徐佳亮, 藺慕會, 陳曉虹, 何志義, 白 璇, 呂 姣

缺血性卒中(ischemic stroke,IS)是一個復(fù)雜性狀的多基因遺傳病,遺傳變異決定了其遺傳易感性,但其確切的遺傳機(jī)制尚不清楚[1]。近年來,IS在遺傳學(xué)方面新的進(jìn)展主要集中在一個新的炎癥相關(guān)基因,即 ALOX5AP基因的研究上。ALOX5AP基因作為 IS的易感基因,是 2004年 DECODE[2]研究組首先鑒定出來的,此后 ALOX5AP基因遺傳變異與 IS的相關(guān)性在其他人群中也得到了驗(yàn)證。國內(nèi)的研究顯示 ALOX5AP基因第 1內(nèi)含子 SG13S114A/T多態(tài)性位點(diǎn),A等位基因與 IS的發(fā)病密切相關(guān),但另一部分研究結(jié)果則不一致。推測這種相互矛盾結(jié)果的得出與樣本含量不足有關(guān)。為此,本研究采用 Meta分析的方法,對目前國內(nèi)進(jìn)行的相關(guān)研究進(jìn)匯總分析,以期更有效地評價兩者之間的關(guān)系,提供循證醫(yī)學(xué)資料。

1 資料與方法

1.1 研究對象 通過收集公開發(fā)表的有關(guān)中國人群 ALOX5AP基因 SG13S114A/T多態(tài)性與 IS相關(guān)性的病例-對照研究資料,以其中的 IS患者為研究病例,以健康人群為對照組,觀察指標(biāo)為兩組基因型頻數(shù)為優(yōu)勢比值(OR),及等位基因頻數(shù)的 OR值。

1.2 資料來源 以缺血性卒中或腦梗死、5脂氧合酶激活蛋白基因或 ALOX5AP基因?yàn)橹黝}詞,聯(lián)合檢索 2004年至今的中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫,中國學(xué)術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫,萬方數(shù)據(jù)庫,及谷歌學(xué)術(shù)搜索引擎獲得全部中文文獻(xiàn)。并檢索同期 Medline在外文期刊發(fā)表的中國人資料,同時對萬方資料庫博士和碩士學(xué)位論文進(jìn)行檢索,將未公開發(fā)表的學(xué)位論資料納入本研究范圍。為避免上述電子數(shù)據(jù)庫未收錄和未發(fā)表的文獻(xiàn)資料,還對國內(nèi)一些大型學(xué)術(shù)會議的論文匯編進(jìn)行檢索。通過以上方法獲得有關(guān)中國人群 ALOX5AP基因 SG13S114A/T多態(tài)性與IS相關(guān)性的病例-對照研究文獻(xiàn)。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)及研究質(zhì)量控制 由神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師和流行病學(xué)工作者采用盲法獨(dú)立進(jìn)行文獻(xiàn)提取工作,并共同對文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評估取得一致性意見:(1)研究對象均為漢族人或以漢族人為主體,不包括少數(shù)民族為主體的研究;(2)均為獨(dú)立的研究,同一組資料重復(fù)報道者,取其資料完整的文獻(xiàn);(3)各文獻(xiàn)研究方法、診斷標(biāo)準(zhǔn)及對照組人群的納入標(biāo)準(zhǔn)相同;(4)符合 Hardy-Weinberg(H-W)遺傳平衡定律。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計 (1)對納入研究的基因型分布進(jìn)行 H-W平衡檢驗(yàn);(2)應(yīng)用漏斗圖初步分析納入的文獻(xiàn)是否存在明顯的發(fā)表偏倚,然后根據(jù)Egger法進(jìn)行偏倚檢驗(yàn)[3];(3)應(yīng)用 RVEMAN4.2(國際循證醫(yī)學(xué)協(xié)會組提供)統(tǒng)計軟件計算各個研究的SG13S114位點(diǎn)(AA+AT)/TT的 OR值,等位基因頻數(shù) A/T的 OR值,及其 95%CI;(4)以 Q檢驗(yàn)對各研究結(jié)果進(jìn)行同質(zhì)性檢驗(yàn),若無異質(zhì)性,則采用 Peto固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并,計算總 OR值,若存在顯著異質(zhì)性,則采用 D-L隨機(jī)效應(yīng)模型法進(jìn)行數(shù)據(jù)合并,檢驗(yàn)水準(zhǔn)取 0.05。

