeoniflorin content was detected with ODS-2 Hypersil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）column，using acetonitrile-water（v/v 16:84，HAc 0.4%）as mobile phase.After the matrix was dissolved by aether and separated by centrifuger，content of residual solvents was detected by using GC internal standard method.Results show that the RSD，reproducibility and recoveries of the method are good；Ethyl acetate，isopropanol and ethanol have been detected by GC，with the totall content of residual solvents 2.1×10-4.

Rupixiao；PSA Patch；Paeoniflorin；Residual Solvents；Determination of Content

0 657

A

1671-0460（2010）01-0102-04

2010-01-09

霍寧波（1980-），男，山東濱州人，助教，從事丙烯酸酯壓敏膠的相關(guān)研究。E-mail：ningbohuo@yahoo.com.cn。