2 結(jié) 果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果 共檢出 10篇文獻(xiàn),有 4篇文獻(xiàn)是同組資料的重復(fù)性研究,取其中一篇資料完整的文獻(xiàn),其他 3篇被剔除;另有 2篇文獻(xiàn)報道的多態(tài)性位點(diǎn)為 SG13S100,也被剔除。最后納入本研究的為 5篇文獻(xiàn),包括 2篇學(xué)位論文,其余 3篇發(fā)表于中國科技核心期刊。5項(xiàng)研究中,IS組為 2620例,對照組為 2411例;所有入選病例均符合國際疾病分類第 9版(ICD9)的診斷標(biāo)準(zhǔn),且都符合 H-W遺傳平衡定律;有 4個研究結(jié)果顯示 SG13S114A/T多態(tài)性與 IS具有相關(guān)性,1個研究結(jié)果顯示沒有相關(guān)性。入選文獻(xiàn)的資料及基因型分布情況見表1,等位基因頻數(shù)分布見表2。

表1 入選文獻(xiàn)一般情況及 SG13S114A/T基因型分布

2.2 入選文獻(xiàn)的發(fā)表偏倚 對漏斗圖目測結(jié)果顯示,未見明顯偏倚(見圖1,圖2)。按 Egger法,(AA+AT)/TT的 OR值除以其標(biāo)準(zhǔn)誤與標(biāo)準(zhǔn)誤倒數(shù)所建立的直線回歸方程的 Y軸截距別為 0.042,95%CI為-2.248～2.333,包含 0,P=0.957;A/T的OR值除以其標(biāo)準(zhǔn)誤與標(biāo)準(zhǔn)誤倒數(shù)所建立的直線回歸方程的 Y軸截距別為-0.273,95%CI為-3.225～2.697,包含 0,P=0.788,因此可以認(rèn)為沒有顯著性偏倚存在。

表2 入選文獻(xiàn)SG13S114A/T等位基因頻數(shù)分布

圖1 SG13S114A/T基因型(AA+AT)/TT漏斗圖,橫軸為 OR值,縱軸為 OR值自然對數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)誤

圖2 SG13S114A/T等位基因 A/T漏斗圖,橫軸為 OR值,縱軸為 OR值自然對數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)誤

2.3 異質(zhì)性評估 同質(zhì)性檢驗(yàn)顯示,SG13S114A/T位點(diǎn)基因型(AA+AT)/TT的 OR值統(tǒng)計量 χ2=1.00,P=0.91;等位基因頻數(shù) A/T的OR值統(tǒng)計量 χ2=8.18,P=0.09,按照 α=0.05水準(zhǔn)認(rèn)為各研究的基因型結(jié)果和等位基因頻數(shù)結(jié)果之間的一致性均好。

2.4 研究對象基因型分析 根據(jù)同質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)用 Peto固定模型模型法合并數(shù)據(jù),計算 OR值,并繪制森林圖。5個研究合并后,SG13S114A/T位點(diǎn)(AA+AT)/TT合并的 OR值為 1.22,95%CI為1.09～1.36,OR值顯著性檢驗(yàn) Z值為 3.5,P＜0.05(見圖3);等位基因頻數(shù) A/T的 OR值為 1.05,95%CI為 0.96～1.14,OR值顯著性檢驗(yàn) Z值為 1.09,P=0.28(見圖4)。

3 討 論

目前針對 IS遺傳易感性獨(dú)立的關(guān)聯(lián)性研究均存在樣本量不足,統(tǒng)計校能低的缺點(diǎn)。通過 Meta分析,可以利用現(xiàn)有研究的數(shù)據(jù)彌補(bǔ)樣本量的不足提高統(tǒng)計效力,鑒定 IS有效的易感基因,同時也可以對 IS的遺傳危險因素行定量地研究。Meta分析中存在著各種偏倚,但以發(fā)表偏倚最為常見。漏斗形圖是初步判斷發(fā)表偏倚簡便易行的方法,但其缺點(diǎn)是只能對結(jié)果作定性的判斷。而 Egger法[3]可對發(fā)表偏倚作定量的評估,是漏斗形圖有效的補(bǔ)充。目前多將兩者聯(lián)合應(yīng)用檢驗(yàn)發(fā)表偏倚。本研究結(jié)果所示,根據(jù) Egger的線性回歸法,所建立的基因型和等位基因頻數(shù)統(tǒng)計效應(yīng)量的線性回歸方程 Y軸截距的95%CI均包含 0,且 P＞0.1,結(jié)合漏斗圖的目測結(jié)果,可以認(rèn)為沒有明顯的發(fā)表偏倚。

ALOX5AP基因編碼的產(chǎn)物是 5-脂氧合激活蛋白(5-Lipoxygenase activiting protein,FLAP),5-脂氧合酶(5-Lipoxygenase,5-LO)被 FLAP激活后可以將花生四烯酸轉(zhuǎn)化成白三烯(leukotriene,LT),LT被認(rèn)為是典型的炎癥細(xì)胞因子,因此 ALOX5AP基因也可以被為是炎癥因子的關(guān)鍵調(diào)控基因。2004年 DECODE研究組通過應(yīng)用全基因組掃描的方法發(fā)現(xiàn)ALOX5AP基因 HapA單倍型可以明顯增加北歐人群IS的遺傳易感性。這一結(jié)果引起了各國學(xué)者的極大關(guān)注,我國學(xué)者也相繼開展了 ALOX5AP基因多態(tài)性與 IS相關(guān)性的研究,但研究結(jié)果并不一致。

本研究在入選的有關(guān)第 1內(nèi)含子 SG13S114A/T多態(tài)性與中國人 IS相關(guān)性的 5個病例對照組比較中,4項(xiàng)研究報告該位點(diǎn)的遺傳變異與 IS密切相關(guān),Meta分析數(shù)據(jù)合并后結(jié)果顯示 SG13S114A/T位點(diǎn)AA基因型可以顯著增加我國人群 IS的遺傳易感性。該位點(diǎn)多態(tài)性增加 IS易感性的機(jī)制目前尚未完全明確,但多數(shù)研究提示,ALOX5AP基因在轉(zhuǎn)錄過程中 SG13S114位點(diǎn)的變異可能具有某種基因調(diào)控作用,導(dǎo)致 FLAP產(chǎn)生增多從而上調(diào) LT活性,從而加重動脈粥樣硬化的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致 IS的形成[9]。針對A等位基因研究顯示,4個獨(dú)立的研究均發(fā)現(xiàn)A等位基因與 IS存在相關(guān)性,但數(shù)據(jù)合并后,A/T的OR值為 1.05,P=0.28,沒有發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。究其原因可能是:(1)SG13S114A等位基因在人群中出現(xiàn)的頻率較低,而且納入本研究的文獻(xiàn)較少;(2)納入文獻(xiàn)的樣本量較小,導(dǎo)致 Meta分析統(tǒng)計校能較低;(3)在 ALOX5AP基因中存在其他的導(dǎo)致 IS易感性增加的遺傳變異。一項(xiàng)由 Zintzaras等[10]進(jìn)行的 Meta分析結(jié)果顯示,SG13S114A/T位點(diǎn)合并的 OR值為1.03,P=0.39與 IS無相關(guān)性,而 SG13S89G/A位點(diǎn)合并的 OR值為 1.25,P＜0.01與 IS相關(guān)。導(dǎo)致這種差異的形成,可能與人群遺傳背景的不同,研究方法,入選對象入選標(biāo)準(zhǔn),及性別構(gòu)成等有關(guān)。

圖3 SG13S114A/T基因型(AA+AT)/TT森林圖

圖4 SG13S114A/T等位基因頻數(shù)A/T森林圖

Meta分析作為一種現(xiàn)代科學(xué)研究中定量的文獻(xiàn)分析方法,在 IS遺傳學(xué)研究中的應(yīng)用越來越廣泛。相信隨著 ALOX5AP基因多態(tài)性和 IS相關(guān)性研究的深入和研究資料的積累,我們可以通過 Meta分析進(jìn)一步明確 ALOX5AP基因的遺傳變異對 IS發(fā)病機(jī)制的影響,及為 IS的早期診斷和綜合預(yù)防提供更多的依據(jù)。

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